Поверхнево-активна композиція “молюфіл” для відновлення дефіциту сурфактанту, спосіб одержання лікувального засобу та спосіб лікування дефіциту сурфактанту легенів

1. Поверхнево-активна композиція (ПАР) для відновлення дефіциту сурфактанту, яка відрізняється тим, що одержана з тканин морських двостулкових молюсків мідій та містить біологічноактивні речовини в комплексі: фосфоліпіди з омега-3 ПНЖК в структурі, в тому числі плазмологени, загальний холестерин, регуляторні пептиди, вуглеводи, вітамін Е, гепарин, вільні жирні кислоти, амінокислоти при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: фосфоліпіди з омега-3 ПНЖК в структурі, в тому числі плазмоло60-85 гени загальний холестерин 0,5-1,0 вуглеводи, не більше 1,5 регуляторні пептиди, не більше 1,5 вітамін Е, не більше 0,5 гепарин, не більше 0,15 вільні жирні кислоти, амінокислоти решта. 2. Композиція за п.1, яка відрізняється тим, що фосфоліпіди містять жирні кислоти при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: пальмітинова кислота 35-50 ейкозапентаєнова кислота 16-17 докозагенсаєнова кислота 17-18. 2 (19) 1 3 83153 4 ним за п.2, протягом 1-2 днів, курс лікування визначають за клінічними показниками та показан нями газообміну, при необхідності лікування повторюють. Винахід відноситься до фармацевтичної промисловості, а саме до технології одержання лікарських засобів з тканин морських двостворкових молюсків мідій і може бути використаний як лікувальний засіб для відновлення функцій системи легенів при дефіциті сурфактанту. На сьогодні в терапевтичній, ургентній пульмонологічній практиці України не існує універсального препарату, придатного для застосування в якості засобу, що протидіє розвитку набряку легенів. Відсутність чи дефіцит поверхневої активності альвеолярної плівки викликає важкі патологічні явища в легенях - розлади дихання, ателектази, набряки, провокує розвиток пневмонії, серцеволегеневої недостатності. Відомо, що додавання ЕПК, значна кількість якої знаходиться в морських організмах, приводить до її збільшення у складі фосфоліпідів і до зменшення лейкотриєнів в нейтрофілах. В зв'язку з цим біологічно можливий захисний вплив омега3 ПНЖК при легеневих захворюваннях. Результати епідеміологічних досліджень виявили можливість захисного ефекту омега-3 ПНЖК для попередження епідемій, при профілактиці та лікуванні захворювань легенів: астми у дітей та бронхітів [1, 2]. Відомо про спосіб лікування хворих на хронічне легеневе серце, що включає призначення лікарського препарату, який відрізняється тим, що призначають препарат "Теком", що являє собою суміш з високим вмістом ефірів омега-3 ПНЖК [3]. Недоліком цього препарату є те, що він містить ефіри омега-3 ПНЖК, які легко окислюються. Відомо про можливість корекції стану сурфактантної системи легенів, довготривалою інгаляцією стрептоміцином в суміші з гідрокортизоном та глюкозою, що відновлює порушення поверхневої активності сурфактанту протягом 5 днів. Застосування в інгаляційній суміші гідрокортизону та глюкози відновлює порушення поверхневої активності сурфактанту протягом 5 днів [4]. Проте застосування антибіотика та гормональних препаратів є небажаним. Аналіз сучасної інформації вказує, що сурфактант легенів є сумішшю ліпідів та білків, які синтезуються і секретуються в альвеолярній рідині епітеліальними клітинами другого типу, що вистилають легеневі альвеоли та зменшують поверхневий натяг. При цьому головна фракція ненасичені ліпіди розглядається як дуже важлива для функції сурфактанту в зв'язку з тим, що рідинність сурфактантної плівки захищає плівку від жорсткості. До складу поверхнево-активних речовин (ПАР) новонароджених дітей входять такі фракції фосфоліпідів, як дипальмитоїлфосфатидилхолін (ДПФХ), фосфатидилетаноламін (ФЕА), фосфатидилсерин (ФС), фосфатидилгліцерил(ФГ), сфінгомієлін (CM), фосфатидилінозитол (ФІ), фосфатидна кислота (ФК). В складі жирних кислот рідинних фосфоліпідів найбільшу перевагу мають пальмітинова та докозагексаєнова кислоти. Відомо, що натуральний легеневий сурфактант включає суміш багатьох сполук, де головним є ДПФХ, а саме 1,2-дипальмітоїл, 3-гліцероФХ 41%, холестерол - біля 9%, суміш білків - 9%, ФЕА - 5%. ФГ і ФС - 4%, ФІ - 2%, CM - 1%, ЖК - 1%. Вказані компоненти можуть бути використані при дефіциті сурфактанту, що є супутником "респіраторного дистрес-синдрому" (PДС) у дорослих і дітей, який характеризується дефіцитом легеневого сурфактанту при захворюванні "гіалінових мембран" у новонароджених, а також при порушеннях біосинтетичних процесів в альвеолоцитах другого типу, що виробляють сурфактант [5]. Відомо, що пошкодження сурфактанту може викликатись як гіпоксією, так і гіпероксією, інфекцією дихальних шляхів. Широкийдіапазон етіологічних факторів підкреслює актуальність проблеми дефіциту сурфактанту, яка може виникнути в любому віці, особливо у реанімаційних хворих при штучній вентиляції легенів [6]. Відомо про замісну терапію для відновлення втраченого сурфактанту тварин. В зв'язку з цим є можливість одержання штучних аналогів екзогенного сурфактанту на основі природних компонентів, які подібні за складом речовинам сурфактанту легенів. Показано позитивний вплив екзогенних сурфактантів із легенів корови [7] і амніотичної рідини [8], які вводили дітям з дихальним синдромом. При цьому не було виявлено побічних токсичних ефектів. Головна функція сурфактанту - зниження поверхневого натягу при стані легені-повітря/рідина з утворенням поверхнево-активної плівки, яка містить ліпідний моношар, збагачений ДПФХ до (4050)%. ДПФХ вмішує 2-насичені ацильні ланцюги. Ліпіди з ненасиченими ЖК можуть щільно пакуватись в моношари. Оскільки ряд захворювань легенів є наслідком дефіциту сурфактанту, основою специфічного проявлення відомих препаратівсурфактантів як природних, так і штучних є заміщувальна терапія [9]. ДПФХ є єдиним значним фактором зниження поверхневого натягу, який відповідає за властивості зниження поверхневого натягу легеневого супротеїну (білкові речовини, що підсилюють адсорбцію сурфактанту). Вважається, що фосфатидилхолін (ФХ), ФЕА, ФГ і ФІ вносять зна 5 чний вклад у підсилення властивостей розповсюдження та адсорбції легеневого сурфактанту [4]. З встановленням факту, що штучний сурфактант зменшує тяжкість захворювання дихальних розладів і попереджує захворювання, проводиться пошук і створення синтетичних та природних сурфактантноподібних засобів для лікування РДС. Для отримання швидкого зниження поверхневого натягу легенів можливе використання ліпідної суміші, подібної легеневому сурфактанту in vivo, яка складається з гетерогенної суміші ліпідів, що включає ДПФХ та інші фосфоліпіди з більш низькою температурою плавлення. Тому актуальним є пошук фосфоліпідних сумішей природного походження, близьких за своїм складом до сурфактанту легенів. Відомо одержання штучного сурфактанту на основі ДПФХ або фосфоліпідної суміші в різних концентраціях, до складу яких входять такі компоненти, як амінокислоти, спирти, жирні кислоти та цукри [10]. Відомо декілька синтетичних сурфактантів ("Ecxosurf" - США [11], ''Alek"- Велика Британія), напівсинтетичні ("Survanta" - ROSS - США), природні ("Куросурф'' - США) [5]. Але при клінічних і фармакологічних випробуваннях не всі штучні сурфактанти виявили високу ефективність. Відомо про композицію на основі гідрованого соєвого ФХ (фосфоліпон-90Н) як активного компоненту, що забезпечує поверхнево-активні властивості препарату для заміщувальної сурфактантної терапії [9]. Недоліком такої композиції є невисока сурфактантна активність композиції. Відомо про вплив короткострокового ентерального вживання вільних омега-3 ліпідів на жирнокислотний склад легенів макрофагів і сурфактантні фосфоліпіди, які, однак, легко окислюються [12]. В останні роки стало відомо, що дефіцит есенційних жирних кислої (ЕЖК) в організмі впливає на розвиток різних захворювань, що викликано зниженням рівня есенціальних фосфоліпідів і ненасичених омега-6 і омега-3 жирних кислот - арахідонова кислота (AK) та ДГК в організмі [13]. Проявлення клініки захворювання, включаючи хвороби легенів і дефіцит сурфактанту людини, може бути пов'язано з відсутністю в організмі хворих омега-3 ПНЖК і деяких есенціальних фосфоліпідів. На даний час є важливі досліди, які вказують, що дефіцит есенційних омега-3 ЖК в організмі впливає на розвиток різних захворювань, в зв'язку з чим проявлення клініки захворювання легенів може свідчити про дефіцит сурфактанту [14]. Є деякі відомості про те, що додавання ЕПК приводить до збільшення її вмісту у складі фосфоліпідів та до зменшення утворення лейкотриєнів у нейтрофілах [15]. Фосфоліпіди з омега-3 ПНЖК в дієті швидко включаються в мембрани фосфоліпідів альвеолярних макрофагів, легенів і сурфактанту. При цьому омега-3 ПНЖК специфічно збільшуються в мембранних фосфоліпідах і не конкурують із зменшенням рівня AK, яка є найбільш важливою омeгa6 у складі ЖК фосфоліпідів у біологічних мембранах у порівнянні з ЕПК [16]. 83153 6 Найближчим аналогом є препарат із тканин кальмарів із властивостями сурфактанту для лікування дітей з дефіцитом гіалінових мембран та дорослих із різними захворюваннями легень [17]. Проведені досліди створеної субстанції на тваринах засвідчили, що застосування інгаляційно речовини із сурфактантноподібними властивостями омега-3 фосфоліпідів не виявило відхилень у тварин, а в дослідах з інтоксикацією знижувало інтенсивність процесу піноутворення, нормалізувало клітинну реакцію сурфактанту легенів та певним чином полегшувало протікання токсичного процесу. Проте вказаний препарат з тканин кальмарів має низький вміст плазмалогенів. В основу винаходу, що заявляється, поставлено задачу розробки поверхнево-активної композиції для заміщувальної сурфактантної терапії з тканин морських молюсків мідій з підвищеним вмістом природних ПАР на основі комплексу "морських" фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК у структурі, що включає плазмалогени, регуляторні коротколанцюгові пептиди та амінокислоти, якій притаманні поверхнево-активні властивості сурфактанту і яка відновлює дефіцит сурфактанту, способу її одержання та способу використання. Суть винаходу полягає в одержанні поверхнево-активної композиції "Молюфіл" на основі фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК в структурі - сурфактантноподібний комплекс, з тканин морських двостворкових молюсків мідій для відновлення дефіциту сурфактанту при захворюваннях легенів, особливо у новонароджених. Поставлена задача одержання поверхневоактивної композиції ''Молюфіл", що відновлює поверхнево-активні функції легенів при дефіциті сурфактанту, вирішується тим, що використовують сировину - тканини морських двостворкових молюсків мідій, яку подрібнюють у замороженому стані, екстрагують етанолом, відокремлюють етанольний екстракт від залишків сировини фільтрацією, повторно екстрагують одержаний залишок підкисленим етанолом, об'єднують етанольні екстракти після пертої і другої екстракції, видаляють етанол шляхом упарювання в вакуумі, очищують одержані фракції від похідних вуглеводнів, ефірів ЖК, продуктів окислення холестеролу та його ефірів, перерозчинюючи одержану ліпід-білкову фракцію в етанолі з додаванням суміші гексану і етилацетату у певному співвідношенні, екстрагують та відокремлюють гексан-етилацетатний шар від спиртово-водної фракції, упарюють одержаний екстракт до 1/10-1/100 вихідного об'єму, очищують одержану фракцію від залишків пігментів типу астаксантину активованим вугіллям, фільтрують розчин від залишків білкових компонентів через шар мембранних фільтрів Milipor 0,2, концентрують очищений і освітлений фільтрат упарюванням, додають до одержаного фільтрату вітамін E у концентрації не більше 0,05% і одержують субстанцію з підвищеним вмістом природних ПАР, з якої готують 1%-й спиртовий розчин, який суспендують з фізіологічним розчином та гепарином при співвідношенні компонентів відповідно ПАР:фізіологічний розчин:гепарин =1:100:(0,1 0,15), ліофолізують та одержують поверхнево 7 83153 активну композицію "МОЛЮФІЛ" у вигляді білого пухкого порошку. В подальшому використовують поверхнево-активну композицію "МОЛЮФІЛ" для відновлення функції системи легенів при дефіциті сурфактанту, таким чином, що до флакону з ліофілізованою поверхнево-активною композицією "МОЛЮФІЛ" додають 10мл стерильного фізіологічного розчину, збовтують та використовують для інгаляції у вигляді рідини 1 - 2 рази на добу протягом 1 - 2 днів, проводять аналіз за клінічними показниками та показниками газообміну, при необхідності лікування повторюють. При дослідженні складу ПАР з тканин двостворкових молюсків мідій установлено, що до нього входять: фосфоліпіди - (70-85)%, серед яких основні: ФХ і ФЕА, які вміщують до (35-50)% пальмітинової кислоти, (16-17)% ЕПК, (17-18)% ДГК, в тому числі (30-45)% плазмалогени (плазменілфосфатидилхолін і плазменілфосфатидилетаноламін), які ефективно зменшують поверхневий натяг, загальний холестерол (0,5-1,0)%, ефіри ЖК (0,10,5)%, вуглеводи, не більше 1,5%, вітамін E, не більше 0,05%, гепарин, не більше (0,1-0,15)%. ЖК, амінокислоти - решта. При дослідженні складу компонентів сурфактанту - поверхнево-активних речовин з морських двостворкових молюсків виявлена їх подібність до 8 складу ПАР, вилучених з легеневої тканини тварин (таблиця 1). В таблицях представлені результати дослідів впливу поверхнево-активної композиції "Молюфіл" на: вміст фосфоліпідів при дефіциті есенційних жирних кислот (ЕЖК) в організмі (таблиця 2), накопичення продуктів перекисного окислення ліпідів у мікросомальних фракціях легень щурів при експериментальному Е-гіповітамінозі та при введенні вітаміну E і поверхнево-активної композиції "Молюфіл" у дослідах in vitro (таблиця 3), вміст фосфоліпідів у мікросомах легень щурів (таблиця 4), вміст малонового диальдегіду у гомогенаті печінки щурів за умови експериментального впливу CCl4 та поверхнево-активної композиції "Молюфіл" в дослідах in vivo (таблиця 5), активність ферментів антиоксидантної системи мікросомапьних фракцій легенів щурів при Е-гіповітамінозі та при введенні препарату (таблиця 6). специфічну дію поверхнево-активної композиції "Молюфіл" (таблиця 7), вплив поверхнево-активної композиції "Молюфіл" на імунну систему щурів (таблиця 8), склад жирних кислот плазменілфосфатидилетаноламіну мікросом маток щурів за умов дефіциту ПНЖК та при введенні поверхнево-активної композиції "Молюфіл" (таблиця 9), включення [H3]-арахідонової кислоти в загальні ліпіди мікросом легень (таблиця 10). Таблиця 1 Вміст компонентів БАР в поверхнево-активній композиції "Молюфіл'' ті легеневій тканині тварин Поверхнево-активна композиція "Молюфіл" з тканин морських двостворкових молюсків мідій Вміст, Компоненти мас. % 1 2 Фосфоліпіди: 60-85 в тому числі: Фосфатидилхолін (ФХ) 60-80 Фосфатидилетаноламін (ФЕА), 7,0-12,8 Сфінгомієлін 5,7-9,0 Фосфатидилгліцерид 0,4-8,0 Фосфатидилінозитол 1,5-2,2 Фосфатидилсерин 0,6-1,2 Плазмалогени 30-45 Жирні кислоти в складі фосфоліпідів: пальмітинової кислоти, 35-50 ЕПК, 16-17 ДГК; 17-18 Загальний холестерин 0,5-1,0 Вуглеводи, не більше 1,5 Пептиди, не більше 1,5 Гепарин, не більше 0,15 Вітамін Е, не більше 0,05 Жирні вільні кислоти, амінокислоти решта Легеневі тканини тварин Фосфоліпіди Вміст, мас. °Л 4 68,6-90.7 Фосфатидилхолін Фосфатидилетаноламі н Сфінгомієлін Фосфатидилгліцерид Фосфатидилінозитол Фосфатидилсерин 58,4-85,0 2,6-3.5 3,2-12,0 0,1-12,0 1,2-6,6 1,0-6,4 Компоненти 3 Загальний холестерин Вуглеводи Білок Жирні кислоти 0-8,0 0,1-2,0 1,0-3,0 1,0-27,7 9 83153 10 11 83153 12 13 83153 14 15 83153 16 17 83153 18 19 Поверхнево-активна композиція, що заявляється, має такі переваги: - одержана композиція за рахунок фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК в структурі відновлює дефіцит сурфактанту в організмі, має мембраннопротекторні та імуно-модулюючі властивості, відновлює дефіцит докозагексаєнової і ейкозапентаєнової кислої та регулює вміст арахідонової кислоти, яка має відношення до синтезу простагландинів в організмі. - містить гепарин для стабілізації, що покращує мікроциркуляцію кровообігу, та вітамін E, що стабілізує низько дисперсну структуру поверхневоактивної композиції; - наявність у одержаній композиції значної кількості фосфоліпідів та плазмалогенів підвищує поверхневу активність сурфактанту з тканин двостворкових морських молюсків мідій; - відсутність домішок пігментів та білкових часток; - короткострокове збагачення організму композицією з тканин морських двостворкових молюсків мідій на основі морських фосфоліпідів з омега3 ПНЖК надає швидку модуляцію мембранних фосфоліпідів легеневих тканин, альвеолярних макрофагів, легеневого сурфактанту. - використання тканин морських двостворкових молюсків мідій дозволяє одержати поверхнево-активну композицію із значним вмістом фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК в структурі, серед яких 83153 20 головним є дипальмітоїлфосфатидилхолін, а також плазмалогени (плазменілФХ і плазменілФЕА), вільні амінокислоти із значним вмістом аргініну, гліцину, таурину, глютамінової кислоти, які мають відношення до пептидних біорегуляторів, а також коротколанцюгових пептидів, які підвищують сурфактантноподібні властивості засобу; ПНЖК приймають участь в регуляції активності факторів транскрипції, в трансдукції сигналів і експресії ряду генів в лімфоцитах і фагоцитах, є субстратом для створення важливої групи ліпідних регуляторів ейкозаноїдів. До них відносяться простагландини, простацикліни, лейкотриєни і тромбоксани, які володіють широким спектром імуномодулюючої дії, регулюють запалення, тромбоутворення, тонус і проникливість судин. Простагландини і тромбоксани трьох серій різняться по кількості подвійних зв'язків в бокових ланцюгах молекули. Три подвійні зв'язки мають ейкозаноїди, що утворюються з лінолевої кислоти, чотири - з арахідонової кислоти, а п'ять - з аліноленової кислоти. За рахунок використання поверхнево-активної композиції на основі фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК в структурі з молюсок мідій є можливість контролювати синтез ейкозаноїдів в організмі. Дефіцит ЕЖК в процесі розвитку організму веде до різних захворювань: бронхолегеневої дисплазії, захворювання мозку та серця у дітей. У зв'язку з цим досліджували дію поверхнево-активної 21 композиції з омега-3 ПНЖК на фоні дефіциту ЕЖК в організмі при введенні міченої AK. Було показано, що композиція може діяти як конкурентний інгібітор перетворення AK в простагландин (ПГЕ2) та зменшувати синтез ейкозаноїдів і, таким чином, дає можливість контролювати синтез ейкозаноїдів в організмі. Сукупність визначених авторами операцій способу, його режимів застосування, схем і обробки тканин морських двостворкових молюсків мідій дозволяє одержати новий засіб на основі гліколіпопептидного комплексу з новим спектром властивостей та вирішити поставлену задачу. Застосування операцій способу, що заявляється, приводить до наступних переваг: - за рахунок технологічних прийомів виділення та очистки екстрактів з тканин морських двостворкових молюсків мідій вдається одночасно видалити значну кількість небажаних ліпідів (пігментів), білкових речовин ефірів холестеролу, вільних жирних кислот та вуглеводів, що покращує якість поверхнево-активної композиції для лікування легеневих захворювань за рахунок відновлення дефіциту сурфактанту в організмі, хвороби гіалінових мембран новонароджених; - покращення якості очистки поверхневоактивної композиції за рахунок перерозчинення біологічних ПАР в гексані з додаванням етилацетату у співвідношенні ПАР:гексан:етилацета=10:20:1; - виділення значної кількості плазмалогенів у складі фосфоліпідів -(30 - 45)%, які вносять значний вклад в поверхнево-активні властивості композиції; - значний вихід (до 5%) біологічних ПАР з тканин морських двостворкових молюсків мідій у порівнянні із ПАР легеневої тканини ссавців (до 1,5%) або з тканин кальмарів (1%). - перевага нового способу полягає в тому, що одержана поверхнево-активна композиція містить комплекс фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК, серед яких основний ДПФХ із вмістом (35 - 50)% пальмітинової кислоти, 20% ДГК, (10 - 15)% ЕПК, причому інші фосфоліпіди одержаного комплексу теж вміщують певну кількість пальмітинової кислоти; - одержана поверхнево-активна композиція також містить регуляторні пептиди, амінокислоти, в зв'язку з чим не має побічної дії і не виявляє антигенних властивостей по відношенню до місцевих клітинних імунних реакцій в легенях, про що свідчать експериментальні дослідження після інгаляційного введення композиції щурам з подальшим гістохімічним вивченням макрофагів. Число макрофагів при дії сурфактанту з тканин морських двостворкових молюсків мідій протягом 1 години та 1, 3, 7 діб не відрізняється від контролю. Наведені дані вказують про відсутність антигенності препарату, що є позитивним фактором. Основою поверхнево-активної композиції "Молюфіл", що заявляється є комплекс фосфоліпідів, серед яких головний ДПФХ з омега-3 ПНЖК в структурі, плазмалогени - плазменілФХ і плазменілФЕА із значною кількістю ДГК в структурі, які ефективно зменшують поверхневий натяг і стабілізують гексагональну структуру фосфоліпідів та 83153 22 покращують поверхневу активність композиції [9]. До цього комплексу входять також пептиди, амінокислоти із значним вмістом лізину, аргініну, гліцину, глютамінової кислоти, які є біологічно активними речовинами, вітамін E і гепарин. Приклад 1. 100г тканин морських двостворкових молюсків мідій подрібнюють в замороженому стані на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етанолу у реакторі з мішалкою, проводять екстрагування протягом 2 годин. Одержаний екстракт фільтрують від домішок сировини. Фільтрат випарюють у вакуумі, залишаючи незначну кількість спиртововодної суміші, а сировину, що залишилась після екстрагування, вдруге екстрагують протягом 1 година етанолом, підкисленним оцтовою кислотою до рН не менше 4. Після фільтрації одержані екстракти об'єднують, випарюють у вакуумі до одержання водно-спиртової фракції, яку перерозчинюють в етанолі з додаванням суміші гексану і етилацетату у співвідношенні 10:20:1, далі відокремлюють гексан-етилацетатну фракцію від спиртово-водної фракції, яку упарюють у вакуумі до 1/10 об'єму і очищують активованим вугіллям з подальшою фільтрацією через шар мембранних фільтрів з розміром пор 0,2мкм для видалення залишків білкових компонентів. До одержаного гексан-етилацетатного фільтрату додають вітамін E у кількості не менше 0,05%. упарюють у вакуумі і одержують субстанцію, з якої готують 1% спиртовий розчин, який для одержання лікарського засобу суспендують протягом 30 хвилин з фізіологічним розчином та гепарином у кількості 0,1%, ліофілізують і отримують лікарську форму поверхнево-активної композиції. Вихід - 5г (5%). Приклад 2. Дослідження дії фосфоліпідного препарату з тканин двостворкових морських молюсків мідій відбувалось у наступних направленнях. В дослідах використовували щурів на звичайному раціоні та при введенні поверхнево-активної композиції із тканин морських двостворкових молюсків мідій із властивостями сурфактанту для виявлення утворення ейкозаноїдів в організмі. Утворення ейкозаноїдів в організмі здійснюється з їхніх попередників - w -6 та w -3 ПНЖК, які вступають в каскад метаболічних перетворень після виходу з мембранних фосфоліпідів. Цей процес здійснюється за допомогою різних фосфоліпаз. Проведення випробувань відбувалось в наступних направленнях: - модулювання процесів інтоксикації, що призводить до порушень властивостей сурфактантної системи легенів і завершується летально без застосування спеціальної терапії; - застосування речовини із властивостями сурфактанту шляхом інгаляційної дії на експериментальних тваринах; - спостереження за станом тварин (кількість загиблих, показники стану сурфактантної системи легенів); Токсикологічна оцінка нового препарату - штучного сурфактанту з тканин морських двостворкових молюсків мідій вивчена шляхом інгаляційного введення його за допомогою приладу ПАІ-2 білим щурам (вагою тіла 195,6±4,5г) та білим мишам (вагою тіла 23,4±1,7г) протягом 7 діб в інтервалах 23 1 година, 1, 3, 7 діб. В кожну з 4 груп брали по 10 тварин. Масові концентрації аерозолю препарату в межах від 33333,0мг/м3 до 666мг/м3 підтримують протягом 4 годин інгаляційного впливу для щурів і 2 години для мишей. До інгаляції і після неї тварини знаходяться в умовах звичайного лабораторного утримання. Клінічні досліди за станом тварин і розподілом загибелі тварин проводять протягом 14 діб з моменту інгаляційного впливу препарату. Встановлено, що для білих щурів середня летальна концентрація складає 11200,0±606,4мг/м3, а для білих мишей 8000±542,0мг/м3. У відповідності з вимогами ДЕСТ 12.1.007-76 препарат відноситься до 3-го класу небезпечності при інгаляційному впливі і є сполукою з помірно небезпечними властивостями. Фармакологічну оцінку сурфактанту, отриманого з тканин морських двостворкових молюсків мідій, проводили в умовах його інгаляційного введення. Концентрація препарату, який вводиться аерозольно, була кратна одній десятій середньолетальної дози для білих щурів вагою тіла 195,6±4,5г. Дослід проводили в динаміці (1 година, 1, 3, 7 діб). В групи брали по 10 тварин. Концентрація аерозолю препарату (1120,0±154,3мг/м3) підтримується в камері протягом 4 годин інгаляційного впливу. В умовах описаного досліду загибелі піддослідних тварин не зареєстровано. Як після інгаляції, так і протягом спостереження тварин а відчували себе задовільно. Аерозольний вплив не приводить до наявних розладів з боку органів та систем. При застосуванні поверхнево-активної композиції "Молюфіл" порівняно з контролем підвищується виживання тварин. В дослідах in vivo та in vitro при токсичній дії окислювального стресу, індукованого гострим отруєнням CCl4, введення композиції знижує токсичну дію метаболічної отрути, позитивно впливає на виживання тварин, знижує інтенсивність перекисного окислення ліпідів (ПОЛ), корегує токсичний вплив CCl4 (таблиця 3.) Досліджувана поверхнево-активна композиція є інтактною відносно функціональної активності та морфології макрофагів легенів. Вона не виявляє антигенних властивостей відносно місцевих клітинних імунних реакцій в легенях, про що свідчить структурна та функціональна стабільність легеневих макрофагів та експериментальні досліди з інгаляційного введення композиції щурам при послідовному гістохімічному вивченні макрофагальної функції. Одержані дані про відсутність антигенності композиції можуть бути обумовлені присутністю лише незначної домішки білку (0,10,5%) в препараті, що є позитивним фактором. При використанні наведеного способу досягаються наступні переваги: - спрощується спосіб одержання цільового продукту; - підвищується вихід ПАР з тканин морських двостворкових молюсків мідій - основи штучного сурфактанту (до 5%) в порівнянні з ПАР. одержаних з тканин легень телят (до 1,0%); - ефективно зменшується поверхневий натяг при наявності плазмалогенів (плазменілФЕА і пла 83153 24 зменілФХ), що діють як антиоксиданти проти ліпідної пероксидації; - вітамін E захищає як ліпідні компоненти, так і білки сурфактанту легенів від оксидактивного окислення; - покращується мікроциркуляція кровообігу з додаванням гепарину; При інгаляційному введенні поверхневоактивної композиції з тканин морських двостворкових молюсків мідій, одержаної за новим способом, підвищується поверхнева активність легенів у тварин за рахунок зниження поверхневого натягу до нормальних показників, практично не змінюється в порівнянні з контролем кількість альвеолярних макрофагів протягом досліджуваного періоду. Одержані результати свідчать про доцільність винаходу для подальшого застосування в практиці лікування хворих. Одержану лікувальну поверхнево-активну композицію "Молюфіл" доцільно використовувати в ургентній токсикологічній практиці при порушенні функцій сурфактантної системи легенів. Одноразове застосування сурфактантноподібної композиції з морських організмів не виявляє відхилень у нормальних тварин, а в умовах інтоксикації сприяє нормалізації порушень функції легенів: знижує інтенсивність процесів піноутворення, відновлює дефіцит сурфактанту, нормалізує клітинну реакцію сурфактанту легенів і певним чином полегшує протікання токсичного процесу. Одержана поверхнево-активна композиція забезпечує підвищення поверхневої активності легенів і зменшення антигенних властивостей. Таким чином, запропонований винахід вирішує задачу одержання з тканин морських двостворкових молюсків мідій поверхнево-активної ком позиції "Молюфіл", до складу якої входять фосфоліпіди з омега-3 ПНЖК, плазмалогени (плазменілФХ і плазменілФЕА), регуляторні пептиди, амінокислоти, вітамін E та гепарин. Створена композиція біологічно активних речовин має адаптогенні та антиоксидантні властивості. Одержана запропонованим способом поверхнево-активна композиція "Молюфіл" може бути застосована для відновлення функції сурфактантної системи легенів людини при її розладах шляхом відновлення дефіциту сурфактанту. Список посилань: 1. Nagakura T., Natsuda S. et al. Dietary Supplementation With Fish Oil Rich in Omega-3 Polyunsaturated Fatty Acids in Childr. Asthma. Eu,r Respir.J, 2000; 16: 861-865. 2. UA, 20416 A, 27.02.1998. 3.UA 36137 A, 16.04.2001. 4. Березовский B.A. Возможности коррекции состояния сурфактантной системы. Врачебное дело, 1984, №41, с.107-11 5. Гребенников В.А. Респираторный дистресссиндром у новорожденных. M., 1995. 6. Carrie I, Clement M, de Javel D at al. Phospholipid supplementation reverses behavioral and biochemical alterations induced by n-3 polyunsaturated fatty acid deficiency in mice. J Lipid Res., 2000, Mar., 41(3): 473-480. 7. RU 2198670, Cl, 20.02.2003. 8. RU, 2066197, Cl, 10.09.1996. 25 83153 9. RU, 2213746, Cl, 10.10.2003. 10. SU 1819381 A3 A23J1/04, A23L 1/333. 11. US 5110866 1992. 12. Palombo JD, Lydon E-E, Chen - Pl et al. Fatty acid composition of lung, macrophage and surfactant phospolipids after short-term enteral feeding with n-3 lipids. - Lipids. - 1994. - 29,9. - p.643 - 649 13. Укр. біохім. журн., 2004, т.76, №3, с.91-97. 14. Paramjit S. Tappia, Shabraili Ladha et al. The influence of membrane fluidity, TNF receptor binding, cAMP production and GTPase activity on macro Комп’ютерна верстка Т. Чепелева 26 phage cytokine production in rats fed a variety of fat diets. Molecular and Cellular Biochemistry 166: 135143, 1997. 15. Vibha Lama et al. Prostaglandin E2 Synthesis and Suppression of Fibroblast Proliferation by Alveolar Epithelial Cells Is Cyclooxygenase-2-Dependent. 27(6): 752. 16. Am.J.Clin.Nutr.2000.71 (IS): lS-398S//Role of polyunsaturated fatty acids in lung disease. 17. UA 76074, C2, 15.06.2006. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601