Спосіб забарвлювання нервових волокон гістологічного препарату

Спосіб забарвлювання нервових волокон гістологічних препаратів, що включає використання гематоксилінів, який відрізняється тим, що нервові волокна гістологічного препарату забарвлюють безгалуновим оцтовокислим гематоксиліном з наступною диференціацією пікрофуксином. (19) (21) u201107297 (22) 09.06.2011 (24) 25.11.2011 (46) 25.11.2011, Бюл.№ 22, 2011 р. (72) КИХТЕНКО ОЛЕНА ВАЛЕРІЇВНА, КОРОБОВА ЛАРИСА КОСТЯНТИНІВНА, ЛУПИР ВІКТОР МИХАЙЛОВИЧ, ЛУПИР МАРИНА ВІКТОРІВНА 3 нурюють у дистильовану воду, контролюючи процес під мікроскопом; переносять у фосфорномолібденове срібло (у тій же банці); поміщають у 10 % нейтральний формалін на 2 хв.; промивають у дистильованій воді; переносять у фосфорномолібденове срібло (так до 3-4 разів, а для виявлення тангенціальних волокон - до 7 разів); переносять у дистильовану воду, контролюючи процес під мікроскопом; обережно натягають на предметне скло, змазане сумішшю білка з гліцерином; підсушують на повітрі 8-10 хв., проводять через ксилол і укладають у бальзам. Для підготовки фосфорно-молібденового срібла беруть 4 мл 20 % розчину нітрату срібла і 1 мл 1 % розчину фосфорно-молібденової кислоти, додають по краплях 25 % розчин аміаку до розчинення осаду, доливають до 15 мл дистильованої води. Результат: на світло-бузковому фоні визначаються нейрокератинова і мієлінова оболонки нервових волокон чорного кольору; у судинах виявляються еритроцити чорного кольору (Ромейс Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс; [пер. с немец. В.Александрова]. - Μ.: Издательство иностранной литературы, 1953. - 718 с; Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники /Г.А. Меркулов. - Л.: Медицина, 1969. - 423 с). Відомий спосіб виявлення мієлінової оболонки за Шпільмейєром. Методика забарвлювання за способом передбачає наступне: зрізи промивають у 3 змінах дистильованої води; переносять на предметне скло, змазане сумішшю білка з гліцерином, і підсушують на повітрі; занурюють у 2,5 % розчин залізоамонійних галунів на 2 доби (можна довше) і тримають у темному місці; промивають у 3 змінах дистильованої води і знежирюють у 96 % спирті 15-30 хв.; поміщають у гематоксилін (15 мл гематоксиліну Бемера і 85 мл дистильованої води) на 1 добу і тримають на світлі; промивають у 3 змінах дистильованої води і диференціюють у 2,5 % розчині залізоамонійних галунів (контролюючи процес під мікроскопом); промивають у дистильованій воді, потім залишають на 30 хв. у проточній воді; просушують на повітрі, проводять через ксилол і укладають у бальзам. Гематоксилін Бемера готують із двох розчинів. Перший розчин: 1 г гематоксиліну в 10 мл абсолютного спирту; другий: 8 г алюмокалієвих галунів розчиняють при нагріванні в 200 мл дистильованої води, після чого розчин остуджують і фільтрують. Через 1 добу після підготовки розчини змішують і дають суміші дозріти на світлі в відкритій посудині з широкою горловиною 10 -14 діб, після чого фільтрують і додають кілька кристалів тимолу. Розчин залізоамонійних галунів: 2,5 г залізоамонійних галунів і 100 мл дистильованої води розмішують і фільтрують. Результати: на світлому злегка жовтуватому фоні мієлінові волокна темно-сіро-синюватого відтінку; ядра дренажної олігодендроглії в білій речовині того ж відтінку (Ромейс Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс; [пер. с немец. В.Александрова]. - Μ.: Издательство иностранной литературы, 1953. - 718 с; Меркулов Г.А. Курс па 65245 4 тологогистологической техники / Г.А. Меркулов. Л.: Медицина, 1969. - 423 с). Відомий також метод Шпільмейєра в модифікації Соколянського. Даний метод застосовують для виявлення мієлінових оболонок нервових волокон. За його допомогою більш чітко визначається волоконна архітектоніка і структура волокна, але гірше забарвлюється мієлін. Одночасно забарвлюється дренажна олігодендроглія в білій речовині. Методика забарвлювання включає: промивку зрізів у 3 змінах дистильованої води; зрізи переносять на змазане білком покривне скло і підсушують; поміщають у насичений розчин біхромату калію на 24 години і тримають на світлі; промивають у дистильованій воді; переносять у 2,5 % розчин залізоамонійних галунів і тримають у темряві 24 години; промивають у дистильованій воді; забарвлюють протягом 24 годин на світлі в гематоксиліні (15 мл гематоксиліну Бемера + 85 мл дистильованої води); промивають у декількох змінах дистильованої води; диференціюють у 2,5 % розчині залізоамонійних галунів; промивають у дистильованій і проточній воді, проводять через 96 % спирт, карбол-ксилол, ксилол і укладають у бальзам. Результат: на сіруватому фоні мієлінова оболонка центральних нервових волокон бузкова; ядра дренажної олігодендроглії в білій речовині такого ж відтінку. Даний спосіб забарвлювання нервових волокон є найбільш близьким до того, що заявляється, за технічною суттю та результатом, який може бути досягнутим, тому його вибрано за прототип. В основу корисної моделі поставлено задачу розширення арсеналу способів забарвлювання нервових волокон гістологічних препаратів. Задачу, яку поставлено в основу корисної моделі, вирішують тим, що у відомому способі забарвлювання нервових волокон гістологічних препаратів, який включає використання гематоксилінів, згідно з корисною моделлю, нервові волокна гістологічного препарату забарвлюють безгалуновим оцтовокислим гематоксиліном з наступною диференціацією пікрофуксином. Спосіб виконують наступним чином. Гістологічний препарат забарвлюють безгалуновим оцтовокислим гематоксиліном 1,5-2 години в термостаті при температурі 56 °C. Безгалуновий оцтовокислий гематоксилін включає: 10 % спиртовий розчин гематоксиліну 10 мл, воду дистильовану - 90 мл, оцтову кислоту (крижану) - 2 мл. Відмивають у 2-х чи 3-х порціях водопровідної води 20-30 хвилин; диференціюють пікрофуксином 30-40 хвилин у термостаті при температурі 56 °C. Склад пікрофуксину: 1 % водяний розчин кислого фуксину - 10 мл, насичений водяний розчин пікринової кислоти - 100 мл. Промивають у водопровідній воді 3-5 хвилин; швидко проводять по спиртах, підфарбованих пікриновою кислотою; просвітлюють у карболксилолі, промивають ксилолом, укладають 5 у розчин полістиролу в ксилолі і накривають покривним склом. Результат: мієлінові оболонки нервових волокон забарвлюються в синювато-чорний колір, м'язова тканина насиченого червоно-коричневого кольору, сполучна тканина - від рожевого до яскраво-червоного. Оболонки кровоносних і лімфатичних судин від intima до externa чітко Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 65245 6 диференціюються за кольором, еритроцити приймають коричневе забарвлення. Епінервій, перинервій і ендонервій периферичних нервів чітко диференційовані. Безмієлінові нервові волокна вегетативної іннервації чітко контуровані як у судинно-нервових пучках, так і серед навколишньої тканини. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП ―Український інститут промислової власності‖, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601