Спосіб діагностики дисбіозу кишечника у дітей раннього віку

Спосіб діагностики дисбіозу кишечника у дітей раннього віку, що передбачає проведення мікробіологічного дослідження, який відрізняється тим, що додатково вивчають вміст активних метаболітів - летких жирних кислот та за концентраціями окремих кислот та анаеробним індексом діагностують ступінь дисбіотичних порушень кишечника. (19) (21) u201107738 (22) 20.06.2011 (24) 25.01.2012 (46) 25.01.2012, Бюл.№ 2, 2012 р. (72) НЕЗГОДА ІРИНА ІВАНІВНА, НАУМЕНКО ОЛЬГА МИКОЛАЇВНА, ОБЕРТЮХ ЮРІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ (73) ВІННИЦЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМ. М.І. ПИРОГОВА 3 [Кондракова О.А., Бабин В.Н., Грубова Е.А. Комплексная оценка микроэкологических и функциональных нарушений толстого кишечника для обеспечения этиотропной терапии. [Пособие для врачей] / О.А.Кондракова, В.Н.Бабин, Е.А.Грубова - М., 2003г.-128с]. Відповідно відхилення від фізіологічної норми рівня і спектра цих метаболітів можуть виступати біохімічними маркерами структурних і функціональних порушень мікробіоценозу кишечника. Відомий спосіб діагностики дисбіозу кишечника полягає у мікробіологічному дослідженні фекалій та дозволяє виявити кількісні і якісні зміни порожнинної популяції мікрофлори кишечника при наявності ряду поживних середовищ [Дисбактериоз кишечника (клиника, диагностика, лечение): [Руководство для врачей.] / Ю.В.Лобзин, В.Г.Макарова, Е.Р.Корякова, С.М.Захаренко. СПб: ООО "Издательство ФОЛИАНТ", 2006.256С.]. Недоліком методу є тривалий термін виконання (7-10 днів), дорога вартість поживних середовищ, неможливість охоплення всієї популяції мікроорганізмів, необхідність швидкого дослідження для попередження інактивації флори, потреба у додаткових технічних установках для визначення анаеробів. Неможливість ранньої, доклінічної діагностики дисбіотичних порушень. Являючись кількісним методом, аналіз на дисбактеріоз не дозволяє визначити метаболічну активність анаеробної мікрофлори і тим самим не дає можливість оцінити взаємопов'язані мікроекологічні і функціональні порушення травного тракту [Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. / В.М.Бондаренко, Т.В.Мацулевич. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.-304С.]. В основу корисної моделі "Спосіб діагностики дисбіозу кишечника у дітей раннього віку" поставлено задачу виявити наявність активних метаболітів (летких жирних кислот) у зразках фекалій дітей раннього віку. Поставлена задача вирішується способом, що передбачає проведення мікробіологічного дослідження і, згідно з корисною моделлю, що додатково вивчають вміст активних метаболітів - летких жирних кислот, за концентраціями окремих кислот та анаеробним індексом діагностують ступінь дисбіотичних порушень кишечника. Спосіб здійснюється таким чином: у хворого забирають зразок фекалій у одноразову стерильну пробірку. Наважку фекалій, вагою більше 0,1г, поміщають у пробірку з конічним дном, доливають 1 % розчин фосфорної кислоти у співвідношенні 1:4, закривають щільною пробкою і перемішують шляхом струшування протягом 10 хвилин. Після цього зразки поміщають у холодильник (t -+4 °C) на 12 годин, перемішуючи зразки шляхом струшування кожні 6 годин. Через 12 годин зразки фільтрують за допомогою фільтрувального паперу до отримання прозорого розчину. Газохроматографічний аналіз проводять на газово-рідинному хроматографі Хром-5 (Чехія). Мікрошприцом вводять пробу (відфільтрований прозорий розчин) близько 2мкл у випаровувач 66906 4 хроматографа з полум'яно-іонізаційним детектором іонізації. Режим роботи хроматографа ізотермічний, з температурою термостата 200-220 °C, температурою випаровувача і детектора 250 °C. Для аналізу використовують колонку заповнену Porapark Q. Швидкість газу-носія азоту - 30, водню - 50 і повіт-3 ря 500мл/хв. Чутливість приладу - 3,210 . Час хроматографування близько 8хв. Вміст індивідуальних кислот у зразку визначається по формулі: S C f Ci  1 st i  R , S2 де C i - концентрація органічної кислоти в зразку, %; S1 - площа піка речовини, що визначається, 2 мм ; 2 S 2 - площа піка внутрішнього стандарту, мм ; fi - відносний поправочний коефіцієнт; Cst - концентрація внутрішнього стандарту, %; R - розведення. Визначається співвідношення концентрації кожної кислоти крім оцтової, до концентрації оцтової (анаеробний індекс). Величина даного показника дозволяє оцінити стан мікробіоценозу та ступінь анаеробіозу у дітей раннього віку. Про нормальний стан мікробіоценозу кишечника у дітей раннього віку свідчить вміст С2 - 5,88±1,22; С3 - 1,79±0,55; С4 - 1,72±0,55; isoC4 - 0,25±0,11; С5 - 0,34±0,12; isoC5 0,4±0,15. Оцінка результатів дослідження проводиться у відповідності до норм показників вмісту окремих жирних кислот та анаеробного індексу у зразках фекалій. Підвищення або зниження абсолютного вмісту кислот свідчить про підвищення або зниження чисельності і активності мікроорганізмів кишечника у дітей раннього віку. Приклад. Хвора С., 7 місяців, перебуває під спостереженням у міській дитячій поліклініці №2. Скарги: зниження апетиту, метеоризм, кишкові коліки, періодично розріджений стілець, зеленого кольору зі слизом. Дані мікробіологічного дослідження фекалій: патогенні організми - не виділені, загальна 5 кількість кишкової палички - 10 КУО/г; кишкова паличка зі слабо вираженими ферментними властивостями - 0; лактозонегативні ентеробактерії 6 10 КУО/г; гемолізуюча кишкова паличка - 0; кокові 4 форми в загальній сумі мікроорганізмів - 10 КУО/г; гемолізуючий та золотистий стафілокок - 0; умовно патогенні мікроорганізми - Proteus mirabilis 3 9 10 КУО/г; біфідобактерії - 10 КУО/г; лактобацили 5 10 КУО/г. Мікробіологічне заключения: І ступінь мікробіологічних порушень. Дані копрологічного дослідження: консистенція - кашкоподібний, колір жовто-зелений, нейтральний жир 0-1 в п/з, неперетравлена клітковина 2-3 в п/з, крохмал - 0-1 в п/з, слиз - багато, лейкоцити 7-9 в п/з. Заключения - бродильна диспепсія. Газово-рідинна хроматографія: С2 - 6,43±1,3; С3 - 3,35±0,01; С4 - 2,73±0,01; isoC4 - 0,47±0,05; С5 - 0,65±0,01; isoC5 - 0,77±0,001. Анаеробний індекс - 0,600±0,012. Дослідження продемонструвало у хворої зниження анаеробного 5 індексу та значне підвищення концентрації масляної, валеріанової та пропіонової кислот, що свідчить про підвищення активності анаеробної флори, що володіє протеолітичною та гемолітичною активністю та появою умовно-патогенної флори, що відповідає ІІ-ІІІ ступеню мікробіологічних порушень (по Митрохіну, 1998р.). Спосіб діагностики дисбіозу кишечника у дітей раннього віку використано у 34 хворих з дисбіотичними порушеннями кишечника та у 28 практично здорових дітей раннього віку, які склали контрольну групу. Встановлено ряд закономірностей зміни пулу летких жирних кислот при зміні етіологічного чинника дисбіотичних порушень. Комп’ютерна верстка Н. Лисенко 66906 6 Таким чином, даний спосіб діагностики дисбіозу кишечника у дітей раннього віку високоінформативний, дає змогу вивчити активність анаеробної мікрофлори без додаткового спеціального обладнання, простий у використанні, не вимагає довготривалого дослідження і може бути використаний для ранньої діагностики дисбіотичних порушень та повторних досліджень в динаміці. Методика проста, доступна, ефективна, інформативна, не дороговартісна і може знайти широке використання в практичній дитячій гастроентерології та в клініці дитячих інфекційних хвороб. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601