Спосіб виявлення кислих глікопротеїнів інтими ворітної вени і її коренів для виявлення флебопатій піролізидиноалкалоїдного генезу

Спосіб фарбування кислих глікопротеїнів інтими ворітної вени і її коренів для виявлення флебопатій піролізидиноалкалоїдного генезу, який 3 стосовувався при дослідженні великих фрагментів стінки ворітної вени. Тому, задачею корисної моделі є розробка способу, який би дозволяв отримувати інформацію про глікопротеїнову організацію великих ділянок стінки ворітної вени і її коренів після дії на неї піролізидинових алкалоїдів. Поставлена задача вирішується тим, що у способі фарбування кислих глікопротеїнів інтими ворітної вени і її коренів, який включає фарбування макропрепарату ворітної вени у розчині тіазинового фарбника при різних значеннях pH, згідно з корисною моделлю, об'єктом дослідження є не гістозріз, а макрофрагмент вени, який тричі забарвлюють у розчині тіазинового фарбника при pH 2,8, pH - 4 і pH - 5 і реєструють інтесивність та колір офарблення при кожному значенні pH, при цьому, між фарбуванням, при кожному значенні pH, препарат відмивають від барвника у змінних порціях фізіологічного розчину до зникнення забарвлення, а потім фарбують його при наступному значенні pH. Приклад конкретного виконання 1. Підготовка кювети - емальована кювета підігрівається у сушильній шафі до 37 °С, до неї вливають розплавлену гарячу масу парафіну з воском (10:1). Вказану масу парафіну з воском готують у емальованому посуді, який нагрівають на електричній пічці. 2. Підготовка об'єкта дослідження - висікають фрагменти вен довжиною на 2-3 см менше довжини кювети. Відібрані фрагменти розсікають ножицями за довгою віссю з перетворенням трубки у стрічку. Адвентицією ця стрічка укладається на застиглу парафіново-воскову масу. Один з довгих країв отриманої стрічки фіксують проколом голками через її край до парафіново-воскової маси через кожні 1-2 см, протилежний край злегка розтягують за допомогою пінцета і фіксують шляхом приколювання до застиглої парафіново-воскової суміші. Для фіксації використовують ін'єкційні або ботанічні голки. 3. Підготовка об'єкта для офарблення - промивання об'єкта. Кюветі надають вертикального положення і зовнішню інтимальну поверхню препарату злегка зрошують фізіологічним розчином так, щоб він вільно стікав згори до низу. Одразу після зрошення і стікання рідини кюветі надають горизонтального положення. Час зрошення складає не більше 3-х хвилин. 4. Забарвлення препарату - свіжоприготований 0,2 %-ний розчин тіазинового барвника наливають на препарат так, щоб його рівень над препаратом сягав 0,5 см. Час фарбування - 20-30 хвилин. 4.1.) Розчини фарбника з різними значеннями pH готуються на буфері Мак-Ільвейна який отримують шляхом змішування розчину гідрофосфату натрію (розчин А) і лимонної кислоти (розчин Б). Початкові розчини: - Розчин А - 0,2 М розчин гідрофосфату натрію (0,2 М розчин містить 35,61 г солі в 1 л); - Розчин В - 0,1 М розчин лимонної кислоти (0,1 М розчин містить 21,01 г кислоти віл). 67143 4 Для отримання 200,0 мл розчину з pH 2,8 змішують 31,7 мл розчину А і 168,3 мл розчину В, для такої ж кількості розчину з pH 4 береться 77,1 мл розчину А і до нього додається 122,9 мл розчину В, для отримання 200 мл розчину з pH=5 змішують 103,0 мл розчину А і 97,0 мл розчину В. Таким чином отримують три розчини для фарбування з різними значеннями pH. 4.2.) Ступеневе офарблення виконується наступним чином: 1. препарат офарблюють у розчині обраного тіазинового барвника (кращі результати отримують при використанні толуїдинового синього або азура А) при pH - 2,8 - для виявлення сульфовмісних глікозаміногліканів; 2. препарат відмивають від барвника у змінних порціях фізіологічного розчину до зникнення забарвлення; 3. препарат забарвлюють при pH - 4 - для виявлення гіалуронової кислоти; 4. після другого промивання у фізіологічному розчині - фарбування при pH - 5 для виявлення всіх глікозаміногліканів. Результати ступінчастого фарбування: 1. Офарблення інтими ворітної вени у синій колір свідчить про відсутність патологій, пов’язаних з появою на поверхні інтими вени глікозаміногліканів. 2. Наявність у препаратах метахроматично забарвлених у червоно-фіолетовий колір ділянок свідчить про розвиток у відібраних венах патологій з боку їх ендотеліального покриву, при яких має місце виявлення глікопротеїнів, що лежать під цим покривом. У випадку відносно легких патологій гіалуронової кислоти (ГК) - офарблення при pH - 4, а у випадку більш важких патологій - хондроїтинсірчаних кислот (ХСК) - офарблення при pH - 2,8. 3. Крім того, враховують не тільки метахроматичний ефект, але й площу його появи. Таким чином, спосіб забарвлення кислих глікопротеїнів інтими ворітної вени і її коренів дозволяє: визначати наявність або відсутність різних глікопротеїнів на внутрішній поверхні коренів ворітної вени і самої ворітної вени після її контакту з піролізидиновими алкалоїдами і може бути використаний при дослідженні дії інших хімічних іритантів. Джерела інформації. 1. Горальский Л.П. Основи гістологічної техніки і морфофункціональні методи дослідження у нормі та при патології / Л.П. Горальский, В.Т. Хомич, О.І. Кононський - Житомир: Полісся, 2005. - 284 с 2. Кононский А.И. Гистохимия / А.И. Кононский - К.: Вища школа, 1976. - 280 с. 3. Микроскопическая техника: [руководство; под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова]. - М.: Медицина, 1996. - 544 с. 4. Пирс Э. Гистохимия / Э. Пирс. - М.: издательство иностранной литературы, 1962. - 962 с. 5. Принципы и методы гистоцитохимического анализа в патологии : [под ред. А. П. Авцына, А.И. Струкова, Б.Б. Фукса]. - Ленинград : Изд-во «Медицина»; Ленинградское отделение, 1971. - 368 с. 6. Синельников Р.Д. Новые направления в макро- микроскопической анатомии желез / Синель 5 ников Р.Д., Щетинський И.М. // Материалы VII Украинской республиканской конференции анатомов, гистологов и эмбриологов, посвященной 100летию со дня рождения академика В.П. Воробьѐва. - Харьков, 1976. - С. 99. 7. Шубич М.Т. Экономный метод дифференциального гистохимического анализа полисахаридов / Шубич М.Т., Лопунова Ж.К., Могильная Г.М. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1966. - № 1. - С. 71 - 74. 8. Щетинський И.М. Морфо-функциональная характеристика вено-окклюзионной болезни крупного рогатого скота / Щетинский И.М., Павлов М.Е. // Проблеми зооінженерії і ветеринарної медицини: Комп’ютерна верстка Мацело В. 67143 6 Збірник наукових праць Харківської державної зооветеринарної академії. - Харків : РВ ХДЗВА, 2003. - Вип. 11 (35). - Ч. 2.- С. 265-296. 9. International programme on chemical safety (IPCS). Pyrrolizidine Alkaloids. Enviromental Health Criteria 80.WHO. - Geneva, 1988. - 312 p. 10. Niebele J. Lehrbuch der speziellen pathologischen Anatomie der Haustire / J. Niebele und H. Cohrs. - Jena : Veb Gustav Fischer Verlag, 1970. - tell II. - 1286 s. 11. Spicer S. S. Histochemical differentiation of mammalian mucopolysaccharides / S. S. Spicer // Annales of the New York Academy of Sciences. 1963. - V. 106.-№ 2(3).-P. 379-388. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601