Спосіб прогнозування інтенсивності місцевої запальної реакції тканин пародонта у пацієнтів з ураженням тканин пародонта

Спосіб прогнозування інтенсивності місцевої запальної реакції тканин пародонта у пацієнтів з ураженням тканин пародонта, що є імунологічним 3 Задачею запропонованого способу є розробка способу прогнозування інтенсивності місцевої запальної реакції тканин пародонта у пацієнтів з ураженням тканин пародонта, котрий дозволить визначати інтенсивність запальної реакції не в крові, а безпосередньо в місцевій тканині та у вогнищі запалення, дозволить визначати по рівню цитокінів ефективність лікування та дозволить визначати тривалість запальної реакції та особливості її регресу після видалення зуба. Поставлена задача вирішується тим, що для більш надійної та вірогідної оцінки місцевої запальної реакції при патології тканин пародонта проводиться визначення рівня цитокінів в супернатанті 48 добової культури клітин пародонта, а не в крові чи слині, а також оцінюється рівень та співвідношення прозапального інтерлейкіну 1 та антизапального інтерлейкіну 4, що дозволяє прогнозувати інтенсивність запальної реакції та характер перебігу запалення тканин пародонта, шляхом визначення цитокінового профілю в тканинах пародонта. Технічним результатом від застосування корисної моделі є те, що реалізація даної корисної моделі дозволяє підвищити ефективність та надійність визначення вмісту прозапальних та протизапальних цитокінів у гранулематозній та грануляційній тканині периапікальної ділянки. Визначення кількісного вмісту інтерлейкінів є діагностично значущим показником інтенсивності запальної реакції тканин пародонта дає можливість призначення адекватного лікування та уникнення повної вторинної адентії. Спосіб виконується наступним чином та складається з декількох етапів. 1. Підготовчий етап - Методика забору тканин периапікальної області і отримання культури тканин. Перед проведенням провідникової анестезії пацієнти прополіскували порожнину рота 0,12 % розчином хлоргесидину упродовж 1 хв. Стерильним скальпелем № 15 робили трапецієвидний розріз. Тупо, гостро відшаровували слизово-окістний клапоть. Основа розрізу була звернена до перехідної складки. Клапоть відшаровували распатором від альвеолярного краю до перехідної складки. За допомогою стерильних фрез і борів різного діаметра здійснювали обробку периапікальної області з використанням сольового розчину в якості охолодження. Забір периапікальної тканини здійснювався за допомогою стерильної кюрети. При заборі периапікальної тканини із зубів, отриманих після екстракції, ця тканина відділялася від верхівки кореня за допомогою стерильного леза скальпеля. Зразки тканини поміщалися у флакони з поживним середовищем ДМЕМ (Дульбекко модифіковане поживне середовище Ігла), що містить антибіотики: гентаміцин (150 мкг/мл) негайно ж транспортувалися в лабораторію, зберігали при +4 °С не більше 4-х годин, а потім культивувалися на протязі 48 годин при температурі 37 °С в середовищі Ігла з 10 % ембріональною сироваткою. Після культивування методом центрифугування осаджуються клітини періодонта у супернатанті визначається рівень цитокінів ІЛ-1 та ІЛ-4. 67450 4 2 етап. Визначення рівня цитокінів у супернатантах клітин періодонта. Визначення вмісту прозапального цитокіну ІЛ-1 та антизапального ІЛ-4 проводилась за допомогою стандартних наборів для імуноферментного визначення цих цитокінів в даному випадку наборів «Вектор-Бест» Новосибірськ, Росія, згідно з інструкцією та рекомендаціями до цих наборів. 3 етап. Оцінка результатів та визначення характеру лікування. Після визначення рівня цитокінів в тканинах періодонта та сироватці крові проводили оцінку інтенсивності запальної реакції як значну та незначну в залежності від підвищення рівня ІЛ-1 та зниження рівня ІЛ-4. Значне підвищення рівня ІЛ-1 в 5-10 і більше разів та зменшення рівня ІЛ-4 в 1,5-2 рази, незначне - підвищення рівня ІЛ-1 в 1-5 разів і нормальний або підвищений рівень ІЛ-4. Клінічний приклад № 1 Хворий Д. 36 років, звернувся на кафедру стоматології НМАПО для санації порожнини рота з метою подальшого протезування. При першому відвідуванні хворий скаржився на періодично виникаючий дискомфорт при чищенні зубів та прийомі їжі, пов'язаний з кровоточивістю ясен, незначними больовими відчуттями. Крім того, скарги були на наявність коренів зруйнованих зубів, які не підлягали лікуванню. З анамнезу хворого було виявлено, що періодично (2-3 рази на рік) у нього на червоній облямівці губ виникають герпетичні висипання, що супроводжуються загостренням запальних явищ у порожнині рота. Дані обстеження. Слизова оболонка порожнини рота набрякла, гіперемована з синюшним відтінком. Рухомість зубів І-ІІ ступеня. При зондуванні в ділянці жувальної групи зубів верхньої та нижньої щелепи виявлені пародонтальні кишені глибиною 3-4 мм. Наявність значних зубних відкладень. Індекси гігієни : Greene- Wermillion 2,1, PI - 2,25, РМА - 45,8, індекс кровоточивості - II ст. На ортопантомограмі верхньої та нижньої щелепи відмічається зменшення висоти кісткової тканини між альвеолярних перетинок за рахунок резорбції на 1/3 довжини кореня у ділянці зубів верхньої щелепи та на 1/2 довжини кореня в ділянці коренів нижніх зубів. Часткова вторинна адентія (відсутні 15, 16, 36 зуби), коронкова частина 24, 25, 37 зубів зруйнована. На рентгенівських знімках 24, 25 зубів просвіт кореневих каналів заповнений пломбувальною масою на 2/3, періодонтальна щілина розширена, спостерігається деструкція тканин періодонта у верхівковій частині. На рентгенограмі 37 зуба коронкова частина зруйнована, спостерігається розрідження тканин по фуркації, періодонтальна щілина розширена, в апікальній частині дистального кореня спостерігається вогнище розрідження кісткової тканини округлої форми з чіткими контурами, діаметр якого 5 мм. Прикус змінений за рахунок вторинної травматичної оклюзії. Попередньо був поставлений діагноз хронічний гранулематозний періодонтит 37 зуба, хронічний гранулюючий періодонтит 24, 25 зубів. Генералізований пародонтит І-ІІ ступеня тяжкості, хронічний перебіг. Із анамнезу встановлено, що у пацієнта рецидиви герпетичних висипань виникають 2-3 рази на рік. Для уточ 5 67450 нення діагнозу було вирішено провести вірусологічне дослідження тканин периапікальної ділянки методом ПЛР. При вірусологічному обстеженні виявлено вірус простого герпеса 1 типу та цитомегаловірус. Таким чином за допомогою вірусологічного обстеження тканин периапікальної ділянки методом ПЛР у даного хворого був підтверджений соматичний діагноз хронічний рецидивуючий герпес та цитомегаловірусна інфекція у стані ремісії. Лікування - після ліквідації гострого запалення було проведено видалення коренів 37 зуба. Видалені корені, зразки тканини пародонта з лунок видаленого зуба та грануляційна тканина були використані для визначення вмісту інтерлейкіну 1-бета, інтерлейкіну-4 в тканинах пародонта. Було виявлено у хворого 12-кратне підвищення рівня ІЛ-1 та 2-кратне зниження рівня ІЛ-4 в порівнянні з сироваткою крові, де було незначне підвищення на 20 % рівня ІЛ-1 і нормальний рівень ІЛ-4. Було визначено і спрогнозовано наявність значного затяжного перебігу запалення, що потребувало тривалого лікування. Хворому було проведене наступне лікування: 1. Обробка слизової оболонки порожнини рота (СОПР) розчином антисептика (хлоргексидин 2 %). 2. Усунення місцевих подразників (зняття зубних відкладень, ревізія пародонтальних кишень). 3. Антибактеріальна терапія пародонтальних кишень (аплікації р-ну хлоргексидину 0,05 % для промивання пародонтальних кишень) в поєднання місцевого застосування протефлазиду у вигляді аплікацій (36 крап. розвести в 10 мл дистильованої води або фіз. розчину) протягом 10-14 днів (в залежності від тяжкості протікання захворювання). 4. Протизапальне лікування: 0,5 % водний розчин мефенамінату натрію у вигляді аплікацій та інстиляцій, при відсутності ексудативних процесів мазь «Мефенат» у вигляді аплікацій та інстиляцій під твердіючу пов'язку. 5. Репаративне лікування (внутрішньо - кларитин або цетрин (по 1 таб. 2 р/д. протягом 5-7 днів). Місцево - мазь «Мефенат» (комплексна дія: знеболююча, протизапальна, антибактеріальна і репаративна). Вітамінотерапія (аєвіт, 30 % токоферола ацетат, кверцетин в гранулах (для аплікацій 2 г розчинити в 10 мл теплої води) у вигляді аплікацій . 6. Імунокорегуюча терапія: протефлазид - починаючи з 2 тижня лікування протягом 2 тижнів по 10 крап. 3 р/д. внутрішньо, 4-й тиждень - по 8 крап. 3 р/д. протягом тижня. Кверцетин: внутрішньо - по 1 г 3 р/д. Гранули розчинити в ¼ склянки води і 6 приймати за 30 хв. до прийому їжі внутрішньо на протязі 5-10 днів. Місцево - аплікації протефлазида і кверцетина в гранулах на слизову оболонку ясен та інстиляція в пародонтальні кишені. Приклад № 2 Пацієнтка 18 років звернулася зі скаргами на кровоточивість і болючість ясен. Об’єктивно: у фронтальній ділянці верхньої і нижньої щелеп визначається скупченість зубів, гіперемія, ціаноз і розростання ясенних сосочків до 1/3 висоти коронок, значне відкладення м’якого нальоту. Попередньо був поставлений діагноз гіпертрофічний гінгівіт. Визначення рівня цитокінів виявило незначне підвищення рівня ІЛ-1 та великий рівень ІЛ-4, що свідчить про незначну запальну реакцію. Хворій було проведено первинне пародонтологічне лікування, а через 4-6 днів ясна були блідо-рожевого кольору, кровоточивості не відмічалось. Таким чином невисокий рівень ІЛ-1 або незначний рівень ІЛ-4 свідчить про незначну запальну реакцію, яка досить швидко регресує після проведення первинного пародонтологічного лікування. Рівень ІЛ-1 та ІЛ-4 в сироватці крові був в межах нормальних величин. Таким чином визначення рівня цитокінів у тканинах пародонта дозволяє визначити інтенсивність запалення та визначити об'єм лікування та наслідки запальної реакції. Запропонований нами спосіб має такі переваги: - визначення інтенсивності запальної реакції не в крові, а безпосередньо в місцевій тканині та у вогнищі запалення; - можливість визначення по рівню цитокінів ефективності лікування; - можливість визначення тривалості запальної реакції та особливості її регресу після видалення зуба. Література: 1. Інструкція по визначенню цитокінів ІЛ-1 та ІЛ-4 фірми Вектор-Бест, Росія. 2. Akira S., Hirano Т., Taga T. Biology of multifunctional cytokines: IL-6 and related molecules (IL-1 and TNF) Osaka, FASEB J., 2000., V.4, p. 2860-2867 3. Нестерова И.В. Алгоритмы обследования пациентов с вторичными иммунодефицитными состояниями, сопровождающимися ведущим синдромом вирусно-бактериальной инфекции // International Journal on Immunorehabilitation. - 2000. V. 2. - N 1. - P. 81-86. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601