Застосування штамів lactobacillus для лікування простатиту та доброякісної гіперплазії простати

Цей винахід стосується вакцини, що містить штами Lactobacillus, корисні для лікування простатиту та доброякісних гіперплазій простати (І та II стадії). Про патогенність деяких штамів Lactobacillus повідомляли у 1938 році. [F. Marshall: Der Doderleinische Bacillus vaginalis als Endokarditiserreger, Zentr. Bact. Parasit. Kde. I. Abt. Orig., 141:153-159 (1938); E. Biocca es A. Sepilli: Human infections caused by lactobacilli, J. Inf. Dis., 81:112-115 (1947); W. Sims: A pathogenic Lactobacillus, J. Path. Bact, 87:99-105 (1964); B. Rosan and B. F. Hammond: Toxicity of Lactobacillus casei, J. Dent. Res., 44:783787 (1965); M. E. Sharpe, L. R. Hill and S. P. Lapage: Pathogenic lactobacilli, J. Med., Microbiol., 6, 281-286(1973)]. У 1952 році, Ґ. Від (G.Wied) повідомив [Zbl. Bact, 160:413 (1952)], що певні штами Lactobacillus виявляють активність, яка призводить до пошкодження слизової оболонки. Розен та Хеммонд (Rosan and Hammond) [1965, ibid.] повідомили, що, якщо штами Lactobacillus дуже патогенні для мишей, то інтрадермальна інокуляція бактерій, як у живому так і у термічно інактивованому станах, спричиняється до некрозу спинної частини кролів. К. Уйгелі (К. Ujhelyi) виявив, що некроз також може бути спричинений штамами Lactobacillus, культивованими із піхві. Беручи за основу це спостереження, можна стверджувати, що тільце бактерії містить токсин, який відповідає за руйнування епітелію [Ujhelyi К. et al.\ Role of Lactobacillus in urogenital inflammations and their treatment with vaccination, Symposium cum participatione internationalis de Biocenosi Vaginae, Smolenie, 1983]. Деякі штами після інтрадермального уведення у спину кролям, викликали некроз на меншій чи більшій площі, інші викликали некроз лише у високій концентрації або не викликали некрозу взагалі. К. Уйгелі виявив, що кролів можна імунізувати вакцинацією проти некротичного ефекту. Він уводив кролям внутрішньом'язово вакцину, одержану з певних штамів Lactobacillus, через 6 тижнів уводив інтрадермально суспензію клітин, одержаних зі штамів, які раніше виявляли некротичний ефект, і помітив, що некроз не виявлявся або виявлявся у меншому ступені, на відміну від невакцинованих кролів. Крім того, К. Уйгелі помітив, що Trichomonas vaginalis сприяє підвищенню піхвового рН через поглинання молочної кислоти, виробленої штамами Lactobacillus у піхві, таким чином викликаючи надмірне розмноження штамів Lactobacillus; отже токсин, що утворився, має високу концентрацію і, пошкоджуючи слизову оболонку, спричиняється до некрозу клітин. Відомо також, що штами Lactobacillus через антибіотичну та пригнічуючу акцептори активність, а також здатність до регулювання рН, суть антагоністами піогенних мікроорганізмів [Reddy etal.: Natural antibiotic activity of Lactobacillus, Dairy Prod. J. 18:15-22(1983); Salminen et al.: Lactic acid bacteria in the gut in normal and disorded states. Dig. Dis.. 10:227-238(1992)]. Останнім часом було виявлено, що штами Lactobacillus можуть приєднуватися безпосередньо до Тлімфоцитів, оскільки як Т-клітини-хелпери, так і Т-клітини-кілери мають особливі рецептори для штамів Lactobacillus. Крім того, штами Lactobacillus сприяють виробленню гамма-інтерферону лімфоцитів та цитотоксичній активності природних клітин-кілерів [De Simone С. et al.: Enhancement of immune response of murine Peyer's pothes by a diet supplemented with yoghurt, J. Immunopharmacol., 1:87-95 (1987)]. Також стало відомо, що штами Lactobacillus неспецифічно підвищують вироблення імуноглобуліну Μ та імуноглобуліну G [Blocksma et al.: Adjuvant activity of lactobacilli, different effects of viable and killed bacteria, Clin. Exp. Immunol., 37:367-373]. Додатково, в експериментальних умовах було виявлено, що штами Lactobacillus мають протипухлинну активність та активність, що активізує макрофоги [Kato I. et al.: Antitumor activity of Lactobacillus casei in mice, Gann, 72:517-523 (1983); Oda M. et al.: Antitumor polysaccharide from Lactobacillus sp., Agric Biol. Chem., 47:1623-1627 (1983)]. Г. Рюттґерс (Η. Ruttgers) дійшов висновку, що імуностимулювання штамами Lactobacillus викликає значне довготривале підвищення рівня секреторного імуноглобуліну у піхві [Bacterial vaginitis: Protection against infection and secretory immunoglobulin levels in the vagina after immunization therapy with Gynatren, Gynecol. Obstet Invest, 26:240-249(1988)]. K. Уйгелі et al. [1983, ibid] парентерально вводили штами Lactobacillus для неспецифічного імуностимулювання і помітили, що застосовані штами Lactobacillus, на відміну від іншого неспецифічного імуностимулювання (наприклад, БЦЖ, ендотоксинами, тощо), виявляють ефект захисту від деяких бактеріальних токсинів. Особливо це стосується токсичних штамів Lactobacillus. У дослідах із використанням вакцин (Gynevac®, Gynatren®, SolcoTrichovac®), утворених зі штамів, культивованих Уйгелі, було показано, що імуностимулювання штамами Lactobacillus, на відміну від інших способів лікування, відновлює біологічний баланс піхви, нормалізує рН, зменшує число патогенних бактерій та сприяє розмноженню флори Дедерляйна (Doderlein) (змішана популяція штамів Lactobacillus, яку можна культивувати з піхви). Сьогодні вже доведено, що запальні захворювання піхви, викликані бактеріальними інфекціями та інфекціями Trichomonas, можна лікувати таким способом краще ніж іншим, і що такі запальні стани є найголовнішою причиною передчасних пологів. Отже, число передчасних пологів може бути зменшено завдяки такому лікуванню [див. наприклад, у Genitalinfektion der Frau (Solco Trichovac/Gynatren), Geburtsch. u. Frauenheilk., 44:311 (1984); E. Lazar, Gy. Varga, I. Institoris та К. Ujhelyi: Дослідження факторів, що впливають на передчасні пологи, особливо вакцинацію молочно-кислими бактеріями, у Казінцбарциці (угорською), Magyar Noorvosok Lapja (Вісник угорських гінекологів), 51:353-356 (1986); Е. Lazar, Gy. Varga, I. Institoris and K. Ujhelyi: Зниження кількості новонароджених малої ваги через вакцинацію вагітних жінок молочно-кислими бактеріями (угорською), Orvosi Hetilap (Лікарський тижневик), 37:2263-2268 (1981); Ruttgers, 1988. ibid.; K. Ujhelyi, Gy. Philipp, Gy. Plank and V. Sagi: Трихомонозний'синдром І (угорською), Magyar Noorvosok Lapja (Вісник угорських гінекологів), 36:433-442 (1973); Sharon etal., New England Journal, December 28,1995.] Більше ніж 50% чоловіків у віці 50 років чи старших страждають на гіперплазію простати та/або на простатит. Незважаючи на велику кількість відомих та використовуваних способів лікування, які часто виявляються безуспішними, такі пацієнти потребують ефективнішого лікування. Зважаючи на відомий та загально прийнятий патогенез, не слід припускати, що такі хвороби можна з успіхом вилікувати вакциною, яка містить штами Lactobacillus. Проте, винахідники цього винаходу виявили, що у простаті існують умови, сприятливі для проліферації штамів Lactobacillus і, що патогенні молочно-кислі бактерії часто можна культивувати від хворих на хронічний простатит та/або на гіперплазії простати. На основі цього спостереження, було розроблено терапевтичне застосування вакцини, що містить штами Lactobacillus, для лікування таких пацієнтів. Цей винахід стосується вакцин для лікування простатиту та доброякісних гіперплазій простати (І та II стадії), які містять штами Lactobacillus у інактивованій формі, носії та/або ексципієнти, загально використовувані у вакцинах. Винахід також стосується використання штамів Lactobacillus для виготовлення вакцин, придатних для лікування простатиту та доброякісних гіперплазій простати (І та II стадії). Ще одним об'єктом винаходу є використання штамів Lactobacillus для лікування хворих, які страждають на простатит та доброякісні гіперплазії простати (І та II стадії). Крім того, винахід стосується способу лікування хворих на простатит та доброякісні гіперплазії простати (І та II стадії), який полягає у внутрішньо м'язовому введенні ефективної дози суспензії штамів Lactobacillus, хворому, який потребує такого лікування. У кращому варіанті способу згідно з винаходом суспензія штамів Lactobacillus складається із суміші популяцій цих штамів у інактивованій формі. Молочно-кислі бактерії, які використовують у вакцині згідно з винаходом, то штами Lactobacillus, що мають застосування у зазначених вище вакцинах Gynevac®, Gynatren®, SolcoTrichovac®, які попередньо культивували від жінок, що страждають на гінекологічні запалення бактеріального походження. Поодинокі культивовані штами можна застосовувати як окремо, так і в їх суміші. Вакцину згідно з винаходом можна одержати загальновідомими способами виготовлення вакцин. Культивовані штами переважно зберігають у ліофілізованій формі, а безпосередньо перед застосуванням їх культивують у середовищі Мана-Рогози-Шарпа (Man-Rogosa-Sharpe) при температурі 45°С. Склад цього середовища та спосіб отримання вакцини наведено далі. У 2300 мл стерилізованої води послідовно, після розчинення попередньо доданих, додають такі інгредієнти: Bactotripton (Reanal) 30 г Lablemko (Reanal) 30 г K2HPO4 6г Цитрат триамонію 6г Ацетат натрію 15г Глюкоза 30 г Лактоза 30 г Мальтоза 9г Екстракт дріжджів (Reanal) 15г Tween 80 3 мл Сольовий розчин (склад див. нижче) 15 мл Одержаний розчин розводять стерилізованою водою до 3000 мл, пропускають крізь фільтр G4, розливають у посуд меншого об'єму та стерилізують при температурі 121°С. Зазначений сольовий розчин має такий склад: 28,75 г MgSO4· 7H2O, 6г MnSO4 - 2Η2Ο та 1,7 FeSO4- 7H2O розчинені у 250 мл стерилізованої води. Культивовані клітини збирають центрифугуванням, осад суспендують у фізіологічному сольовому розчині та обробляють формальдегідом. Інактивовані клітини збирають та ще раз суспендують у фізіологічному сольовому розчині. Рівень розчинення регулюють відповідно до вмісту білку у суспензії. Вміст білку у вакцині (суспензії) згідно з винаходом становить щонайменше 0,08 мг/мл, може сягати 1 мг/мл чи більше, бажано приблизно від 0,08 до 0,32 мг/мл, краще приблизно 0,16 мг/мл. Доза вакцини, а також частота її введення залежать від стану хворого, а також гостроти симптомів. Чітко визначену дозу та частоту введення повинен визначати лікар. Як показує практика, краще, коли під час лікування вакцину уводять внутрішньо м'язово у об'ємі 1 мл, один раз на тиждень, всього 5 разів. Наступнийприклад наведено з метою ілюстрації винаходу, без обмеження його об'єму. ПРИКЛАД Дослідження проводили введенням вакцини пацієнтам з діагнозом простатит та/або доброякісні гіперплазії простати (І та II стадії). Один раз на тиждень протягом 5 тижнів хворим вводили внутрішньо м'язово 1 мл вакцини, яка містила штами Lactobacillus. Будь-якого іншого лікування хворі не отримували. Результати контрольного огляду, проведеного після такого лікування, наведено у наступних Таблицях. Кількість пацієнтів: 127 Діагноз: гіперплазія простати І та II стадій Час після лікування Стан пацієнтів Вилікувано Покращився Не змінився Погіршився від 4 до 8 тижнів 52 (40,94%) 47 (37,0%) 28 (22,0%) 0 від 2 до 4 місяців 6 місяців Погіршення стану не спостерігали у жодного з пацієнтів у 60% з 94 досліджених пацієнтів симптомів захворювання не виявлено Кількість пацієнтів: 168 Діагноз: простатит Час після лікування Стан хворих від 4 до 8 тижнів від 2 до 4 місяців 6 місяців Вилікувано Покращився Не змінився Погіршився 76 (45,23%) 61 (36,31%) 31 (18,45%) 0 Погіршення стану не спостерігали у жодного з пацієнтів у 70% з 79 досліджених пацієнтів симптомів захворювання не виявлено Як видно з вищенаведених Таблиць, значну кількість пацієнтів було вилікувано або ж їх стан суттєво покращився.