Спосіб одержання біомаси колібактерій для бактерієвмісних препаратів та композиція сухої біомаси колібактерій

1. Спосіб одержання біомаси колібактерій для бактерієвмісних препаратів, що включає вирощування біомаси колібактерій у живильному середовищі, змішування біомаси з захисним середовищем, концентрування та висушування біомаси, який відрізняється тим, що вирощування біомаси колібактерій проводять під тиском не вище 0,03 атм., вирощену біомасу охолоджують до темпера C2 2 (19) 1 3 розморожують, змішують з знежиреним молоком і висушують методом розпилення. Недоліком відомого способу є невисокий термін зберігання колібактерій з високою активністю (не більше року). Найбільш близькою є також композиція сухої біомаси колібактерій, що включає суху біомасу колібактерій, змішану з захисним середовищем [2]. Зазначена композиція містить біомасу колібактерій, вирощену під тиском біля 0,3атм., яку після концентрування шляхом центрифугування змішують з захисним середовищем. При цьому захисне середовище отримують з 10%-ного розчину знежиреного сухого молока і 20%-ного розчину сахарози. Отриману композицію заморожують і зберігають при температурі мінус 70°С до 18 місяців, розморожену композицію, додатково змішану з захисним середовищем, висушують методом розпилення. Недоліком відомої композиції є невисокий термін зберігання колібактерій з високою активністю (не більше року). Задачею винаходу є удосконалення способу одержання біомаси колібактерій для бактерієвмісних препаратів, в якому за рахунок запропонованих умов вирощування біомаси та обробки біомаси, підвищується термін активності отриманої біомаси. Задачею винаходу є удосконалення композиції сухої біомаси колібактерій, в якій за рахунок використання біомаси колібактерій, вирощених і оброблених певним чином, а також за рахунок π складу, підвищується термін активності біомаси. Поставлена задача вирішується запропонованим способом одержання біомаси колібактерій для бактерієвмісних препаратів, що включає вирощування біомаси колібактерій у живильному середовищі, змішування біомаси з захисним середовищем, концентрування та висушування біомаси, в якому вирощування біомаси колібактерій проводять під тиском не більше 0,03атм., вирощену біомасу охолоджують до температури 6...9°С і змішують з захисним середовищем, а концентрування здійснюють після змішування біомаси з захисним середовищем при заморожуванні та ліофільному висушуванні за режимом: заморожування при температурі мінус (60...80)°С протягом 20-25, підвищення до температури 30-37°С протягом 75-85 годин. Як захисне середовище, з яким змішують вирощену біомасу, використовують желатину та сахарозу при наступному співвідношенні компонентів, % мас.: желатин 3...5 сахароза 8...10 біомаса решта. Поставлена задача вирішується також запропонованою композицією сухої біомаси колібактерій, що включає суху біомасу колібактерій, змішану з захисним середовищем, в якій зазначена біомаса колібактерій отримана вищеописаним способом і додатково містить стеарат магнію та лактозу при наступному співвідношенні компонентів, % мас.: біомаса колібактерій 4...15 стеарат магнію 1...8 лактоза решта. 92518 4 Експериментально нами було встановлено, що при проведенні вирощування біомаси колібактерій під тиском не вище 0,03атм. та здійснення після змішування з захисним середовищем одночасно концентрування і висушування шляхом заморожування і ліофільного висушування, приводить по подовження терміну активності сухої біомаси, що містить також стеарат магнію і лактозу. Винахід здійснюється таким чином. Вирощування біомаси колібактерій проводять у ферментері (наприклад, біорі) у живильному середовищі під тиском не вище 0,03атм. Температуру підтримують 37°С. Процес вирощування біомаси проводять при постійній подачі у живильне середовище стерильного повітря та перемішування з частотою 20-30об./хв. рН підтримувалося в межах 6,0-6,5 розчином аміаку (5%-ний) та розчином глюкози (40%-ний). Процес вирощування контролювали за показником оптичної густини. Після закінчення процесу вирощену біомасу охолоджують у біору до температури 6...9°С і змішують з захисним середовищем. Як захисне середовище використовують желатину та сахарозу при наступному їх співвідношенні, % мас.: желатин 3...5, сахароза - 8...10, біомаса - решта. Отриману суміш перемішують і стерильним повітрям під тиском розливають у стерильні ємності із нержавіючої сталі та концентрують при заморожуванні та ліофільному висушуванні за режимом: заморожування при температурі мінус (60...80)°С протягом 20-25годин, підвищення до температури 30-37°С протягом 75-85 годин. Вологість отриманого продукту (сухої біомаси колібактерій) - не вище 7%. Отриману суху біомасу колібактерій переносять до змішувача, додають стеарат магнію та лактозу при наступному їх співвідношенні, % мас.: біомаса колібактерій - 4...15, стеарат магнію - 1...8, лактоза - решта. Вміст бактерій Escherichia coli в 1мг 1010...1013. Нижче наведені приклади, що демонструють, але не обмежують винахід. Приклад 1 До бору вносять 123л підготовленого казеїнового бульйону, що є живильним середовищем для Escherichia coli, та другу генерацію маточної культури штаму М-17. Вирощування біомаси колібактерій проводили при температурі 37°С, тиску 0,03атм., постійній подачі у живильне середовище стерильного повітря, перемішування з частотою 20об./хв. та рН в межах 6,0. Процес нарощування біомаси тривав 4,5 годин. Вирощену біомасу (121л) охолоджували до температури 8°С і змішували з захисним середовищем: 6,0л желатини і 12л сахарози. Отриману суміш перемішують і стерильним повітрям під тиском розливають у стерильні ємності із нержавіючої сталі та концентрують при заморожуванні та ліофільному висушуванні за режимом: заморожування при температурі мінус 60°С протягом 25 годин, підвищення до температури 33°С протягом 80 годин. Вологість отриманого продукту - 5%. Отриману суху біомасу колібактерій зібрали у стерильну ємність, гомогенізували 5 92518 у гомогенізаторі фірми «Warning» і додали додають стеарат магнію та лактозу при наступному їх співвідношенні: біомаса колібактерій - 0,6кг (15% мас.), стеарат магнію - 0,3кг (7,5% мас.), лактоза 3,1кг (77,5% мас.). Одержали 4 кг композиції сухої біомаси колібактерій з активністю 1013 у 1мг продукту. Після 3х років зберігання активність біомаси складала 1011. Приклад 2 До біору вносять 300л підготовленого казеїнового бульйону, що є живильним середовищем для Escherichia coli, та другу генерацію маточної культури штаму М-17. Вирощування біомаси колібактерій проводили при температурі 37°С, тиску 0,01атм, постійній подачі у живильне середовище стерильного повітря, перемішування з частотою 30об./хв. та рН в межах 6,5. Процес нарощування біомаси тривав 3,5 годин. Вирощену біомасу (300л) охолоджували до температури 6°С і змішували з захисним середовищем: 12,5л желатини і 28,5л сахарози. Отриману суміш перемішують і Комп’ютерна верстка А. Рябко 6 стерильним повітрям під тиском розливають у стерильні ємності із нержавіючої сталі та концентрують при заморожуванні та ліофільному висушуванні за режимом: заморожування при температурі мінус 80°С протягом 20 годин, підвищення до температури 30°С протягом 75 годин. Вологість отриманого продукту - 7%. Отриману суху біомасу колібактерій зібрали у стерильну ємність, гомогенізували у гомогенізаторі фірми «Warning» і додавали стеарат магнію та лактозу при наступному їх співвідношенні: біомаса колібактерій - 1,5кг (10% мас.), стеарат магнію - 0,75 кг (5% мас.), лактоза 12,75кг (85% мас.). Одержали 15кг композиції сухої біомаси колібактерій з активністю 1012 у 1мг продукту. Після 3х років зберігання активність біомаси складала 1011. Запропонований винахід дозволяє отримувати композицію сухої біомаси колібактерій, з високою активністю, яка зберігається протягом тривалого часу (біля трьох років). Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601