Спосіб одержання біомаси колібактерій

1. Спосіб одержання біомаси колібактерій, що включає внесення до живильного середовища інокуляту, культивування біомаси у живильному середовищі на основі гідролізату казеїну при коригуванні рН і постійному аеруванні, який відрізняється тим, що як інокулят використовують культуру другої генерації маточної культури Escherichia coli, як живильне середовище використовують казеїновий бульйон, культивування біомаси проводять при тиску не більш як 0,3 атм та додаванні C2 2 (19) 1 3 75232 4 включає внесення до живильного середовища зи та відбору проб, триває протягом 13-17 хв. при інокуляту, культивування біомаси у живильному 70-100 об./хв. В процесі культивування біомаси рН середовищі на основі гідролізату казеїну при підтримують на рівні 4,9-7,8. Коригування рН коригуванні рН, і постійному аеруванні, в якому як здійснюють 5-10%-им розчином аміаку. Кінець інокулят використовують культуру другої генерації процесу культивування встановлюють за оптичматочної культури Escherichia coli, як живильне ною щільністю. середовище використовують казеїновий бульйон, Нарощування біомаси займає 5-8 годин. культивування біомаси проводять при тиску не Кількість біомаси після концентрування станобільш як 0,3 атм та додаванні глюкози, причому вить - 6 - 11 кг. при коригуванні рН та/або додаванні глюкози Приклад 1 здійснюють перемішування. При цьому, рН Ліофілізований штам Escherichia coli M-17 з підтримують на рівні 4,9 - 7,8 за допомогою 5-10 ампули розводять казеїновим бульйоном методом %-ного розчину аміаку. десятикратних розведень. Краще, зазначене перемішування здійснювати Посіви у вигляді окремих ізольованих колоній протягом 13 - 17 хв. при 70-100об./хв. витримують у балоні, наповненому на чверть Для одержання інокуляту першу та другу казеїновим бульйоном, при температурі 37°С прогенерації маточної культури Escherichia coli виротягом 24 годин. щують у живильному середовищу, де як таке таПри відсутності сторонньої мікрофлори в мазкож використовують казеїновий бульйон. ках і контрольних середовищах, типові колонії При культивуванні біомаси, яке здійснюють першої генерації пересівають у балон, наповненопри температурі 37±1 °С, глюкозу додають у му на чверть казеїновим бульйоном. Посіви витвигляді 40 %-ного водного розчину. римують при температурі 37 °С протягом 25 годин. Експериментальне нами були виявлені умови, До біору у підготовлене живильне середовище що є найбільш сприятливими для нарощування - казеїновий бульйон (маса 60 л, температура 37 біомаси бактерій Escherichia coli та використання °С) вносять культуру другої генерації маточної живильного середовища. Було встановлено, що культури Escherichia coli M-17 (Інокулят). Інокулят нарощування біомаси у казеїновому бульйоні при подається всмоктуванням за допомогою вакууму. додаванні глюкози при аеруванні і обмеженому Культивування біомаси проводять при постійній перемішуванні проходить енергійно і продуктивно аерації живильного середовища стерильним атмобез утворення баластних речовин. сферним повітрям, при температурі 37 °С, Спосіб здійснюється таким чином. додаванні глюкози у вигляді 40%-ного водного Ліофілізований штам Escherichia coli M-17 з розчину і коригуванні рН. Тиск підтримують на ампули розводять казеїновим бульйоном методом рівні 0,2 атм. Під час коригування рН, додавання десятикратних розведень. розчину глюкози та під час відбору проб Казеїновий бульйон готують з гідролізату перемішування здійснюють протягом 15 хвилин казеїну, який фільтрують, розводять водою очипри 70 об./хв. В процесі культивування біомаси рН щеною або для ін'єкцій. Суміш перемішують і допідтримують на рівні 5,0 - 5,5. Коригування рН водять середовище до кипіння. Доводять рН до здійснюють 5%-им розчином аміаку. Кінець проце7,8 - 7,9 розчином NaOH. Додають фосфорнокиссу культивування встановлюють за оптичною лий натрій двузаміщений, кип'ятять протягом 5 щільністю. хвилин і залишають до повного осадження. Нарощування біомаси тривало 6 годин. Бульйон фільтрують, додають желатини і крохКількість біомаси після концентрування мальний клейстер і стерилізують. 10,6кг. Посіви у вигляді окремих ізольованих колоній Приклад 2 витримують у балоні, наповненому на чверть Ліофілізований штам Escherichia coli M-17 з казеїновим бульйоном, при температурі 37±0,5 °С ампули розводять казеїновим бульйоном методом протягом 12-35 годин. десятикратних розведень. При відсутності сторонньої мікрофлори в мазПосіви у вигляді окремих ізольованих колоній ках і контрольних середовищах, типові колонії витримують у балоні, наповненому на чверть, при першої генерації пересівають у балон, наповненотемпературі 37°С протягом 18 годин. При му на чверть казеїновим бульйоном. Посіви витвідсутності сторонньої мікрофлори в мазках і конримують при температурі 37±0,5 °С протягом 15трольних середовищах, типові колонії першої 35 годин. генерації пересівають у балон, наповненому на До біору об'ємом 250 дм3 у підготовлене жичверть казеїновим бульйоном. Посіви витримують вильне середовище -казеїновий бульйон (маса 60 при температурі 37 °С протягом 25 годин. - 140 л, температура 37±0,5 °С) вносять інокулят До біору у підготовлене живильне середовище культуру другої генерації маточної культури Esche- казеїновий бульйон (маса 140 л, температура 37 richia coli M-17. Інокулят подається за допомогою °С) вносять культуру другої генерації маточної тиску або всмоктується за допомогою вакууму. культури Escherichia coli M-17 (інокулят). Інокулят Культивування біомаси проводять при постійній подається за допомогою тиску. Культивування аерації живильного середовища стерильним атмобіомаси проводять при постійній аерації живильносферним повітрям при температурі 37±0,5 °С, го середовища стерильним атмосферним додаванні глюкози у вигляді 40%-ного водного повітрям, при температурі 37 °С, додаванні глюкорозчину і коригуванні рН. Тиск підтримують не зи у вигляді 40%-ного водного розчину і більш як 0,3 атм. Перемішування, яке здійснюють коригуванні рН. Тиск підтримують на рівні 0,3 атм. під час коригування рН, додаванні розчину глюкоПід час коригування рН, додавання розчину глюко 5 75232 6 зи та під час відбору проб перемішування Кількість біомаси після концентрування - 9,8 кг. здійснюють протягом 13 хвилин 100 об./хв. В Таким чином, запропоновано ефективний процесі культивування біомаси рН підтримують на спосіб вирощування біомаси бактерій Escherichia рівні 6,5 - 7,0. Коригування рН здійснюють 10%-им coli, який дозволяє скоротити тривалість процесу розчином аміаку. Кінець процесу культивування нарощування біомаси та зменшити кількість балавстановлюють за оптичною щільністю. стних речовин у отриманій біомасі. Нарощування біомаси тривало 7 годин. Комп’ютерна верстка М. Клюкін Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601