Спосіб одержання біомаси бактерій для бактерієвмісних препаратів

1. Спосіб одержання біомаси бактерій для бактерієвмісних препаратів, який передбачає вирощування бактерій у елективному поживному середовищі, концентрування біомаси, змішування концентрованої біомаси з захисним середовищем і висушування біомаси у присутності середовища висушування, який відрізняється тим, що після змішування концентрованої біомаси з захисним середовищем її піддають заморожуванню при те C2 2 77827 1 3 77827 4 ку життєздатність одержаних за відомим способом воляє використовувати вирощену біомасу бактерій мікробних клітин, яка особливо знижується з чачерез 1,5-2 роки. сом. Запропонований спосіб не дозволяє викориСпосіб здійснюється таким чином. стовувати біомасу бактерій для виробництва бакДо біору у підготовлене середовище вносять терійвмісних препаратів через тривалий час, інокулят - культуру певного виду бактерій. Інокулят наприклад 6-12 місяців після її вирощування. подається за допомогою тиску чи втягується за Найбільш близьким є спосіб одержання допомогою вакууму, після чого у біору створюють біомаси бактерій для бактерійвмісних препаратів, необхідні умови для культивування біомаси. що включає вирощування бактерій у елективному При вирощуванні біомаси біфідобактерій як живильному середовищі, концентрування біомаси, поживне середовище використовують, зокрема, змішування концентрованої біомаси з захисним біфідум-середовище, при вирощуванні біомаси середовищем і висушування біомаси у присутності бактерій Escherichia coli як поживне середовище середовища висушування (RU, патент на винахід використовують казеїновий бульйон, і при виро№2140787, кл. A61K 35/74, опубл. 10,11.1999 [1]). щуванні біомаси лактобактерій використовують При вирощувані за відомим способом бактерій B. казеїново-дріжджове середовище. Нарощування bifidum число життєздатних біфідобактерій у 1 біомаси займає 5-10 годин. грамі порошку становить 109-1010 клітин. Сухий Біомасу бактерій переносять до центрифуги і препарат, одержаний за даним способом, має доконцентрують її при обертанні центрифуги зі бру сипучість і розчинність. швидкістю 10000об./хв., після чого концентровану Недоліком відомого способу є неможливість біомасу змішують з захисним середовищем у використання біомаси бактерій для виробництва співвідношенні 1:1. Як захисне середовище викобактерійвмісних препаратів через 12-18 місяців ристовують склад, приготовлений з 10%-ного розпісля її вирощування. Так, через 12 місяців чину знежиреного сухого молока і 20%-ного розчизберігання при температурі 6-10°С (в холодильнину са харози, змішаних у співвідношенні 4:1 за ку) число життєздатних біфідобактерій у 1 грамі об'ємом. порошку становить 108-109 клітин, через 18 місяців Біомасу бактерій, змішану з захисним середо- 103-105. вищем, піддають заморожуванню при температурі Задачею винаходу є удосконалення способу мінус 60 - мінус 80°С. Заморожування здійснюють одержання біомаси бактерій для бактерійвмісних у холодильних системах типу "Jouan". В таких сиспрепаратів, в якому за рахунок запропонованої темах заморожена біомаса може зберігатися триобробки вирощених клітин біомаси забезпечується валий час (від кількох годин до двох років). можливість збереження біомаси бактерій з висоПотім біомасу розморожують, змішують з секою активністю клітин протягом тривалого часу і редовищем висушування і піддають висушуванню, можливість використання біомаси бактерій через наприклад методом ліофілізації чи розпилення. Як 1,5-2 роки після її вирощування для виробництва середовище висушування використовують молоко бактерійвмісних препаратів при збереженні висознежирене, сахарозо-желатину або сахарозу. кої активності клітин бактерій. Для кращого розуміння винахід ілюструється Поставлена задача вирішується запропоноваприкладами. ним способом одержання біомаси бактерій для Приклад 1 бактерійвмісних препаратів, що включає вирощуДо біору у підготовлене біфідум-середовище вання бактерій у елективному живильному серемасою 100л і температурою близько 38°С вносили довищі, концентрування біомаси, змішування конінокулят - культуру другої генерації маточної кульцентрованої біомаси з захисним середовищем і тури B. bifidum. Інокулят подавали за допомогою висушування біомаси у присутності середовища тиску, після чого у біору було створено тиск 0,3атм висушування, в якому після змішування конценінертним газом аргоном. Культивування біомаси трованої біомаси з захисним середовищем її проводили при температурі близько 38°С. піддають заморожуванню при температурі (-60)-(Нарощування біомаси проходило протягом 8 80)°С, а висушування біомаси здійснюють після годин. розморожування біомаси і змішування її з середоОдержану біомасу концентрували шля хом вищем висушування. центрифугування при 10000об./хв. Кількість Запропонований спосіб використовували при біомаси після концентрування - 10,5л. вирощувані бактерій B. bifidum, Escherichia coli та Концентровану біомасу змішали з 10,5л залактобактерій Lactobacteriums acidophilus. хисного середовища, який одержали змішуванням Як середовище висушування використовують 8,4л 10%-ного розчину знежиреного сухого молока молоко знежирене, сахарозо-желатину або сахаі 2,1л 20%-ного розчину сахарози. розу. Біомасу бактерій B. bifidum, змішану з захисЯк захисне середовище використовують ним середовищем, заморозили при температурі склад, приготовлений з 10 Усного знежиреного мінус 60°С. Заморожування проводили у холосухого молока і 20%-ної сахарози, змішаних у дильній камері "Jouan". співвідношенні 4:1 за об'ємом. Через 18 місяців біомасу розморозили, Експериментальне нами було встановлено, змішали з сахарозо-желатиновим середовищем і що заморожування концентрованої біомаси з зависушили методом розпилення з одержанням сухисним середовищем при температурі мінус 60 хої біомаси бактерій. мінус 80°С, проведене до змішування концентроЧисло життєздатних біфідобактерій у 1 граму ваної біомаси з середовищем висушування дозвопорошку сухої біомаси бактерій відразу після ляє підвищити виживаність мікроорганізмів, і дозодержання становить 109-1010 клітин, через 3 5 77827 6 місяця після одержання 109-1010 клітин, через 6 змішали з молоком знежиреним і висушили метомісяців після одержання - 109-1010, через 12 дом розпилення з одержанням сухої біомаси бакмісяців після одержання - 108-109. терій. Приклад 2 Число життєздатних Escherichia coli у 1 граму Одержання біомаси здійснювали як описано у порошку сухої біомаси бактерій відразу після прикладі 1. одержання становить 1010-1012 клітин, через 3 Концентровану біомасу у кількості 9,6л місяця після одержання 109-1010 клітин, через 6 змішали з 9,6л захисного середовища, який одермісяців після одержання - 109-1010, через 12 жали змішуванням 7,68л 10%-ного розчину знежимісяців після одержання - 108-109. реного сухого молока і 1,92л 20%-ного розчину Приклад 4 сахарози. До біору у підготовлене поживне середовище Біомасу бактерій B. bifidum, змішану з захисказеїново-дріжджове середовище КД-5 (маса 60л, ним середовищем, заморозили при температурі температура 38°С) вносять інокулят - культуру мінус 80°С. Заморожування проводили у холодругої генерації маточної культури Lactobacteriums дильній камері "Jouan", acidophilus. Інокулят подається за допомогою тисЧерез 24 місяці біомасу розморозили, змішали ку. Культивування біомаси проводили при темпез сахарозою і висушили методом ліофілізації з ратурі 38°С. Тиск підтримували 0,2атм очищеним одержанням сухої біомаси бактерій. атмосферним повітрям. Число життєздатних біфідобактерій у 1 граму Нарощування біомаси проходило протягом 9 порошку сухої біомаси бактерій відразу після годин. одержання становить 109-1010 клітин, через 3 Одержану біомасу концентрували шля хом місяця після одержання 109-1010 клітин, через 6 центрифугування при 10000об./хв. Кількість місяців після одержання - 109-1010, через 12 біомаси після концентрування - 8,5л. місяців після одержання - 108-109. Концентровану біомасу змішали з 8,5л захисПриклад 3 ного середовища, який одержали змішуванням До біору у підготовлене середовище - ка6,8л 10%-ного розчину знежиреного сухого молока зеїновий бульйон масою 60 л і температурою і 1,7л 20%-ного розчину сахарози. близько 37°С вносили інокулят - культур у др угої Біомасу бактерій Lactobacteriums acidophilus, генерації маточної культури Escherichia coli M-17. змішану з захисним середовищем, заморозили при Інокулят подавали за допомогою тиску, після чого температурі мінус 60°С. Заморожування проводиу біору було створено тиск 0,3атм інертним газом ли у холодильній камері "Jouan". аргоном. Культивування біомаси проводили при Через 24 місяці біомасу розморозили, змішали постійній аерації живильного середовища стез сахарозо-желатиновим середовищем і висушили рильним атмосферним повітрям, при температурі методом ліофілізації з одержанням сухої біомаси 37°С. бактерій. Нарощування біомаси проходило протягом 6 Число життєздатних Lactobacteriums acidophiгодин. lus у 1 граму порошку сухої біомаси бактерій Одержану біомасу концентрували шля хом відразу після одержання становить 109-1010 клітин, центрифугування при 10000об./хв. Кількість через 3 місяця після одержання 109-1010 клітин, біомаси після концентрування - 10,6л. через 6 місяців після одержання - 109-1010, через Концентровану біомасу змішали з 10,6л за12 місяців після одержання - 108-109. хисного середовища, який одержали змішуванням Таким чином, запропонований винахід дозво8,48л 10%-ного розчину знежиреного сухого мололяє забезпечити високу активністю клітин протяка і 2,12л 20%-ного розчину сахарози. гом тривалого часу і можливість використання Біомасу бактерій Escherichia coli, змішану з забіомаси бактерій через 1,5-2 роки після її вирощухисним середовищем, заморозили при темперавання для виробництва бактерійвмісних препатурі мінус 70°С. Заморожування проводили у хоратів при збереженні високої активності клітин лодильній камері "Jouan". бактерій. Через 18 місяців біомасу розморозили, Комп’ютерна в ерстка М. Клюкін Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601