Біологічноактивний засіб, що має імуномодулюючу властивість, спосіб його одержання, препарат на його основі та спосіб нормалізації фізіологічного стану організму людини та тварин при захворюваннях, що породжені

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к области получения биологически активных средств, обладающих имунномодулирующим действием, для использования в медицине и ветеринарии с целью нормализации физиологического состояния организма человека и животных, в часности, для восстановления функциональной активности органов и тканей. Биологически активное средство, в соответствии с настоящим изобретением, относится к веществам животного происхождения и включает в себя органические соединения. Различного рода патологические нарушения в организме человека и животных вызывают отклонения от нормы параметров физиологического состояния. В этих случаях лечебное воздействие на организм, в том числе профилактическое воздействие, заключается в стабилизации, то есть поддержании в норме, указанных параметров, либо (при отклонениях их от нормы) в таком воздействии на организм, при котором эти параметры нормализуются Нормализацию физиологического состояния организма человека и животных можно осуществлять по двум направлениям: во-первых путем непосредственного воздействия на патологию и, во-вторых, путем опосредованного воздействия на системы, органы и ткани организма, отвечающие за поддержание в норме параметров гомеостаза. Введение гормональных препаратов, медиаторов, ростовых факторов, химиотерапия и тому подобные средства обеспечивают непосредственное воздействие на клетки-мишени путем рецепции. Например, при лечении диабета вводят инсулин, восполняющий функциональный недостаток поджелудочной железы; при нарушениях функциональной активности нервной системы вводят нейромедиаторы, способствующие нормализации пороговой чувствительности нейронов и, соответственно, улучшению передачи нервных импульсов; при нарушениях функциональной активности иммунной системы организма используют иммуномедиаторы, коррелирующие иммунный ответ, и так далее. При опосредованном воздействии на организм лечение заболеваний обеспечивается за счет мобилизации внутренних ресурсов организма. Так, при протекании процессов, связанных с регенерацией органов и тканей, с их реабилитацией или восстановлением их функций, а также при воспалительных и инфекционных процессах стимулируют иммунную систему организма. Благодаря этому обеспечивают улучшение иммунологического и, как следствие, общего состояния организма. Известно биологически активное средство на основе зародышевой ткани, обладающее иммуномодулирующим свойством, восстанавливающее физиологическое состояние организма и регулирующее обмен клеток [1]. Указанное биологически активное средство (далее по тексту - БАС) выполнено на основе ингредиентов измельченной и гомогенизированной животной ткани, выделенной из зародыша, в смеси с физиологической сывороткой. Вследствие наличия в составе данного средства иммуномодулирующего фактора оно обладает сравнительно высоким иммуномодулирующим свойством, благодаря чему его использование обеспечивает нормализацию физиологического состояния организма, в том числе лечение, и повышение продуктивности животных на 5-15% по сравнению с контрольной группой Эффективность известного БАС все же недостаточна вследствие того, что наряду с иммуномодулирующими факторами оно содержит в своем составе иммунодепрессанты, которые препятствуют полному проявлению иммуномодулирующего эффекта иммуномодулирующее свойство указанного средства, по сути дела, является суммарным результатом, который обеспечивается одновременным присутствием в нем иммуностимулирующих факторов и депрессантов. Таким образом, фактически специфическая активность известного БАК, зависящая от соотношений концентраций иммуностимулирующих факторов и депрессантов, сравнительно невелика вследствие значительной концентрации депрессантов в его составе. Другим недостатком указанного БАС является повышенное содержание в его составе высокомолекулярных соединений, являющихся иммуногенами, приводящее к появлению побочных иммунных реакций (аллергия, гиперчувствительность замедленного типа и тому подобное). В значительной степени недостатки вышеописанного БАС зависят от способа его получения, в котором технологический процесс заканчивается операций измельчения и гомогенизации сырья и животной ткани, что приводит к обязательному присутствию значительного количества депрессантов и высокомолекулярных соединений в его составе. Известно также БАС, обладающее иммуномодулирующим свойством, для нормализации физиологического состояния организма, выполненное на основе продуктов гидролиза ингредиентов измельченного сырья животного происхождения, взятого предпочтительно от недоразвитых животных, способы его получения и применения для заживления травмированных участков тела [2]. В его состав входят растворимые полипептиды, аминокислоты и минеральные вещества, полученные в результате гидролиза ткани. Данное БАС обладает высокой эффективностью в отношении нормализации параметров физиологического состояния организма. Это объясняется тем, что известное БАС характеризуется высоким соотношением эффектов иммуностимуляции и иммуноингибирования, с одной стороны, в связи с более высоким содержанием в его составе иммуностимулирующих факторов за счет присутствия продуктов гидролиза, а с другой, в связи со значительным уменьшением количества высокомолекулярных соединений в ходе того ж процесса гидролиза. Однако эффективность известного БАС все же недостаточна, из-за содержания в его составе относительно большого количества балластных веществ и иммунодепрессантов. Кроме того, известное БАС также может вызывать побочные эффекты, проявляющиеся при его использовании (аллергия и другие) вследствие того, что в его составе также присутствуют высокомолекулярные соединения, которые являются иммуногенами и молекулярная масса которых превышает 10,0 кДа. Недостатком известного БАС является и то, что состав получаемого целевого продукта непостоянен и колеблется от партии к партии, вследствие чего затруднена его стандартизация. Свойства известного БАС, прежде всего его иммуномодулирующая активность прямо связаны со способом его получения, который включает гидролиз ингредиентов промытого измельченного сырья животного происхождения, центрифугирование гидролизата, фильтрацию и выделение целевого продукта, причем гидролиз проводят в растворе разбавленной слабой органической кислоты при pH 3,6-6,5 и температуре около 68°С, а в качестве сырья используют ноги недоразвитой домашней птицы не более, чем 9-недельного возраста. Целевой продукт выделяют в виде порошка или геля, который при использовании накладывают на поврежденные участки тела. Использование в качестве сырья животной ткани, содержащей в своем составе сравнительно большое количество иммунодепрессантов и невозможность улучшить состав целевого продукта с помощью выполняемых в известном способе операций, существенно снижает эффективность получаемого БАС. Следует учитывать, что содержащиеся в тканевых препаратах компоненты экстракта в значительной степени являются стимуляторами функциональной активности органов и тканей, воздействие которых в основном является однонаправленным, то есть действие БАС зависит лишь от его концентрации в организме и не зависит от физиологического статуса организма. Это требует строгого соблюдения дозировок лекарственного препарата на основе известного БАС в процессе лечения. Указанные недостатки частично устранены в известных БАС, эффект воздействия которых коррелирует с физиологическим статусом организма и в случае его нормализации действие такого БАС прекращается, то есть проявляется эффект двусторонней связи. Поэтому представляют большой интерес известные БАС на основе компонентов клеточных мембран животных тканей, которые способны реагировать на изменение параметров гомеостаза организма [3, 4, 5]. В этих препаратах, полученных в виде вакцин, использованы специфические антигены, появляющиеся на поверхности клеток при некоторых процессах патологии, а именно при процессах неоплазии, в связи с чем использование вакцин направлено на элиминацию этой патологии. Эффективность действия указанных лекарственных препаратов на основе БАС прямо зависит от количества представленных в организме антигенов, то есть от их концентрации в организме, и прекращается при элиминации неоплазии, что указывает на наличие саморегулирующей двусторонней связи. Недостатком известных лекарственных препаратов является их высокая специфичность к исходной патологии, то есть весьма узкий спектр действия, и вследствие этого они принципиально не могут иметь широкий спектр действия для восстановления (нормализации) параметров физиологического состояния организма. Другим их недостатком является то, что эти вакцины применяются только для элиминации патологии и лишь косвенным путем направлены на нормализацию физиологического состояния организма. Кроме того, недостатком является и то, что известные БАС не активируют регенераторные и восстановительные процессы. Такие БАС должны удовлетворять повышенным требования к степени чистоты (гомогенности) получаемого антигена во избежание возникновения побочных эффектов, Известные БАС получают известным способом, согласно которому животное сырье измельчают и гомогенизируют с последующим выделением из гомогената клеточных мембран животных тканей, из которых после солюбилизации получают компоненты клеточных мембран в виде гли-копротеинов [3, 4, 5]. Достоинством известного способа является то, что он позволяет получать высокоспецифические углеводсодержащие компоненты клеточных мембран, способные вызывать ответную реакцию иммунной системы организма на присутствие опухолевоспецифического антигена. К преимуществам известного способа следует отнести также и то, что он позволяет выделять углеводсодержащие компоненты клеточных мембран с помощью специфических лектинов способных связываться с определенными концевыми углеводными остатками. Однако при реализации операций известного способа клеточные мембраны подвергают солюбилизации с помощью детергентов, обычно неионной породы, например детергента Тритон Х-100, от которых трудно избавиться о последующих операциях способам которые сами по себе вызывают побочные эффекты при использовании средства в клинике. Недостатком известного способа является и то, что он сравнительно мало производителен и слишком грудоемок, а также зависит от наличия специфических раковых тканей, используемых в качестве исходного сырья. Наиболее близким к заявляемому является БАС, обладающее иммуномодулирующим свойством, для нормализации физиологического состояния организма, на основе представленных органическими соединениями компонентов клеточный мембран измельченной и гомогенизированной животной ткани [6]. По сравнению с вышеуказанными средствами-аналогами известное лекарственное средство обладает еще большей эффективностью, характеризуемой повышением на 62% киллерной активности по отношению к специфическим опухолевым клеткам а сравнении с контролем. Это объясняется тем, что БАС - аналог является маркером роста злокачественных клеток и специфически активирует киллерную активность, направленную на элиминацию таких клеток. Однако известное БАС сохраняет все перечисленные выше недостатки, характерные для аналогов, а именно: высокую специфичность к исходной патологии (неоплазии), то есть узкий спектр лечебного воздействия этого средства; наличие только киллерной активности; высокий уровень опасности возникновения побочных эффектов, связанный с тем, что известное БАС является высокомолекулярным соединением. Как и в указанных выше случаях, свойства известного БАС, прежде всего его специфическая активность, прямо связаны со способом его получения, включающим измельчение и гомогенизацию животного сырья, его последующее ультрацентрифугирование и выделение из гомогената, содержащего клеточные мембраны, осадка, из которого после ресуспендирования и солюбилизации получают компоненты клеточных мембран, которые используют в качестве целевого продукта, По сравнению с вышеуказанными способами получения БАС известный способ обладает тем преимуществом, что он позволяет получать еще более высокоспецифические углеводсодержащие компоненты клеточных мембран, способные вызвать ответную реакцию иммунной системы организма на присутствие опухолевоспецифического антигена. Кроме того, преимуществом известного способа является более высокая эффективность выделения углеводсодержащих компонентов. Однако известному способу присущи перечисленные выше недостатки, а именно: необходимость использовать детергенты, от которых впоследствии трудно избавиться и наличие которых вызывает отрицательные побочные эффекты при клиническом использовании этого средства; сравнительно низкая производительность известного способа и высокая его трудоемкость; зависимость от наличия специфических раковых тканей в качестве исходного сырья. Известен лекарственный препарат для нормализации физиологического состояния организма человека и животных на основе представленных органическими соединениями компонентов клеточных мембран [6]. Препарат вводится в организм в течение длительного времени путем ежедневных внутривенных или внутримышечных инъекций в дозе 0,001-1000 мкг, которая зависит от возраста, пола, стадии заболевания пациента. При внутривенном введении в качестве наполнителя используется физиологический раствор натрия хлористого, или буферный раствор. Основным действующим началом данного препарата является БАС в виде опухолеспецифического антигена, вызывающего иммунную реакцию организма. Для усиления такой реакции и пролонгирования эффекта выделенный антиген встраивают в липосомы. При внутримышечных инъекциях наполнителями в препарате являются различные адъюванты, состоящие в основном из масел, в которых суспендируется полученное БАС. Недостатком известного лекарственного препарата является то, что он обеспечивает высокоспецифмческую стимуляцию иммунной системы организма, которая направлена на уничтожение определенной патологии (конкретного вида неоплазии) и из-за присутствия высокомолекулярных соединений сопровождается проявлением ряда нежелательных побочных явлений, нарушающих другие параметры гомеостаза. В частности, при внутримышечном или подкожном введении возникает локальное, а при внутривенном введении генерализованное воспаление, а также аллергия, гиперчувствительность замедленного типа и другие явления. Известен препарат для нормализации физиологического состояния организма человека и животных, содержащий биологически активное средство на основе представленных органическими соединениями компонентов клеточных мембран животной ткани, и наполнитель, который накладывают на пораженные участки тела [2]. Кроме указанных недостатков, недостатком известного лекарственного препарата является то, что стимуляция иммунной системы организма возможна только путем локальной его аппликации на травмированные участки тела. Поэтому эффективность такого препарата сравнительно невелика. Указанные недостатки частично устранены в аналогичном препарате, обладающим иммуномодулирующим действием, для нормализации физиологического состояния организма животного [7], который вводится в организм путем внутримышечной иньекций в дозе 0,75-1,0 мл/кг массы тела с интервалом 3 дня и, таким образом, используется не локально. Недостатком этого лекарственного препарата является его сравнительно невысокая эффективность вследствие наличия о нем иммунодепрессантов, а также то, что его использование вызывает побочные эффекты из-за присутствия в его составе иммуногенов, вызывающих аллергию, гиперчувствительность замедленного типа и другое. Использование в качестве сырья животной ткани, содержащей сравнительно большое количество иммунодепрессантов, и невозможность улучшить состав БАС, на основе которого выполняется лекарственный препарат, с помощью выполняемых в известном способе операций, существенно снижает эффективность известного БАС и препарата на его основе. Существенным недостатком известного препарата является и то, что для обеспечения достаточной эффективности он содержит в своем составе большое количество биологически активных веществ, что обуславливает с одной стороны опасность передозировок, а с другой - увеличивает стоимость препарата. Известен способ нормализации физиологического состояния человека и животных при заболеваниях вызванных преимущественно функциональной недостаточностью органов и тканей, предусматривающий введение в организм препарата на основе органических соединений компонентов клеточных мембран животной ткани [7]. Известный способ малоэффективен вследствие наличия описанных выше недостатков препарата, в том числе из-за того, что при его использование требуется введение больших доз, содержащих до 10 мг биологически активного средства на 1 кг массы тела, что также увеличивает опасность передозировок и возникновения побочных эффектов. Указанные выше недостатки устранены в заявляемом биологически активном средстве, обладающем иммуномодулирующим свойством, в заявляемом способе получения этого средства и препарате на основе этого средства для нормализации физиологического состояния организма человека и животных, а также в способе нормализации физиологического состояния организма человека и животных при заболеваниях, вызванных преимущественно функциональной недостаточностью органов и тканей, с использованием такого препарата. Анализ известных БАС и известных способов их получения, совокупность признаков которых определяет технический уровень в данной области, позволил сформулировать задачу создания БАС с широким спектром иммуномодулирующего действия, с высокой степенью эффективности, лишенного при этом недостатков, связанных с наличием побочных эффектов, возникающих при применении известных БАС и выражающихся, например, в аллергии и так далее. Решение этой задачи, которая не могла быть решена в известных изобретениях, положено в основу заявляемой группы изобретений. Оно заключается в том, что БАС, обладающее иммуномодулирующим свойством и предназначенное для нормализации физиологического состояния организма, в том числе для восстановления функциональной активности органов и тканей, на основе представленных органическими соединениями компонентов клеточных мембран гомогенизированной животной ткани, содержит модифицированные компоненты клеточных мембран с антигенной структурой, модифицированной при процессах эмбриогенеза и/или пролиферации, и/или дифференцировки клеток, и/или патологии, предшествовавшей и/или сопутствовавшей регенерации и/или репарации ткани. Задача решается также и тем, что заявляемое БАС содержит модифицированные компоненты плазматических клеточных мембран с ангигенной структурой модифицированной при процессах эмбриогенеза и/или пролиферации и/или дифференцировки клеток, и/или патологии, предшествовавшей и/или сопутствовавшей регенерации и/или репарации ткани При этом заявляемое БАС может содержать модифицированные компоненты клеточных мембран в виде термостабильных при температуре Tн £ 120o С компонентов, а также в виде низкомолекулярных компонентов с молекулярной массой М=0,8-10,0 кДа и в виде углеводсодержащих компонентов. Заявляемое средство содержит органические соединения в следующем соотношении, мас.%: Заявляемое БАС содержит углеводы в составе органических соединений в следующем соотношении, мас. %, в составе: В заявляемом БАС соотношение массовых содержаний углеводов и пептидов в составе органических соединений с молекулярной массой Мун=0,8-10,0 кДа лежит в пределах G=0,6-2,0. Заявляемое БАС содержит также органические соединения в соотношении, мас.%: Заявляемое БАС содержит также органические соединения в соотношении, мас.%: Заявляемое БАС содержит также органические соединения в соотношении, мас.%: Заявляемое БАС содержит также органические соединения в соотношении, мас.%: Поставленная в изобретении задача решлается и тем, что в способе поулчения БАС, обладающего иммуномодулирующим свойством, при котором сырье из животной ткани измельчают и гомогенизируют, а из гомогената выделяют содержащий клеточные мембраны осадок, из которого после ресуспендирования получают компоненты клеточных мембран, в качестве сырья используют животную ткань, модифицированную при процессах эмбриогенеза и/или пролиферации, и/или дифференцировки клеток, и/или патологии, предшествовавшей и/или сопутствовавшей регенерации и/или репарации ткани, гомогенат которой очищают от неразрушенных элементов ткани путем фильтрации и/или центрифугирования при ускорении 150-250 g в течение 10-15 мин и выделяют осадок, содержащий клеточные мембраны, который подвергают гидролизу, продукты гидролиза фильтруют и/или центрифугируют при ускорении свыше 1500 g в течение 20-40 мин с выделением супернатанта продуктов гидролиза, содержащих компоненты клеточных мембран в качестве целевого продукта. В качестве сырья используют эмбриональную ткань, дифференцирующуюся ткань тимоцитов тимуса, сперматогонии и сперматоциты семенников, плацентарную ткань, эпителиальную ткань кишечника, клетки костного мозга, регенерирующую кожную ткань, ткань регенерирующей печени, ткань регенерирующих конечностей земноводных, патологически измененную ткань, взятую до стадии регенерации. При этом осадок, содержащий клеточные мембраны выделяют из очищенного гомогената центрифугированием при ускорении 1 500-90 000 g и/или фильтрацией через фильтр с характерным размером пор F0,8 кДа, в заявляемом БАС, полученном в примерах 1, 2, 3 и 5 соответственно, составляло 20,5%; 24,5%; 12,5%; и 26,4% по отношению к остальным тканевым ингредиентам. Здесь и далее по тексту значение экспериментально определенных величин выражено их средними значениями с пределами отклонений от среднего, вычисленными с учетом критерия Стьюдента. П p м м е p 8. Супернатант гидролизата, полученный о примере 1, подвергали термообработке при различных температурах нагрева (термообработки) Тн1=55°С, Тн2=60°С, Тн3=95°С, Тн4=120°С и Тн5=135°С. Нагрев вели до полной денатурации термолабильных соединений в составе продуктов гидролиза, затем центрифугировали при ускорении свыше 1 500 g в течение 30 мин с выделением супернатанта, содержащего термостабильные компоненты в качестве целевого продукта. Полученный целевой продукт в каждом случае обладал своим иммуномодулирующим эффектом, значения которого указаны в таблице 3, где представлена специфическая активность (активация макрофагов) в зависимости от выбранного диапазона температуры нагрева гидролизата и за пределами этого диапазона. Оптимальной является температура нагрева Т н=95°С, при которой получаемый целевой продукт обеспечивал максимальное, по сравнению с контролем, усиление ферментативной и фагоцитарной активности, которое соответственно составляло 102,3±5,5% и 92,1±7,4%, При Тн=55°С повышение величины специфической активности в сравнении с контролем составляет в среднем 76,8±4,6% - по НСТ- тесту и 53,8±5,1 % - по фагоцитозу. При Тн>120°С происходит скачкообразное увеличение скорости разложения пептидов и белков, вызывающее изменения в углеводных компонентах, приводящие к структурным изменениям компонентов целевого продукта, что отражается на снижении величины специфической активности средства. Так. при Тн=135°С повышение специфической активности заявляемого средства по сравнению с контролем составляет в среднем 68,4±5,0% - по НСТ-тесту и 66,2±6,1% - по фагоцитозу. Максимальная величина специфической активности БАС по сравнению с контролем обеспечивается в диапазоне температур Т н=60120°С, при котором повышение активности макрофагов перитонеального экссудата крыс (in vitro) составляет в среднем 102,3±5,5% - по усилению ферментативной активности (НСТ-тест), а по усилению фагоцитарной активности (по E.coli) - 92,1 ±7,4%. П p и м е p 9. Супернатант гидролизата, полученный в примере 1, подвергали термообработке кипячением при температуре нагрева Тн=95°С до полной денатурации термолабильных соединений и после охлаждения центрифугировали при ускорении 1 500 g в течение 40 мин. Осадок в виде денатурированных соединений удаляли, а в качестве целевого продукта использовали супернатант, который содержал термостабильные компоненты. Содержание органических соединений в продуктах гидролиза и количественные показатели эффектов БАС указаны в таблицах 1 и 2. Целевой продукт, содержащий БАС в количестве 1,0 мас.%, а остальное - наполнитель, использовали в качестве лекарственного препарата для лечения дерматозов в виде мази, которую готовили путем смешивания ланолина, вазелина и целевого продукта БАС в соотношении 1:3:1 массовых частей. Мазь втирали в кожу ежедневно. Лечебный эффект проявлялся через 2-8 дней и его контролировали по состоянию кожи. П p и м е p 10. Гидролизат, полученный в примере 1, подвергали термообработке кипячением при температуре нагрева Тн=95°С до полной денатурации термолабильных соединений и после охлаждения центрифугировали при ускорении 1 500 g в течение 40 мин. Осадок в виде денатурированных соединений удаляли, а супернатант, содержащий термостабильные компоненты, использовали в качестве целевого продукта, обладающего таким же составом и свойствами, как в примере 9. П р и м е р 11. Супернатант гидролизата, полученный в примере 3, подвергали термообработке при температуре Тн=95°С до полной денатурации термолабильных соединений и после охлаждения фильтровали через фильтровальную бумагу на нутч-фильтре. Фильтрат, содержащий термостабильные компоненты, использовали в качестве целевого продукта. Содержание органических соединений в продуктах гидролиза и количественные показатели эффектов БАС указаны в таблицах 1 и 2. Целевой продукт лиофильно высушивали и использовали сублингвально в качестве лекарственного препарата для лечения маститов у женщин. Процедуру выполняли ежедневно. Лечебный эффект проявлялся через 1-3 дня и его контролировали по состоянию груди (по наличию уплотнений, гнойных выделений) и анализу крови. П p и м е p 12. Гидролизат, полученный в примере 3, подвергали термообработке при температуре Т н=95°С, до полной денатурации термолабильных соединений и после охлаждения фильтровали через фильтровальную бумагу на нутч-фильтре. Фильтрат, содержащий термостабильные компоненты использовали в качестве целевого продукта, обладающего таким же составом и свойствами, как в примере 11. П р и м e p 13. Супернатант гидролизата, полученный в примере 5, подвергали термообработке кипячением при температуре нагрева Тн=95°С до полной денатурации термолабильных соединений и после охлаждений центрифугировали при ускорении 50 000 g в течение 20 мин. Осадок в виде денатурированных соединений удаляли, а в качестве целевого продукта использовали супернатант, который содержал термостабильные компоненты. Содержание органических соединений в продуктах гидролиза и количественные показатели эффектов БАС указаны в таблицах 1 и 2. Целевой продукт, содержащий БАС в количестве 0,5 мас.%, а остальное - наполнитель, использовали о качестве лекарственного препарата для лечения маститов коров в виде инъекций, которую осуществляли внутримышечно в дозе 0,05 мл/кг массы тела каждый третий день. Лечебный эффект проявлялся после 1-4 инъекции и его контролировали по состоянию вымени и количеству гнойных выделений из сосков. П p и м e p 14. Гидролизат, полученный в примере 5, подвергали термообработке кипячением при температуре нагрева Тн=95°С до полной денатурации термолабильных соединений и после охлаждения центрифугировали при ускорении 50 000 g в течение 20 мин. Осадок в виде денатурированных соединений удаляли, а в качестве целевого продукта использовали супернатант, который содержал термостабильные компоненты, обладающие таким же составом и свойствами как в примере 13. П p и м e p 15. Супернатант гидролизата, полученный в примере 1, подвергали фракционированию на ультрафильтрационной установке "Amicon" с использованием ультрафильтров, пропускающих соединения с молекулярной массой, меньшей или равной: 50,0 кДа; 10,0 кДа; 5,0 кДа; 1,0 кДа; 0,6 кДа и 0,5 кДа. Биологическую активность полученных фракций, содержащих соединения с молекулярной массой: 1) M1>50,0 кДа; 2) 10,0 кДа