Засіб визначення сенсибілізації організму бактеріальними алергенами

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК (5D4 G О' N 33/53 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ ССОР И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ! (21) 4357184/28-14 (22) 04.01.88 (46) 30.12.89. Бюл. № 48 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) Н.И.Якуба (53) 615.2(088.8) * ч (56) Педиатрия, 1983, № 2, с. 12-16. I (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ОРГАНИЗМА БАКТЕРИАЛЬНЫМИ АДЛЕР- ' ГЕНАМИ (57) Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике бактериальной сенсибилизации при острых и хронических забо леваниях. Цель изобретения - повышение точности способа. Сенсибилизируют частицы латекса антигеном. У больного берут кровь, выделяют лейкоциты. Затем к ним добавляют латекс, сенсибилизированный антигеном или несенсибилизнрованный, и в обе пробы вносят люминол. Пробы инкубируют и проводят замер уровня хемилюминесценции. При повышении уровня свечения в опытной пробе в сравнении с контролем там, где вносят несенсибилизированный латекс , диагностируют сенсибилизацию организма к исследуемому антигену. В сравнении с прототипом точность увеличивается на 80%. (Л С Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике бактериальной сенсибилизации при острых и хронических заболеваниях. Целью изобретения является повышение точности способа. Способ осуществляют следующим образом. Сенсибилизацию латекса бактериальными антигенами производят накануне проведения последования. Для этого к 1 мл взвеси частиц латекса в дистиллированной воде в концентрации 10 добавляют 1 мл исследуемого бактериального антигена (бактериальные антигены получены из Казанского института эпидемиологии и микробиологии). Смесь латекса и бактериальных аллергенов инкубируют в морозильном отде лении холодильника в течение 18 м. Затем смесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость снимают, а к осадку добавляют физиологический раствор до I мл, (концентрация частиц латекса, нагруженных бактериальным антигеном, должна также составлять 10 ). Для исследования хемилюминесценции сенсибилизированных лейкоцитов у больного из пальца берут кровь в гепаринизированные капилляры, вмещающие 0,1 мл крови (число капилляров зависит от количества исследуемых бактериальных антигенов из расчета 1 капилляр крови на 3 пробы). Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин. При этом на границе плазма-эритроциты образуется слой лейковтвеси, который - — і да . jo 1532875 осторожно отрезают. Лейковзвесь растворяют в среде Хенкса без фенолового красного из расчета і капилляр крови на 1,5 мл среды. Смесь лейковзвеси и раствора Хенкса разливают по 0,5 мл во флаконы для измерения хемилюминесценции, добавляют в контрольную пробу 0,1 мл суспензии латекса без антигена, в опытные пробы - 0,1 мл латекса, нагруженного бактериальными антигенами. В пробы добавляют также 0,1 мл 2,8 мМ раствора люминола, инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят замер хемилюминесценции в режиме счета фотонов о Сопоставляют показатели хемилюминесценции в опытных и контрольной пробе и при повышении свечения в опытной 20 пробе диагностируют наличие специфической сенсибилизации к бактериальному антигену, находящемуся в данной пробе. П р и м е р 1. Больной В., 14лет,25 поступил в детское отделение ДБ № 1 г. Киева с диагнозом бронхиальная астма, инфекционно-аллергическая форма, средне-тяжелое течение, фаза обостроения. 30 Из анамнеза известно, что до 7 лет часто болел ОРЗ (6 и более раз в год) В 10 лет перенес тяжелую форму гриппа, осложнившегося бронхопневмонией, вслед за которой появились приступы 35 удушья. До 12 лет приступы повторялись относительно редко. В дальнейшем приступы удушья возобновлялись при острых респираторных заболеваниях . 40 При поступлении состояние больного средней тяжести: одышка смешанного характера, частота дыхания 28 в минуту, бледность кожных покровов. При фи -шкальном исследовании - коробочный 45 оттенок звука, дыхание ослаблено, большое количество свистящих хрипов на выходе. Границы сердца в норме, тоны приглушены, частота сердечных сокращении 84 в минуту. На рентгенограмме - усиление и деформация брон- 50 хососудистого рисунка с признаками пневмосклероза, сердце правильной конфигурации. Общий анализ крови и мочи без патологии. , Определение кожной чувствительности к бактериальным аллергенам не проводилось в связи с выраженным обострением заболевания, ~ ~ Обследование ребенка проводят согласно предлагаемому способу. Для этого у больного из пальца в первый же день заболевания, одновременно со взятием общего анализа крови, проводят забор крови в гепаринизировэнные капилляры (для исследования взято 2 капилляра крови на 6 проб). Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при I500 об/мин, слой лейковзвеси, образованный на границе плазма - эритроцит, осторожно отрезают и растворяют в 3,0 мл среды Хенкса. Смесь лейковзвеси и раствора Хенкса разливают до 0,5 мл во флаконы для измерения хемилюминесценции и добавляют в 1-й флакон (контрольный) 0,1 мл латекса без антигена, другие флаконы - по 0,1 мл раствора латекса, предварительно нагруженного (как описано) следующими бактериальными антигенами: во 2-й флакон - золотистым стафилококком, в 3-й флакон - гемолитическим стрептококком, в 4-й - нейссерией катарралис, в 5-й - протеем, в 6-й - синегнойной папочкой. После внесения латекса во все пробы добавляют 0,1 мл 2,8 мМ раствора люминола, пробы инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят замер хемилюминесценции в режиме счета фотонов с помощью ФЭУ-39а. Получены следующие результаты исследования: хемилюминесценция пробы № 1 (контрольной) 35400 имп/с, пробы № 2 58723 имп/с, № 3 32844 имп/с, № 4 34200 имп/с, № 5 37552 имп/с, № 6 32675 имп/с. Следовательно, хемилюминесцентное свечение лейковзвеси в пробе № 2 (содержащей латекс, нагруженный антигеном золотистого стафилоккока ) выше, чем в пробе, содержащей латекс без антигенов, в то время как внесение в пробы латекса, нагруженного другими бактериальными антигенами, существенно не изменяло значений хемилюминесцентного свечения. На основании полученных данных диагностировано наличие сенсибилизации к золотистому стафилококку. На основании установленного диагноза ь схему лечения больного включены антибиотики, обладающие противостафилоко*ковым действием, в плане реабилитационных мероприятий учтена необходимость специфической иммуниза 6 532875 ции в отношении золотистого стафилоПолученные результаты использовакокка. ны для оптимизации лечения и сокращению сроков пребывания в стационаре. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я С помощью предлагаемого способа Способ определения сенсибилизации проведено обследование 158 больных с организма бактериальными аллергенами, инфекционно-воспалительными и инфеквключающий забор крови, выделение циокно-аллергическими заболеваниями лейкоцитов, инкубацию их с аллергеорганов дыхания, мочевыделительной системы, желудочно-кишечного тракта 10 ном, адсорбированным на носителе, и определение сенсибилизации осуществ(холециститы» колиты, дисбактериоэ ляют по увеличению показателей реаккишечника), ЛОР-органов (гаймориты, ции по сравнению с контролем без алсинуситы, тонзиллиты), связанных с лергена, о т л и ч а ю щ и й с я бактериальной сенсибилизацией. Точность диагностики у обследованной 15 тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве носителя аллергруппы больных составила 96,8% гена используют латекс и после инку(153 больных), в то же время по пробации с ним лейкоцитов определяют хетотипу было выявлен правильный диагмилюминесценцию. ноз только у 26 больных. Редактор О,Спесивых Составитель Б.Литовченко Техред Л.Олийнык Корректор Т.Малец Заказ 8094/51 Тираж 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская н а б . , д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101