Штам бактерій erysipelothrix rhusiopathiae м2- вк для виготовлення інактивованої вакцини проти бешихи свиней

Штам бактерій Erysipelothnx rhusiopathiae М2ВК, задепонований в Депозитарії Державного науково-контрольного інституту бютехнолопі і штамів мікроорганізмів за номером 283 для виготовлення шактивованої вакцини проти бешихи свиней Корисна модель відноситься до ветеринарної мікробіологи, зокрема до бютехнолопі і може бути використана для виготовлення вакцин проти бешихи свиней, яка досить поширена на тваринницьких фермах і завдає значних економічних збитків Основним ефективним методом боротьби з цією хворобою є вакцинація тварин Штами збудника бешихи, що пропонуються для виробництва вакцин повинні мати стабільні морфологічні, культурально-бюхімічні властивості, та бути високо імуногенними Аналогами корисної моделі є виробничі штами Erysipelothnx rhusiopathiae 419, 1933, 251, М-2, на основі яких виготовляють інактивовану пдрокисалюмінієву формолвакцину проти бешихи свиней "Бешиформ" [Панин А Н , Душук Р В , Тихонов Л И Рожа свиней Итоги работы и задачи исследований // Сб научн трудов ВГНКИ ветпрепаратов М , 2001 - вып 62 , - с 230-231] Вказані штами мають середні ростові властивості, що потребує додаткового концентрування при виготовленні вакцини Найближчим аналогом корисної моделі є виробничий штам Erysipelothnx rhusiopathiae ВГНКИ 6/24, який використовується для виробництва живої вакцини проти бешихи свиней [RU С 1769791, 10 01 1996] Вказаний штам має суттєві недоліки недостатню імуногенну активність, внаслідок чого імунітет виробляється повільно та тримається відносно короткий час, штам має середні ростові властивості, що потребує додаткового концентрування при виготовленні вакцини В основу корисної моделі, що представлена, поставлено задачу створити вакцинний штам Erysipelothnx rhusiopathiae M2-BK, що має високу імуногенну активність, володіє стабільними морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями, високою потенцією росту, яка сприяє отриманню великої КІЛЬКОСТІ біомаси для виготовлення вакцини, що визначає рентабельне її виробництво Штам Erysipelothnx rhusiopathiae M2-BK отриманий як природній мутант та відклонований в лабораторії бютехнолопі бактерійних препаратів Інституту ветеринарної медицини УААН Штам Erysipelothrix rhusiopathiae M2-BK задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту бютехнолопі і штамів мікроорганізмів 8 квітня 2005 року і має реєстраційний номер 283 Морфологічні властивості Бактерії бешихи штаму М2-ВК в мікроскопічних препаратах із добової бульйонної культури, пофарбованих за Грамом, являють собою тонкі прямі або дещо зігнуті палички розташовані поодиноко, попарно або в вигляді коротких ланцюжків, спор та капсул не утворюють, в препаратах "Роздавлена крапля" - нерухомі Культуральні властивості Добре ростуть в МПБ Хотпнгера при рН 7,47,7 і температурі 36,5-37,2°С, утворюючи через 24 години інтенсивне помутніння у вигляді "муарових хвиль", а при стоянні - утворюється осад, який при струшуванні піднімається у вигляді косички На МПА Хотпнгера утворюють через 48 годин дрібні росинчасті прозорі колони, які через 72-96 годин збільшуються, набувають слабко-блакитного кольору В звичайних МПБ, МППБ, рідкому середовищі Сабуро та на МПА ріст скудний СО со 00 О) 10833 голів підшкірно та 10 голів внутрішньом'язово в об'ємі 0,2см3 з вмістом в імунізуючій дозі 1млрд убитих мікробних клітин Щеплення проводили ДВІЧІ з інтервалом 14 днів На 14 добу після другого щеплення проводили зараження мишей культурою патогенного заражаючого штаму 149 в дозі lOOLDso (100 тисяч мікробних клітин) В якості контролю виступали неімунізовані білі миші в КІЛЬКОСТІ 10 голів Встановлено, що захист мишей від зараження Таблиця 1 при застосуванні вакцини із штаму Erysipelothrix rhusiopathiae M2-BK склав 90% при загибелі всіх БІОХІМІЧНІ властивості вакцинного штаму контрольних мишей з ознаками, характерними для Erysipelothnx rhusiopathiae M2-BK бешихи Приклад 2 + Глюкоза Для досліду підібрано п'ять дослідних груп Мальтоза мишей живою масою 16-18 грамів, яких дворазово + Лактоза з інтервалом 14 днів вакцинували підшкірно інакГалактоза тивованими емульсин-вакцинами в дозі 0,2см3 з Сахароза вмістом 1000млн мікробних клітин бешихи до інакМаніт тивування Дульцит Через 25 днів після другої вакцинації дослідУтворення сірководню них та контрольних мишей заразили бактеріями Утворення індолу бешихи контрольного патогенного штаму 149 під Ферментативні властивості В диференціально-діагностичних середовищах желатин не розріджують, індол не утворюють, не утворюють сірководень, ферментують глюкозу без утворення газу, лактозу без утворення газу, маніт та сахарозу не ферментують, проба на каталазу - негативна Результати наведені в табл 1, 2 Патогенні властивості Слабопатогенний для мишей та свиней Антигенні (серологічні) властивості штаму Має загальновидові антигенні властивості, дає реакцію аглютинації з аглютининами видоспецифічної імунної сироватки крові свиней, кролів в пробі росту та в РА Генетичні особливості штаму Резистентний до тетрацикліну, сульфаніламідних препаратів Має інсерційну мутацію в гені основного протективного білка Spa А (67-69кДа) Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму Бактерії бешихи штаму М2-ВК інтенсивно ростуть в МПБ Хоттінгера наступного складу, % пептону - 0,5, натрію хлориду - 0,3, калію фосфорнокислого однозаміщеного 0,3, натрію фосфорнокислого двозаміщеного - 2, твіну 80 0,05, сироватки крові ВРХ, коней, овець - 8-10, печінкового бульйону - 5, глюкози - 0,4, амінного азоту - 180-200іиг % при рН 7,4-7,7 і температурі 36,5-37°С Максимальне накопичення біомаси протягом 18-24 годин Для вирощування на МПА Хоттінгера до МПБХ зазначеного складу додають агар-агар в КІЛЬКОСТІ 1,8-2,0% (в залежності від його якості) Імуногенні властивості Дворазове парентеральне щеплення білих мишей шактивованою вакциною, виготовленою із даного штаму в об'ємі 0,2см3 з вмістом в імунізуючій дозі 1млрд убитих мікробних клітин захищає від зараження та загибелі при підшкірному введенні патогенного для мишей заражаючого штаму 149 в дозі 1OOLD5o в 85-90% випадків при 80-100% загибелі невакцинованих контрольних мишей Корисна модель ілюструється наступними прикладами Приклад 1 Білих мишей масою 16-18г імунізували інактивованою вакциною, виготовленою із штаму Erysipelothnx rhusiopathiae M2-BK в КІЛЬКОСТІ 10 шкірно в дозі 0,2см3 з вмістом 100LD5o (100 тисяч бактерій бешихи) Результати досліду викладені в таблиці 2 Таблиця 2 Визначення нешкідливості та імуногенності інактивованих вакцин проти бешихи свиней із штамів 93, 419,1933 та М2-ВК Інактиво№ вані вак- Доза № цини ЗІ вакцини груп штамів 1 2 3 4 5 93 419 0,2см1* 0,2см1* 0,2CM 1933 М-2ВК 0,2CM Контрольна гру- 0,2см3 па J J 10 10 10 10 Захист Загинумишей від ло мизараженшей ня ГОго% % лів ЛІВ 0 10 100 0 7 70 3 ЗО 4 40 60 6 1 10 90 9 10 10 КІЛЬКІСТЬ ГОЛІВ 100 Загибелі мишей до зараження не було Після зараження залишилося живими мишей, щеплених вакциною із штаму 93-0 голів, 419-3 голови (30%), 1933 - 6 голів (60%), М2-ВК - 9 голів (90%), тоді як заражені невакциновані контрольні миші загинули всі протягом 3-5 днів після зараження Вакцина із штаму М2-ВК показала найбільший протективний ефект Захист мишей, щеплених даною вакциною, від зараження патогенними бактеріями бешихи контрольного штаму 149 в дозі 1OOLD5o (100 тисяч мікробних клітин) складав 90% Приклад З Для визначення реактогенності та нешкідливості вакцини, виготовленої із штаму Erysipelothrix rhusiopathiae M2-BK проведено дослід на свинях віком 3 МІСЯЦІ, вакцинованих експериментальним зразком інактивованої емульсин-вакцини проти 5 10833 6 бешихи свиней із штаму М2-ВК внутрішньом'язово ровими, активними, добре поїдали корми. В місці 3 в дозі 2см дворазово з інтервалом 14 днів (загавведення вакцини спостерігали незначне запаленльна кількість введених бактерій - 8млрд мікроня, яке зникало протягом 3-4 днів. Температура бних клітин). Щеплені тварини протягом 10 днів була в межах фізіологічної' норми. Протягом всьопісля кожного введення препарату піддавалися го періоду спостереження тварини були клінічно клінічному обстеженню та вибірковій термометрії. здорові, післявакцинальних ускладнень не реєстПри цьому піддослідні тварини були клінічно здорувалося. Комп'ютерна верстка А. Рябко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул.Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ-42, 01601