Засіб диференційної діагностики гемобластозів

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ҐЕМОБЛАСТ03ОВ путем исследования клеток крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, ч т о , с целью повышения точности способа, проводят реакцию розеткообразованкя лейкоцитов пациентов с тучными клетками в соотношении (50-100) :1 с о о т в е т с т в е н н о , полученную смесь центрифугируют, осадок ресуспендируют, подсчитывают образовавшиеся р о з е т ки и при величине розеткообразования 5,0-6,2% диагностируют лимфогранулематоз, а при величине этбго показателя 1 6 , 7 - 3 1 , 5 1 диагностируют лейкоз. р. 1 1068100 Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике гемобластозов. Известен способ диагностики гемобластозов, основанный на цитоморфологическом исследовании, позволяющем проводить количественную дифференцировку отдельных элементов гемограммы , миелограммы и констатировать степень зрелости клеток крови С П . Недостатком способа является его 10 невысокая точность. Известен также способ дифференциальной диагностики гемобластоэов путем исследования клеток крови С2"I. Однако известный способ также 15 не обладает высокой точностью. Целью изобретения является повышение точности способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифферен- 20 циальной диагностики гемобластозов путем исследования клеток в крови, проводят реакцию роэеткообразования лейкоцитов пациентов с тучными клетками в со тношении (50-100):1 25 соответственно, полученную смесь центрифугируют, осадок ресуспендируют, подсчитывают образовавшиеся розетки и при величине розеткообразования 5,0-6,2% диагностируют 30 ,лимфогранулематоз, а при величине этого показателя 16,7-31,5% диагностируют лейкоз. Способ осуществляют следующим образом. 35 Из гепаризированной крови пациента в градиенте фиколла и верографнна выделяют лимфоциты известным способом. Тучные клетки получают путем 40 промывания брюшной полости крыс 10 мл раствора гемоцелл с последующей очисткой суспензии клеток в градиенте фиколла и верографина. Пробы, содержащие смесь лейкоцитов и тучных клеток в соотношении (50-100) :1 соответственно, центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин. Образовавшийся осадок клеток ресуспендируют пастеровской пипеткой и в виде капли переносят на предметное стекло, покрытое тонким слоем 0,1% нейтрального красного. Тучные клетки окрашивают при трехкратном пипетировании капли. Суспензию вносят в гемоцитометр и подсчитывают количество розеток на 200 тучных клеток. Розеткой считают клеточную ассоциацию, включающую тучную клетку с присоединенными к ней тремя и более лейкоцитами. И при величине роэеткообразования 5,0-6,2% диагностируют лимфогранулематоз, а при величине этого показателя 16,7-31,5% диагностируют лейкоз. 45 50 55 60 65 П р и м е р 1. У больного А берут кровь на исследование. В центрифужную пробирку наливают 2 мл смеси фиколла и верографина (плотность 1,077 ) и наслаивают на нее 2 мл гепаризированной крови больного. Полученную смесь центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин. По окончании центрифугирования в интерфаэе на границе плазмы крови и смеси фиколла с ферографином наблюдают образование белого кольца, содержащего преимущественно лимфоциты. Клетки кольца отбирают пастеровской пипеткой и переносят в пробирку, где дважды отмывают раствором гемоцелл, ресуспендируют в этом растворе, подсчитывают з гемоцитометре и разводят до концентрации 10*/мл. Тучные клетки получают следующим образом. Под гексеналовым внутримышечным наркозом крысам-весом 150-200 г внутрибрюшинно вводят 10 мл подогретого до 37°С раствора/гемоцелл. В течение 2 мин делают массаж брюшной стенки, затем делают ее срединный разрез и кишечник крысы перекладывают в Стеклянную воронку, помещенную в центрифужную пробирку. Введенный в брюшную полость раствор гемоцелл, содержащий вымытые клетки перионеальной полости, собирают в пробирку, затем 5 мл этой взвеси клеток наслаивают в центрифужной пробирке на 2 мл смеси фиколла и центрифугируют 15 мин при 250 об/мин. По окончании центрифугирования в гетерофазе собираются лимфоциты,а тучные клетки оседают на дно пробирки. Содержимое пробирки до самого ее дна отбрасывают, а тучные клетки, лежащие на дне пробирки,ресуспендируют в растворе гемоцелл и 2 раза им же отмывают. Затем взвесь клеток в виде капли переносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, покрытого тонким слоем высохшего 0,1% нейтрального красного. I Каплю 3 раза пипетируют пастеровской пипеткой. При этом нейтральный красный окрашивает тучные клетки,а лимфоциты, содержащиеся в виде небольшой примеси, остаются бесцветными. Затем эту взвесь переносят в гемоцитометр, подсчитывают количество ^тучных клеток и разводят до концентрации 105/мл. В пробирку помещают 1 мл взвеси лейкоцитов больного лимфогранулематозом и 1 мл взвеси тучных клеток, содержимое перемешивают и центрифугируют 5 мин при 250 об/мин. 1068100 чину розеткообразования равную Образовавшийся осадок клеток ре30,0%, что соответствует диагнозу суспендируют пастеровской пипеткой лейкоза. и в виде капли переносят на покровное стекло, покрытое тонким слоем 0,1% нейтрального красного. Вносят П р и м е р 3. Пробу, содержасуспензию в гемоцитометр и подсчиты- 5 щую смесь лимфоцитов больного лейкозом и тучных клеток в соотношевают количество образовавшихся ронии 100:1 соответственно, центризеток на 200 тучных клеток. При этом фугируют 5 мин. при 250 об/мин., наблюдают величину розеткообразоваосадок ресуспендируют и подсчитыния равную 6,0%, что соответствует 10 вают количество образовавшихся родиагнозу лимфогранулематоз. зеток на 200 тучных клеток. При П р и м е р 2 . У больного Б беэтом величина розеткообразования рут кровь на исследование. В пробирсоставила 16,7%, что соответствует ку помещают взвеси лейкоцитов больдиагнозу лейкоза. ного лейкозом и взвесь тучных клеИспользование предлагаемого споток, полученные способом описанным г 15 соба дифференциальной диагностики в примере 1, в соотношении 50:1 согемобластозов позволит повысить ответственно. точность диагностики, способствоПробы центрифугируют 5 мин. при вать развитию представлений о при250 об/мин., осадок ресуспендируют е и подсчитывают количество образо20 Р°Д этих патогенетических процесвавшихся розеток на 200 тучных кле,сов, что дозволит! повысить эффекток. В данном случае наблюдают велитивность лечения 'больных. Редактор А. Черных Составитель Н. Хрусталева Техред Л, Пилипенко Корректор й * Зимокосов , Заказ 11351/3 Тираж 691 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 г *