Спосіб діагностики мікробної алергії

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИКРОБНОЙ АЛЛЕРГИИ, включающий добавление к суспензии сенсибилизированных макрофагов микробного аллергена в рабочем разведении и инкубацию с последующим учетом результатов, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа после инкубации исследуемую пробу помещают в эталонный радиолюминесцентный индикатор и учет результатов осуществляют путем измерения интенсивности хемилюминесценции, продолжительности и количества пиков свечения , суспензии макрофагов до и после контакта с аллергеном и при увеличении одного из параметров измерения в два и более раз диагностируют микробную аллергию. (Л і 1210836 Изобретение относится к медицине, а именно к применению в иммунологии, и может быть использовано для диагностики микробной аллергии. Целью изобретения является повышение точности способа. Способ поясняется следующим образом. 10 Прямой тест, йнтактные морские свинки подвергаются сенсибилизации четырехкратным введением аллергена на протяжении 10-14 сут. Трижды ал15 лерген вводят подкожно в объеме 0,5 мл и однократно - в подушечки задних лап свинки в объеме 0,1 мл. Через 30 сут после начала сенсибилизации получают перитонеальный экссу20 дат , содержащий 3-4•10 микрофагов в мл. К 1,25 мл перитонеального экссудата (суспензии макрофагов) приливают 0,5 мл аллергена. Регистрируют свечение кюветы, затем суспензии макрофагов и кинетику свечения после 25 приливання аллергена. Параллельно ставят пробы с различными аллергенами - специфическими (к которым свинка была предварительно сенсиби*лизирована) , близкими к нему и дале- 30 кими по своей природе микробными аллергенами. Непрямой тест. К 1,25 мл перитонеального экссудата свинок добавляют 1,0 мл сыворотки крови исследуемого больного и 0,25 мл аллергена. После довательно регистрируют интенсивность хемилюминесценции кюветы, экссудата, затем его смеси с сывороткой крови и кинетику СХЛ этой смеси после добавления аллергена. Пробы также ставят параллельно с несколькими аллергенами с целью выявления состояния сенсибилизации к одному из них. 35 40 45 с помощью эталонного радиолюминесцентного индикатора ЗЯ-1 и световодом с ослабляющим светофильтром. Биопробу в объеме 1,5-2,5 мл помещают в кювету из нелюминесцирующего стекла с дном из оптического кварца, которую располагают непосредственно над фотокатодом ФЭУ. Кювету термостатируют при 38°С. После эталонных измерений определяют величину свечения кюветы (фон) и кюветы с биопробой (сигнал+фон) . Пробу перитонеального экссудата помещают в кювету и через 2-3 мин необходимые для достижения биопробой расчетной температуры 38 С, регистрируют величину ее свечения в импульсах за 10 с (для чего вычисляютсреднее из 10 последовательных 10-секундных измерений). Затем непосредственно в кювету вносят аллерген и в течение 40-60 мин регистрируют кинетику СХЛ. Наиболее часто производят измерения с интервалом по 5 мин. Исследования были проведены на 62 морских свинках (в том числе на 20 неиммунизированных), а также на 26 больных с дерматоаллергозами (главным образом с микробной экземой ) и на 5 здоровых донорах. Установлено, что реакция сенсибилизированных морских свинок на неспецифический аплерген по показателю кинетики СХЛ суспензии перитонеальных макрофагов практически не отличается ни по высоте, ни по продолжительности, ни по количеству пиков от реакции несенсибилизированных свинок на различные аллергены. Максимальная высота пика, измеряемая количеством импульсов свечения за 10 с, колеблется для разных аллергенов от 42+16 до 121+24 и лишь протейный аллерген вызывает у интактных свинок существенно более сильную реакцию (258+21 имп.) , однако это следует отнести за счет свойств и концентрации самого аплєрієна. У сенсибилизированных свинок реакция на неспецифический аллерген колеблется по существу в тех же пределах: от 14+9 до 120+18 имп. за 10 с. Измерения СХЛ биологических проб производят на оригинальной установке, собранной из стандартных блоков оте- 50 чественного производства. В качестве детекторов светового излучения используют ФЭУ-39а и ФЭУ-130. РегистПродолжительность этой реакции рацию сигналов ФЭУ производят прибопорядка 5 мин и во все*х случаях ром "Пульт-А" с выводом получаемой 55 наблюдают только один пик свечения. информации на световое табло, цифроЭту реакцию мы рассматривали в лечать и на перфоленту. Предваридальнейшем как нулевую, т.е. характетельную калибровку прибора производят ризующую отсутствие сенсибилизации З 1210836 * макрофагов к данному конкретному ' кратный характер, на кривой свечеаллергену,ния регистрируется два-три пика. При контакте сенсибилизированных ' Причем все эти три показателя (высомакросЬагов со специфическим аллерта, продолжительность и кратность геном реакция носит принципиально реакции] количественно характеризу5 иной характер. Во-первых, высота пиют выраженность реакции, степень сенка превышает "нулевую" реакцию в сибилизации организма в каждом конк2-3 раза. Во-вторых, продолжительретном случае. ность реакции достигает 30-40 мин, Таким образом, предлагаемое теха в отдельных случаях и более. Наю ническое решение позволяет повысить конец, в-третьих, и это особенно точность диагностики микробной аллерхарактерно, реакция носит многогии в 2 раза (91,0% против 41 Редактор М. Келемеш Составитель Т. Козлова Техред О.Ващишина Корректор А. Тяско Заказ 57 1/8 Тираж 659 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 і V