Атенуйований штам вірусу хвороби марека першого серотипу 4/11 як складовий компонент полівалентної культуральної вакцини проти хвороби марека

Реферат: Атенуйований штам вірусу хвороби Марека першого серотипу 4/11 як складовий компонент полівалентної культуральної вакцини проти хвороби Марека, виділений з патологічного матеріалу (крові та очинів пір'я) від курей 160-денного віку для виготовлення полівалентної культуральної вакцини проти хвороби Марека. UA 116658 U (12) UA 116658 U UA 116658 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до ветеринарної вірусології і біотехнології та може бути використана при виробництві вакцин проти хвороби Марека (ХМ). Для профілактики хвороби Марека на території України використовують вакцини моно- (на основі штаму FC-126 вірусу герпесу індичок 3 серотипу) та бівалентні (до складу яких входять штами вірусу хвороби Марека 2 і 3 серотипів). Проте вони не в змозі достатньою мірою попередити розвиток захворювання. Важливо виготовлення вакцин проти ХМ з актуальних місцевих штамів, що забезпечити найбільший захист від хвороби. В основу корисної моделі поставлена задача одержати новий атенуйований ареверсибельний вакцинний штам вірусу хвороби Марека 1-го серотипу «4/11» шляхом проведення швидких та переміжних пасажів в первинній та перещеплюваній культурах клітин фібробластів ембріонів курей (ФЕК), щоб збільшити імуногенну активність при використанні його як третього компонента при виготовленні полівалентної культуральної вакцини проти хвороби Марека. Штам 4/11, виділений з патологічного матеріалу (крові та очинів пір'я) від курей 160-денного віку, які належать приватному власнику с. Чорноморка Овідіопільського району Одеської обл., та зберігається в колекції штамів мікроорганізмів лабораторії біотехнології ННЦ "ІЕКВМ" за № 8. Родина Herpesviridae, підродина Herpesvirinae, рід Herpesvirus. Штам адаптований до клітин фібробластів ембріонів курей (ФЕК) і атенуйований шляхом клонування методом швидких та переміжних пасажів в первинній та перещеплюваній культурах клітин. Був перевірений на реверсію вірулентності є ареверсибельним і вільним від контамінантів, зокрема, сторонніх вірусів, бактерій, мікоплазм та грибів. Штам 4/11 вірусу хвороби Марека 1-го серотипу це ДНК-вмісний вірус, який характеризується наступними ознаками та властивостями. Культурально-морфологічні При електронно-мікроскопічному дослідженні штаму 4/11 було виявлено віріони округлої форми, які складаються з нуклеїду, капсиду діаметром 120-150 нм, та зовнішньою ліпопротеїдною оболонкою. Вірус активно розмножується в первинно-трипсинізованій культурі фібробластів 11-12-добової інкубації SPF-ембріонів курей за температури +38-40 °C з утворенням характерних фокусів, які складаються з округлих клітин, їх поява настає на 48-120 годину після інфікування клітин. Інфекційний титр вірусу після 10 та 25 пасажів становить 4 4 3 910 -9,2510 ФУО/см . Генетичні ознаки вірусу Вірус стійкий до пеніциліну, цефалоспорину, поліміксину, ністатину, амфотерицину "Б". Резистентність до фагів не вивчалася. Генетично споріднений з герпесвірусами курей 2 серотипу (ВГК) та 3 серотипу індиків (ВГІ). Антигенні ознаки Вірус характеризується виразною антигенною активністю. У процесі культивування в культурі ФЕК не втрачає антигенних властивостей без ліміту пасажів, а імуногенні властивості повинні відновлюватись шляхом проведення серії пасажів на курчатах через кожні 5-6 пасажів у культурі клітин. Біотехнологічні ознаки Для розмноження необхідно використовувати культури первинно-трипсинізованих фібробластів SPF-ембріонів курей 11-12-добової інкубації, щоб запобігти нейтралізації вірусу материнськими антитілами, або контамінації вірусами, бактеріями, мікоплазмами та грибами. Вірус культивують у суміші поживних середовищ DMEM і 199 (1:1) з додаванням 2 % сироватки крові ВРХ при 37 °C; рН 7,2-7,4. Як кріозахисне середовище використовують середовище яке складається з 70 % суміші поживних середовищ (Ігла-ДМЕМ і 199), 20 % інактивованої сироватки крові ВРХ, 10 % димексиду. Для довгострокового зберігання вірусу використовують метод заморожування у рідкому азоті при температурі - 196 °C, термін зберігання в замороженому стані не менше п'яти років. Вірус не шкідливий в десятикратній імунізуючій дозі для однодобових курчат. Стійкість до зовнішніх чинників та хімічних речовин В межах рН 4,0-10,0 чутливий до дії ефіру і хлороформу, в лусках шкіри та в сухому пір'ї при температурі 28,5-41,5 °C активний впродовж 50 діб. Витримує неодноразове заморожування і відтавання та дію ультразвуком протягом 10 хвилин. Повна термоінактивація настає при 4 °C через 2 тижні, при 20-25 °C - через 4 доби, при 37 °C - через 18 годин, і при 60 °C - за 10 хв. Сфера використання Може бути використаний як виробничий штам для виготовлення полівалентної культуральної вакцини проти хвороби Марека. 60 1 UA 116658 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Атенуйований штам вірусу хвороби Марека першого серотипу 4/11 як складовий компонент полівалентної культуральної вакцини проти хвороби Марека, виділений з патологічного матеріалу (крові та очинів пір'я) від курей 160-денного віку для виготовлення полівалентної культуральної вакцини проти хвороби Марека. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2