Спосіб визначення вітаміну д2 та д3

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК 09). SU«,.J 254379 А1 (5U 4 G 01 N 3 0 / 0 0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3810052/28-14 (22) 06.11.84 (46) 30.08.86. Бюл. № 32 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) П.Ф. Сурай, И.А. Ионов и М.С. Жедек (53) 612.015.6(088.8) (56) Раствор эргокальциферола в масле, 500 ME, в капсулах ВФС 42-212-73. Богуславский Н*А. и др. Определе ние витаминов Д, и Д 5 в белковом парате видеин с помощью тонкослойной хроматографии. - Хим.-фарм. журнал, 1974, т. 8, № 5, с. 56-58. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ (57) Изобретение относится к химическим методам определения витаминов группы Д. Цель изобретения - сокращение времени анализа и повышение чувствительности способа. Образец растворяют в хлороформе. Полученный. раствор наносят на пластинку с закрепленным слоем сорбента. Кроматографическое разделение витамина Д э осуществляют в системе гексан эфир - н-бутанол (49:49:2). Затем опрыскивают пластинку 0,2%-ным раствором хлорида железа в этаноле. Пластинку высушивают и помещают в камеру, насыщенную парами Йода. Пластинку извлекают из камеры, прогревают до полного удаления следов йода. После этого пластинку опрыскивают 0,5Х-ным раствором 2,2 -дипиридила в этаноле. Производят элюирование целевого продукта. Полученный элюат фотометрируют. С СО 1254379 I I хлорида железа (III) п этаноле. ПласИзобретение относится к химичестинку высушивают при комнатной темким методам определения витаминов пературе и помещают на 10 с в камеру, группы Д с применением хроматографинасыщенную парами йода. После этого ческнх методов очистки, в частности, 5 пластинку извлекают из камеры, протонкослойной хроматографии и может гревают в токе теплового воздуха до Оыть использовано при определении , полного удаления из пластинки следов содержания витаминов группы Д ' масв йода с последующим опрыскиванием ее ляных концентратах, -тривитамине, 0,5%-ным раствором 2,2-дипиридила в тетравитамине и других объектах в 10 этаноле. На пластинке появляется розозоотехнических, ветеринарных, медиво-красная полоса целевого продукта цинских и прочих биологических исслена белом фоне. дованиях, а также для контроля производства витаминов группы Л (преимущественно Ц±) для медицинских цеЛокализацию витамина Д, определялей и ветеринарии (применяется для ют по свидетелю и окрашенный участок 15 крупного рогатого скота) и витамисиликагеля количественно переносят на Д э для нужд птицеводства. в пробирку с притертой пробкой. Затем в пробирку приливают 3 мл элюиЦелью изобретения является сокра~ рующей смеси, состоящей из этанола, •щение длительности анализа н повышение чувствительности способа. . 20 соляной и фосфорной кислот и дистил• лированной воды в объемных соотношеПоставленная цель достигается ниях 6:3:1:2, энергично встряхивают тем, что согласно способу определения в течение 20 с и отфильтровывают чевитамина Д путем хроматографич:еской рез беззольный фильтр (красная лента). •очистки на пластинке с закрепленным слоем сорбента в подвижной фазе, со- 25 Ополаскивают пробирку 1 мл элюирующей смеси, которую переносят на тот держащей органический растворитель, же фильтр. Полученный розово-красудалением целевого компонента с ный элюат фотометрируют при 492 нм. пластинки и фотометрированием в каСодержание витамина Д^ в препарате честве подвижной фазы используют • ••• ••; смесь гексан:эфир:н-бутанол при объ- 30 определяют по формуле емном соотношении компонентов (45-53) х « _:. --. -' • . . - , . • ' : (53-45);(1-3), а цветную реакцию проводят непосредственно на пластине путем последовательной ее обработки где X - количество витамина Д., най- . треххлористым железом, парами йода денного в препарате, ИЕ/мл; 35 и 2,2і -дипиридилом. А - количество витамина Д„, найП р и м е р 1. Определение витаденного по калибровочной мина Д а в масляном растворе. кривой, мкг; 2,5 г препарата витамина Д. раст40 - коэффициент пересчета в воряют в 2 мл хлороформа, переносят интернациональные единицы в мерную колбу на 25 мл и доводят до (ИЕ>; . ; d г плотность масла, т/мл; , метки хлороформом. На стартовую линию пластинки "Силуфол" с закрепленным Y. - объем хлороформа, в котором слоем силикагеля размером 15x15 см растворена навеска препарананосят 0,1 мм полученного раствора та (25 мл); 45 в виде полосы длиною 80 мм, рядом наУ г - объем хлороформенного растносят точки стандартного раствора . вора препарата, нанесенного витамина Д э (1 мкг холекальциферола). на хроматографическую пласХроматографическое разделение вн . тинку (0,1 мл); тамина Д 3 осуществляют в камере, наm - навеска препарата (2,5 г ) . сыщенной парами подвижной фазы (гекП р и м е р 2. Определение витасаізфир:н-бутанол, смешанных в объеммина Ц-г в спиртовом растворе. ных соотношениях 49:49.2), через ко1 мл спиртового раствора препараторую в. течение 15 мин продували та витамина Д 2 разбавляют хлорофоразот. Когда фронт растворителя примом в мерной колбе до 100 мл. На 55 стартовую линию хроматографической близится к верхнему краю пластинки^ ее извлекают из камеры и высушивают пластинки наносят 0,1 мл полученного в токе азота при 40 С. Затем опрысраствора в виде полосы длиной 80 мм кивают пластинку 0,27-ным раствором и рядом наносят точки стандартного A U O d Y < л 1254379 пы Д в присутствии других жирорастраствора витамина ЇІг (І мкг). Хроворимых витаминов и антиоксидантов; матографическое разделение и все проведение цветной реакции непосреддальнейшие процедуры проводят так же, как описано в примере 1. ственно на пластинке согласно предлагаемому способу позволяет повысить П р и м ер 3. Определение вита5 чувствительность способа; применение мина Д 3 в масляном растворе тетравипредлагаемой сдвижной фазы и цветтамина (смесь витаминов А, Е, Л э ной реакции непосредственно на пласи F). тинке сокращает продолжительность 5 г масляного раствора тетравитамина вносят в мерную колбу на 25 мл !0 анализа более чем в 3 раза; исключение из работы треххлористой сурьмы и доводят до метки хлороформом. На значительно улучшает условия труда стартовую линию хроматографичєскои пластинки наносят 0,1 мл полученноаналитиков и расширяет возможности го раствора в виде полосы длиной использования метода. 80 мм, рядом наносят точки стандарт- 15 ного раствора витамина Д , (1 мкг). Ф о р м у л а и з о б р е р - е н и я Хроматографическое разделение и все дальнейшие операции проводят так Способ определения витаминов Д, же, как описано в примере I. И Д э путем растворения образца в П р и м е р h. Определение вита- 20 хлороформе, нанесения на пластинку с закрепленным слоем сорбента, хром'мина Д 3 в масляном стабилизировантографирования в системе органичесном растворе тривитамина (смесь ви- » ких растворителей, проявления, элюнтаминов А, Е, Д^ и сантохина). роваиия и фотометрирования целевых 4 г масляного раствора тривитамина вносят в мерную колбу на 25 мл 25 соединений, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что* с целью сокращения времеи доводят до метки хлороформом. Все ни анализа и повышения чувствительдальнейшие операции проводят так же, ности способа, в качестве системы как описано в примере 1. органических растворителей используПреимущества способа заключают- зо ют гексан - эфир - н-бутзнол (49:49: :2), а проявление проводят последовася в следующем: применение в качесттельной обработкой раствором хлорнове подвижной фазы предлагаемой сисго железа, парами иода и раствором темы растворителей дает возможность 2,2' -дипирндила. селективно определять витамины груп Составитель В. Каюкова Редактор М. Циткина Техред А.Кравчук Корректор С. Черни Заказ 4713/47 Тираж. 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4