Спосіб стимуляції росту та регенерації культури клітин тестикул поросят за застосування екстракту алое

Реферат: Спосіб стимуляції росту та регенерації культури клітин тестикул поросят включає застосування синтетичних поживних середовищ, ембріональної сироватки та антибіотиків. При цьому, 3 додатково додають стерильний екстракт алое у дозі сухої речовини алое 0,14-0,28 мг на 1 см . UA 121885 U (12) UA 121885 U UA 121885 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної вірусології та біотехнології, призначена для потреб діагностичних лабораторій під час вирощування культури клітин для віросологічного та токсикологічного досліджень. Найдосконалішою моделлю для виділення вірусів із патологічного матеріалу є культура клітин. Вона знімає видові обмеження культивування вірусів, оскільки in vitro можна вирощувати будьякі клітини різних видів тварин. Немає єдиної клітинної культури, яка була б придатною для виділення будь-якого вірусу. Тому в лабораторній діагностиці зазвичай застосовують кілька видів культур залежно від того, який вірус передбачається виділити У вірусологічній практиці найчастіше використовують одношарову (моношарову) культуру клітин. Це клітини in vitro, одержані в результаті диспергування тканин, які прикріплюються до субстрату і розмножуються, утворюючи моношар (на склі пробірок, флаконів, матраців). Відомі аналоги: Для культивування культури клітин використовують поживні середовища до яких додають ембріональну сироватку та антибіотики (Д.Б. Голубев, В.А. Сергеев, 1976; А.С. Новохатский, 1979; Р. Фрешни, 1989; В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина. 1991; И. М. Ганиев, 2007) [1, 2, 3, 5, 6]. Залежно від типу культури клітин середовища різняться своїм якісним та кількісним складом. Експериментальним шляхом автори добирали оптимальні концентрації речовин, що сприяли якісній проліферації та функціонування культури [6]. Так, у певних середовищах доцільна подвійна концентрація амінокислот, лізин, серин, піруват заліза, глюкоза (Ренато Дульбекко, 1984), альбуміни, трансферин, ліпіди, біотин, вітамін В12, селеніт натрія (Ісков Н. Н., 1978) [8,9], параамінобензойна кислота, глютатіон, інозит (G.W. McCoy, 1978) [10], цинк, купрум, ненасичені жирні кислоти (Ham R.G., 1979) [11,12,13]. Ряд авторів досягали безсироваткового росту різних клітин застосовуючи стандартні середовища і замінюючи сироватку специфічним для даного клітинного типу набором гормонів, гормоноподібних ростових факторів, транспортних білків (глюкагон, фолікулотропін, гідрокортизон, прогестерон, інсулін, трансферин) [14]. Недоліком таких методичних підходів є те, що більшість стимуляторів є дороговартісними, високоспецифічними (фактори росту) і як правило отримуються з сироватки крові, що ставить під сумнів відсутність вірусної чи пріонної контамінації. Робота з культурою клітин потребує абсолютної стерильності, ретельної підготовки посуду, відповідних розчинів, живильних середовищ і високої якості води. Задачею корисної моделі є прискорення клітинної репарації зі збереженням морфологічних особливостей клітин. Поставлена задача вирішується тим, що додавання стерильного екстракту алое прискорює репаративні та проліферативні процеси у порівнянні з культурою, що культивується без додавання алое. Технічне рішення корисної моделі дозволяє на 2-у добу при використанні дози сухої 3 речовини алое 0,14-0,28 мг на 1 см ростового середовища спостерігати цілісний щільний моношар без змін кольору, а також стимулювальні процеси росту і регенерації клітин та метаболізму епітеліальної тканини перещеплювальної культури клітин тестикул поросят, що дає змогу скоротити час на вирощування нового моношару для подальших вірусологічних та імунологічних досліджень. При застосуванні екстракту алое на клітини тестикул поросят збільшується їх розмір, міжклітинні зв'язки стають більш чіткими. Дана модифікація полегшує вивчення структури моношару і підрахунок клітин в полі зору при проведенні токсикологічних або вірусологічних досліджень. Джерела інформації: 1. Бахтин Ю.Б. Методы культивирования клеток /Ю.Б. Бахтин, Α.Α. Соминина-Л.: Наука, 1988. - 313 с. 2. Ганиев И.М. Применение комбинаций сывороток крови различных видов животных для культивирования клеток и репродукции вирусов /И.М. Ганиев //автореф. дисс. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук; 03.00.23 "Биотехнология" - Ульяновск, 2007. - 22 с. 3. Голубев Д.Б. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии /Д.Б. Голубев, А.А. Соминина, М.Н. Медведева - М., 1976. - 314 с. 4. Новохатский А.С. Тканевые и клеточные культуры в вирусологии и молекулярной биологии. /А.С. Новохатский - М., 1979. - 156 с. 5. Сергеев В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных /В.А. Сергеев - М.: Колос, 1976. - 304 с. 6. Сюрин В.Н. Диагностика вирусных болезней животных. Справочник. /В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина - Μ.: Агропроиздат, 1991. - 528 с. 7. Фрешни Ρ Культура животных клеток. Методы.; Перевод с анг. под ред. Р.Фрешни - М.: Мир, 1989. - 333 с. 1 UA 121885 U 5 10 8. Iscove N.N. Complete replacement of serum by albumin, transferrin and soybean lipid in cultures of lipopolysaccharide reactive В lymphocytes /N.N. Iscove, F. Melchers //J. Exp. Med. - 1978. - Vol. 147. - P. 923-933. 9. Iscove N.N. Culture of lymphocytes and hemopoietic cells in serum-free medium /N.N. Iscove //Methods for serum-free culture of neuronal and lymphoid cells. - New York, 1984. - P. 169-185. 10. Patterson Μ.К. Preparation of McCoy's madium 5A /Μ.Κ. Patterson, R.T. Dell'orco //Tissue Cult. Assoc. Manual. - 1978. - Vol. 4. - P. 737-740. 11 Ham R.G. Media and growth requirements /R.G. Ham, W.L. McKeehan //Methods in enzymology. New York. - 1979. - Vol. 58. - P. 44-93. 2. Ham R.G. An improved nutrient solution for diploid Chinese hamster and human cell lines /R.G. Ham //Exp. Cell Res. - 1963. - Vol. 29. - P. 515-526. 13. Ham R.G. Selective media j j Cell separation /R.G. Ham //New York. - 1984. - Vol. 3. - P. 20/ 14. Barnes D. Serum-free cell culture: a unifying approach /D. Barnes, G. Sato //Cell. - 1980. Vol. 22. - P. 649-655. 15 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 Спосіб стимуляції росту та регенерації культури клітин тестикул поросят, що включає застосування синтетичних поживних середовищ, ембріональної сироватки та антибіотиків, який відрізняється тим, що додатково додають стерильний екстракт алое у дозі сухої речовини 3 алое 0,14-0,28 мг на 1 см . Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2