Спосіб визначення тироксина у слині

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в клинической лаборатории Целью изобретения является упрощение способа и расширение его универсальности за счет использования любой тесг-системы для определения тироксина. Слюну подвергают сублимационной сушке при (-25) - (30)°С до остаточной влажности 0,5%. Сухой остаток растворяют в воде и проводят радиоиммунологический анализ с использованием стандартного набора для определения тироксина в крови. где [1А)\ - содержание тироксина, найденное из калибровочного графика, V2 - объем, в котором растворен сухой остаток после сублимации; Vi -объем исследуемой слюны. Применяемая лиофильнач сушка позволяет сократить время подготовки к определению до 8-Ю ч по сравнению с 10 неделями в прототипе. Кроме того, определение тироксина в сконцентрированной слюне становится доступным с использованием стандартных наборов. Сушка проводится до остаточной влажности 0,4-0.6 %. Аппаратура для сублимационой сушки не позволяет провести упаривание до требуемого объема пробы с точностью, необходимой для радиоимму пологи чес ко о анализа. Поэтому образец высушивается до сухою остатка. si сл 1725128 В биологических жидкостях тироксин не устойчив, образцы могут храниться не более 2 недель при -20°С. Проведенные исследования показывают, что в данном способе продол- 5 жительность хранения проб может быть существенно увеличена и сравнима с таковой для коммерческих препаратов тироксина (L-тироксин З г срок хранения), не требуя для сохранности низких температур. Эти 10 факторы позволяют производить накопление материала при массовых обследованиях в полевых и экспедиционных условиях, где нет специализированных изотопных лабораторий. 15 П р и м е р. 6 мл слюны, собранной из устья выводного протока околоушной железы с помощью специального устройства помещали в стеклянные флаконы объемом 45* *100 мл, которые устанавливали в камеры 20 сублимационной сушки KS - 6 для плазмы крови. Сублимационную сушку проводили в вакууме в интервале температур (-25) (30)°С до остаточной влажности 0,5 мас.%. Сухой остаток растворяли в 0,5 мл воды, 25 Определение тироксина проводили с применением набора РИО-Т - ПГ института биоорганической химии АН БССР следующим образом. Из растворенного в воде сухого остатка 30 отбирали по 0,25 мл и вносили в аналитические пробирки, входящие в комплект набора РИО-Т4 - ПГ. Приливали по 0,5 мл раствора антисыворотки, туда жедобавляли 0,1 мл раствора 1251-тироксина и оставляли 35 на 1 ч при комнатной температуре. После этого в пробирки приливали 0,1 мл раствора полиэтиленгликоля и тщательно перемешивали. Пробирки помещали в центрифугу с горизонтальным ротором и центрифугиро- 40 вали в течение 15 мин при ускорении 150002000. Надосадочную жидкость сливали в пробирку и помещали в гамма-счетчик для измерения количества импульсов в каждой пробирке в течение 1 мин. По калибровоч- 45 ному графику определяли концентрацию тироксина. Определение тироскина в слюне проводили у здоровых людей и больных гипертиреозом. Параллельно определяли 50 известным способом. Результаты приведены в табл. 1. 'ЗиЛ. і ВИДНО, ЧТО В ОиОИл СпОСибЗХ значения содержания тироксина в слюне согласуются, являясь величинами одного порядка. Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить тироксин в слюне с такой же точностью, какиизиестный, но при этом он намного проще, что требует меньше затрат труда и времени. Так, в прототипе на приготовление антигена и иммунизацию кроликов требуется 8-10 недель. Процесс же сублимации в данном способе длится 8-10 ч. В табл. 2 представлена зависимость открытип тироксина из слюны от остаточной влажности. Из табл. 2 видно, что процент открытия гормона максимальный при остаточной влажности 0,3- 0,6 % , но при 0,3 % влажности ухудшается растворимость осадка, поэтому в качестве оптимального выбран диапазон 0,4-0,6% влажности. При остаточной влажности выше 0,6% наблюдается уменьшение открытия гормона из слюны, что снижает точность определения. Положительный эффект изобретения достигается за счет использования сублимационной сушки для сокращения времени анализа и удлинения срока хранения материала, в известном способе это не достижимо. В прототипе создается новая тест-система, требующая на ее изготовление длительного времени, слюна для исследования не поддается /зпительному хранению, а должна использоваться сразу после забора. Форрмула изобретения Способ определения тироксина в слюне путем добавления специфической антисыворотки к исследуемой пробе с последующей регистрацией реакции антиген-антитело по включению радиоактивной метки, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и расширения его универсальности за счет использования любой тест-системы для определения тироксина, исследуемый материал подвергают сублимационной сушке до остаточной влажности 0,4-0,6%. 1725128 Т а б л и ц а Способ Предлагаемый п= 10 Известный п= 10 Содержание тироксина, нМ/л Норма Гипертиреоз 1,35 + 0,20 10.49+ 1,1 1,10 + 0.07 8,07+ 1.20 1 Точность способа (ошибка среднего),% 10.4 14.9 Т а б л и ц а Влажность, % 0.7 0,6 0.5 0,4 0.3 Редактор М.Стрельникова Открытие тироксина, в % от добавленного 95,0+ 3 99.0+ 3 99.0 +2 99,2+3 * 99.0+ 3 Составитель П.Бонарцев Техред М.Моргентал „_^__ . Корректор О. Кундрик . і Заказ 1172 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035. Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101