Середовище для виявлення анаеробних аспорогенних мікроорганізмів у грибково-бактеріальних ексудатах

Середовище для виявлення анаеробних аспорогенних мікроорганізмів в грибковобактеріальних ексудатах до складу якого входить: сухе середовище для контролю стерильності 33,0 г пептон 15,0 г натрій тіогліколят 1,0 г натрій метабісульфіт (Nа2S2O5) aбo 0,1 г 3 Агар Джерело вітамінів групи В на основі дріжджів (ЭКД) Пептичний гідролізат казеїну (ПГК) Амінопептид Дигідрофосфат калію Гідрофосфат калію Сульфат амонію Сульфат магнію Хлорид натрію Пируват натрію Сукцинат натрію 17701 9-13г 5-15г 5-11г 2-4г 0,3-0,7г 0,3-0,7г 0,3-0,7г 0,1-0,3г 0,5-0,11г 1-2г 1-1,4г 4 Карбонат натрію 1,9-2,7г Крохмаль 0,5-1,5г Мальтоза 0,5-1,5г Арабіноза 0,5-1,5г Фруктоза 0,5-1,5г Поліглюкін 4-6г Дистильована вода до 1л Відомим є середовище для культивування, ідентифікації і збереження облігатно-анаеробних мікроорганізмів [А.с. №18222875], до складу якої входить Сухе тіогликолеве середовище Хлористий натрій Гідролизат по Хоттингеру Пептон Сульфат амонію Розчинний крохмаль Агар 11,0-17г 0,9-1,8г 50-150мг % амінного азоту 2,0-5,0г 0,4-1,2г 1,0-3,0г 0,4 0,7 г ( для рідкого і напіврідкого середовищ ) 16,0 20,0 г ( для щільного середовища ) Вода Після автоклавірування при 120° 20хв. додаКров (нарівно лізіровану і нелізіровану) Менадіон Ферментолізат біомаси мікроорганізмів Бичачий гемоглобін Найбільш близьким та обраним за прототип є напіврідкий збагачений тіогліколевий агарсередовище НЗТА [Лабораторна діагностика гнійно-запальних захворювань, обумовлених аспорогенними анаеробними мікроорганізмами (методичні рекомендації), Харків, 2000. - 35с.], до складу якого входить Сухе середовище для контролю стерильності 33,0г Пептон 15,0г Натрій тіогліколят 1,0г Натрій метабісульфіт (Nа2S2O5) або натрій гідросульфіт (Nа2S2O4) 0,1г Натрій фосфорнокислий двозамісний (Na2HPO4) 1,0г Хлористий калій (КСl) 0,2г Агар-агар 2,0г Живильний бульйон з амінним азотом 120-150мг % 1,0л Після стерилізації при 1,5атм. 30хв. до регенерованої основи додають: Менадіон 0,2мл 1% спирт, розчину Гемін 1мл 1% розчину Твін-80 1мл Істотним недоліком цих широко застосовуваних середовищ для виділення анаеробних бактерій є те, що більшість з них містять рідкі і дорогі компоненти (менадіон, кров, ферментолізат біомаси мікроорганізмів, бичачий гемоглобін і ін.), і жодна з них не розрахована на селективність стосовно грибів роду Candida. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення складу середовища для виявлення до 1л ють: 5% 0,0001 0,01г ( для рідкого і напіврідкого середовищ ) 0,01 0,1г ( для щільного середовища ) 1,0-10,0г 0,01-1,17г (розчинений в 1мл стер. дистильованої води) анаеробних аспорогенних мікроорганізмів у грибково-бактеріальних ексудатах, у якому за рахунок зміни складу компонентів досягається отримання оптимального по складу середовища, зручного і простого у використанні, не потребуючого використання спеціальних методів і перешкоджаючого росту грибів роду Candida. Поставлена задача вирішується в середовищі для виявлення анаеробних аспорогенних мікроорганізмів у грибково-бактеріальних ексудатах до складу якого входить Сухе середовище для контролю стерильності 33,0г Пептон 15,0г Натрій тіогліколят 1,0г Натрій метабісульфіт (Nа2S2O5) aбo натрій гідросульфіт (Nа2S2O4) 0,1г Натрій фосфорнокислий двозамісний (Na2HPO4) 1,0г Хлористий калій (КСl) 0,2г Агар-агар 2,0г Живильний бульйон з амінним азотом 120-150мг % 1,0л Після стерилізації при 1,5атм. 30хв. до регенерованої основи додають: Гемін у кількості 1мл 1% розчина та 1мл Твін80, згідно з корисною моделлю, до середовища вводять розчин вітаміну Κ1, для приготування якого 1мл 1% розчину вітаміну розчиняють в 100мл дистильованої води та антимікотичний препарат у кількості 20-30г на літр середовища після стерилізації. Замість дефіцитного компонента менадіону 5 17701 використовують більш доступний розчин вітаміну Κ1, який являється джерелом додаткових харчових речовин для росту анаеробних організмів. Приготування середовища для виявлення анаеробних аспорогенних мікроорганізмів у грибково-бактеріальних ексудатах пояснимо на прикладах. Приклад 1 Для пригнічення росту супутніх кандид у середовищі використаний антимікотичний препарат «Ністатин», концентрація якого в середовищі склала від 0,01мг/мл до 0,09мг/мл. Для досвіду 6 використані 20 штамів Candida albicans, виділених від хворих і Candida albicans ATCC 885-653. Бульйонні культури 2-х добової культури грибів у концентрації 105КОЕ/мл засівають по 0,1мл у пробірки з 10мл поживного середовища. Облік результатів проводять через 48 годин інкубації в термостаті при 37°С. Для перевірки дії препарату на ростові якості анаеробних бактерій проводять одночасний посів анаеробних культур, виділених від тих же хворих. Результати досвіду представлені в таблиці 1. Таблиця 1 Характеристика росту на середовищі з ністатином Вид мікроорганізму Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Veillonella parvule Fusobacteria nucleatum Prevotella oralis Candida albicans № штаму 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Рост мікроорганізмів в середовищі з концентрацією ністатину, мг/мл 0,01 0,02 0,03 0.04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 + + -. + + + + + + + + + + + + + + + + + + 1 + + + + + + + + + 1 + + + + + + + + + 1 + + + + + + + + + 1 ATCC 885653 + + + + + + + + + + Тільки 1 штам був нечутливий до вмісту ністатину в середовищі 0,01мг/мл. Цілком пригнічувалося зростання 19 з 20 штамів кандид при концентрації ністатину 0,02мг/мл, тобто для створення умов, що інгібірують перешкоджаючих росту кандид на 1л середовища для анаеробів необхідно додати 20г ністатину. Зростання анаеробних бактерій у контролі (без препарату) і у випробуваному середовищі було однаковим. Приклад 2 Склад середовища і постановка досвіду ана логічна попередньому, за винятком препарату для створення противокандидозної дії, що інгібірує, в середовище додавали флуконазол. Концентрації й умови ті ж. Дані представлені в таблиці 2. Один штам кандид пригнічувався при концентрації препарату 0,01мг/мл, три штами - 0,02мг/мл. Переважна концентрація для 17 з 20 штамів склала 0,03мг/мл. Отже, для готування середовища варто додавати 30г флуконазолу на 1л поживного середовища. 7 17701 8 Таблиця 2 Характеристика росту на середовищі з флуконазолом Вид мікроорганізму Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Veillonella parvule Fusobacteria nucleatum Prevotella oralis Candida albicans № штаму 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Рост мікроорганізмів в середовищі з концентрацією флуконазолу, мг/мл 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + -. + + + + + + 1 + + + + + + + + + 1 + + + + + + + + + 1 + + + + + + + + + 1 АТСС 885-653 + + + + + + + + + + + Отримані дані свідчать про переваги селективного середовища з ністатином, що, володіючи прекрасною активністю, що інгібірує, також є недо Комп’ютерна верстка А. Крулевський рогим препаратом, що дозволяє його рекомендувати для готування селективного середовища. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601