Спосіб оцінки рівня енергетичного метаболізму міокарда шляхом дослідження біохімічних властивостей тканини міокарда in vivo

Спосіб оцінки рівня енергетичного метаболізму міокарда шляхом дослідження біохімічних властивостей тканини міокарда in vivo, що включає 3 18884 4 1.1.1.27), піруватдегідрогенази (КФ 1.2.4.1), НАДА=3000 Е/6,22 а, залежної малатдегідрогенази (КФ 1.1.1.37), аланіде а-вміст білка в досліджуваній пробі, мг; Е намінотрансферази (КФ 2.6.1.2), аспартатамінотзміна оптичної щільності розчину в середньому за рансферази (КФ 2.6.1.1), глюкозо-61хв. Вміст білка визначають за методом Bradford фосфатдегідрогенази (КФ 1.1.1.49), 6[4]. Для цього 0,1мл мітохондріальної або плазмафосфоглюконатдегідрогенази (КФ 1.1.1.44), сукцитичної фракцій взірця вносять в 5мл 0,01% розчинатдегідрогенази (КФ 1.3.99.1), концентрації загану Кумассі G-250, який містить 4,7% етанолу і 8,5% льного білка цитоплазми і мітохондрій, пірувату і ортофосфорної кислоти. Через 2хв вимірюють малату, компенсують наслідки низької точності, оптичну щільність розчину за допомогою спектрозумовленої неможливістю одночасного визначенфотометра при довжині хвилі 595нм. Вміст білка ня активності ферменту і відповідного субстрату в визначають по калібровочній кривій, отрманій при одному взірці (ділянці тканини), значними витравикористанні відомих концентрацій альбуміну. тами біологічного матеріалу, що не дозволяє проЯк і вищезазначене сімейство аналогів, цей водити визначення ферментативної активності в спосіб теж характеризується замалою точністю, обсязі тканини масою менше 1г, а також замалої внаслідок неможливості одночасного визначення інформативності дослідження, зумовленої неможактивності ферменту і відповідного субстрату в ливістю паралельного визначення і співставлення одному взірці (ділянці тканини), значними витраактивності деяких ферментів із різних циклів енертами біологічного матеріалу, що не дозволяє прогетичного метаболізму, а від того, забезпечують водити визначення ферментативної активності в покращення точності ооцінки рівня енергетичного обсязі тканини масою менше 1г, а також замалою метаболізму міокарда шляхом дослідження біохіінформативністю дослідження, зумовленою немомічних властивостей тканини міокарда in vivo. Пожливістю паралельного визначення і співставленрівняння заявленого технічного рішення з протоня активності деяких ферментів із різних циклів типом дозволило встановити його відповідність енергетичного метаболізму. критерію «новизна», а сукупність відокремлюючих В основу корисної моделі поставлено задачу ознак корисної моделі є суттєвою, бо має причинрозробити такий спосіб ооцінки рівня енергетичноно-наслідковий зв'язок з вирішенням поставленої го метаболізму міокарда шляхом дослідження біозадачі. Об'єкт групи відповідає умові «винахіднихімічних властивостей тканини міокарда in vivo, цький рівень», оскільки явним чином не випливає з який шляхом спектрофометричної реєстрації рівня техніки, що встановлений заявником. утворення відновленої форми нікотинаміддинукВідомості, які підтверджують можливість відтлеотида в інкубаційному середовищі, в якому за ворення способу ооцінки рівня енергетичного мерахунок паралельного визначення активності цитаболізму міокарда шляхом дослідження біохімічтоплазматичної і мітохондріальної фракцій різних них властивостей тканини міокарда in vivo, з ферментів енергетичного метаболізму забезпечудосягненням вищезазначеного технічного резульється можливість проведення кількісного співставтату полягають у наступному. лення інтенсивності різних метаболічних циклів в Із 150мг тканини міокарда біопсійного матеріодному взірці міокарда, у тому числі на обмеженій алу отримують 5% тканинний гомогенат. Із 3мл кількості тканини (біопсійний матеріал при діагносприготованого на холоді гомогенату відбирають тичних операціях в клініці; малі лабораторні тва1,6мл для визначення концентрації лактату, маларини, ембріональне серце), забезпечує підвищенту, пірувату, а решту частини 1,4мл підпорядковуня точності та зниження тривалості дослідження ють диференціальному центрифугуванню для випри використанні. значення активності цитоплазматичної і Вищезазначений технічний результат, досягамітохондріальних фракцій лактатдегідрогенази (КФ ється тим, що у відомому способі оцінки рівня ене1.1.1.27), піруватдегідрогенази (КФ 1.2.4.1), НАДргетичного метаболізму міокарда шляхом дослізалежної малатдегідрогенази (КФ 1.1.1.37), аланідження біохімічних властивостей тканини міокарда намінотрансферази (КФ 2.6.1.2), аспартатамінотin vivo, що включає спектрофотометричну реєстрансферази (КФ 2.6.1.1), глюкозо-6рацію утворення відновленої форми нікотинамідфосфатдегідрогенази (КФ 1.1.1.49), 6динуклеотиду в інкубаційному середовищі, у відфосфоглюконатдегідрогенази (КФ 1.1.1.44), сукциповідності з корисною моделлю, додатково після натдегідрогенази (КФ 1.3.99.1), концентрації загагомогенізації взірця проводять паралельне визнального білка цитоплазми і мітохондрій за методом чення активності цитоплазматичної і мітохондріаBradford [4]. льної фракцій лактатдегідрогенази (КФ 1.1.1.27), Пропонований спосіб оцінки рівня енергетичпіруватдегідрогенази (КФ 1.2.4.1), НАД-залежної ного метаболізму міокарда шляхом дослідження малатдегідрогенази (КФ 1.1.1.37), аланінамінотрабіохімічних властивостей тканини міокарда in vivo нсферази (КФ 2.6.1.2), аспартатамінотрансферази забезпечує підвищення точності діагностики на (КФ 2.6.1.1), глюкозо-6-фосфатдегідрогенази (КФ 20% та скорочує тривалість останньої у 1,5 рази у 1.1.1.49). 6-фосфоглюконатдегідрогенази (КФ порівнянні з прототипом, переважно за рахунок 1.1.1.44), сукцинатдегідрогенази (КФ 1.3.99.1), паралельного визначення активності цитоплазмаконцентрації загального білка цитоплазми і мітотичної і мітохондріальної фракцій лактатдегідрогехондрій, пірувату і малату, і за величиною показнази (КФ 1.1.1.27), піруватдегідрогенази (КФ ників активності ферментів оцінюють рівень мета1.2.4.1), НАД-залежної малатдегідрогенази (КФ болізму міокарда. 1.1.1.37), аланінамінотрансферази (КФ 2.6.1.2). За умов відтворення способу, саме паралельаспартатамінотрансферази (КФ 2.6.1.1), глюкозоне визначення активності цитоплазматичної і міто6-фосфатдегідрогенази (КФ 1.1.1.49), 6хондріальної фракцій лактатдегідрогенази (КФ 5 18884 6 фосфоглюконатдегідрогенази (КФ 1.1.1.44), сукцидля визначення активності цитоплазматичної і натдегідрогенази (КФ 1.3.99.1), концентрації загамітохондріальних фракцій лактатдегідрогенази (КФ льного білка цитоплазми і мітохондрій, пірувату і 1.1.1.27), піруватдегідрогенази (КФ 1.2.4.1), НАДмалату. залежної малатдегідрогенази (КФ 1.1.1.37), аланіПриклад. Під час проведення хірургічного намінотрансферази (КФ 2.6.1.2), аспартатамінотвтручання з приводу атеросклеротичної серцеворансферази (КФ 2.6.1.1), глюкозо-6судинної хвороби серця у хворого чоловіка 43 рофосфатдегідрогенази (КФ 1.1.1.49), 6ків були вилучені два шматочки біопсійного матефосфоглюконатдегідрогенази (КФ 1.1.1.44), сукциріалу із лівого шлуночка: один із зони ішемії, друнатдегідрогенази (КФ 1.3.99.1), концентрації загагий - із патологічно не зміненої зони. Із 150мг льного білка цитоплазми і мітохондрій за методом тканини міокарда біопсійного матеріалу відповідно Bradford [4]. Результати вимірювань змін біохімічкожного взірця отримали 5% тканинний гомогенат. них показників визначили відмінність рівня енергеІз 3мл приготованого на холоді гомогенату відбитичного метаболізма міокарда в патологічно не рали 1,6мл для визначення концентрації лактату, зміненій зоні ділянки міокарда лівого шлуночка і в манату, пірувату, а решту частини 1,4мл підпорядзоні ішемії ділянки міокарда лівого шлуночка хвоковували диференціальному центрифугуванню рого, що наведене в таблиці. Таблиця Показники концентрації біохімічних ферментів в патологічно не зміненій зоні ділянки міокарда лівого шлуночка і в зоні ішемії ділянки міокарда лівого шлуночка хворого № з/п Біохімічні ферменти та їх активність Концентрація ферментів в патологічно не зміненій зоні ділянки міокарда лівого шлуночка 2,04мкмоль/г 0,14мкмоль/г 0,36 1 Лактат 2 Піруват 3 Малат Білок в мітохондріальній 4 53,6мг/г фракції Білок в цитоплазматичній 5 18,3мг/г фракції Активність ЛДГ в мітохонд6 0,39мкмоль НАД/хв на 1мг білка ріальній фракції Активність ЛДГ в цитоплаз7 1,68мкмоль НАД/хв на 1мг білка матичній фракції Активність ПДГ в мітохонд8 23,8мкмоль НАД/хв на 1мг білка ріальній фракції Активність ПДГ в цитоплаз9 12,3мкмоль НАД/хв на 1мг білка матичній фракції Активність НАД-МДГ в міто10 1,24мкмоль НАД/хв на 1мг білка хондріальній фракції Активність НАД-МДГ в цито11 2,11мкмоль НАД/хв на 1мг білка плазматичній фракції Активність трансамінази 12 0,346мкмоль пірувата/г тканини за год. АлАТ Активність трансамінази 13 0,633 мкмоль пірувата/г тканини за год. АсАТ Активність Г6ФДГ в мітохон14 6,14нмоль НАД/хв на 1мг білка дріальній фракції Активність Г6ФДГ в цито15 2,43нмоль НАД/хв на 1мг білка плазматичній фракції Активність 6ФГДГ в мітохон16 3,87нмоль НАД/хв на 1мг білка дріальній фракції Активність 6ФГДГ в цито17 1,22нмоль НАД/хв на 1мг білка плазматичній фракції 18 Активність СДГ 12,4нмоль сукцината/хв на 1мг білка Таким чином, як видно із прикладу конкретного випадку, пропонований спосіб дозволяє провести кількісне співставлення інтенсивності різних метаболічних циклів по одному взірцю біопсійного матеріалу (за рахунок паралельного визначення активності ферментів циклу трикарбонових кислот, Концентрація ферментів в зоні ішемії ділянки міокарда лівого шлуночка 0,23мкмоль/г 0,01мкмоль/г 0,02 23,3мг/г 08,1мг/г 0,02мкмоль НАД/хв на 1мг білка 0,52мкмоль НАД/хв на 1мг білка 8,97мкмоль НАД/хв на 1мг білка 3,64мкмоль НАД/хв на 1мг білка 0,15мкмоль НАД/хв на 1мг білка 0,08мкмоль НАД/хв на 1мг білка 0,063мкмоль пірувата/г тканини за год. 0,137 мкмоль пірувата/г тканини за год. 1,53нмоль НАД/хв на 1мг білка 0,23нмоль НАД/хв на 1мг білка 0,78нмоль НАД/хв на 1мг білка 0,11нмоль НАД/хв на 1мг білка 2,21нмоль сукцината/хв на 1мг білка окислювального фосфорилювання, трансамінування, пентозо-фосфатного шунта), тобто - визначити рівень енергетичного метаболізму в патологічно зміненій зоні ділянки міокарда, що дозволяє підвищити точність дослідження, обмежити обсяг хірургічного втручання. 7 18884 8 Джерела інформації активности дегидрогеназ пентозофосфатного пути 1. А.с. 1347016 СССР. МКИ G01N33/49. Спо//Методьі биохимических иселедований (Липидный соб иселедования метаболизма миокарда/ М.Т. и энергетический обмен). - Учебное пособие /Под Парашко (СССР). - 5с. ред. М.И. Прохоровой. - Л.: Изд.во Ленингр. ун-та. 2. А.с. 1582993 СССР. G01N33/68. Способ - 1982. - С.168-172. определения содержания креатинина, креатина и 4. Bradford M.M. A rapid and Sensitive Method саркозина в биологических жидкостях/Л.М. Чебыfor the Quantitation of Micrigram Quantities of шев (СССР). - 6с. Protein-Dye Binding// Analitical Biochemistry. - 1976. 3. Путилина Ф.Е., Зоидзе С.Д. Определение - N 2. - P.248-254. Комп’ютерна верстка М. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601