Спосіб одержання рідкого екстракту з антимікробною та протигрибковою активністю

1. Спосіб одержання рідкого екстракту з антимікробною та протигрибковою активністю, що включає використання висушених бруньок берези бородавчастої та їх екстрагування, який відрізня 3 19508 4 ни відпуском, одержаним перколяцією попередну із другого перколятора, переносять на сировину ньої порції сировини, та очистку одержаного рідков третій перколятор, а в другий - переносять витяго екстракту від супутніх речовин. жку, одержану з першого перколятора. У перший Поставлене завдання вирішується ще тим, що перколятор втретє подають свіжий екстрагент, що як екстрагент використовують спирт етиловий у залишився. Завантажені перколятори залишають концентрації 60-70%. для настоювання протягом 24год. Поставлене завдання вирішується ще тим, що Через добу з третього перколятора отримують очистку одержаного рідкого екстракту від супутніх витяжку, яка є готовим продуктом. Витяжку, одерречовин здійснюють відстоюванням при темперажану з другого перколятора, переносять у третій турі 8°С не менше 2 діб та наступним фільтруперколятор. З першого перколятора одержують ванням. витяжку, сировину забирають і відтискають. ВитяУдосконалений спосіб екстрагування бруньок жку та відтиск з першого перколятора використоберези бородавчастої приводить до одержання вують для настоювання сировини в другому перкінцевого продукту з вищим виходом флавоноїдів коляторі. Обидва перколятори залишають на 2год. як активно діючих речовин. Одержаний рідкий ексЗа 2 год з третього перколятора одержують тракт володіє високою активністю не тільки щодо другу порцію готового продукту. З другого перкопатогенних і умовно-патогенних штамів стафілоколятора одержують витяжку, сировину забирають і ків та стрептококів, але активний і щодо грибкової відтискають. Ці вилучення переносять у третій флори, а саме - Candida albicans, розвиток якої є перколятор, де їх настоюють з сировиною протячастим ускладненням антимікробної терапії. Викогом 2 год. За 2год одержують третю порцію готовористання в якості екстрагента спирту етилового у го продукту, до якої долучають відтиск із сировини. концентрації 60-70% значно здешевлює виробницТри порції готового продукту об'єднують і одержутво рідкого екстракту. ють рідкий екстракт з бруньок берези бородавчасЗапропонований спосіб здійснюють наступним тої. Вихід кінцевого продукту, умовно позначеного чином. шифром ББ-1, становить 98,4%; сумарний вміст Бруньки берези бородавчастої (Betula флавоноїдів в перерахунку на гіперозид становить verrucosa Ehrh.), попередньо висушені, ділять на 1,94%±0,18%. три частини і завантажують у три перколятори. Приклад 2 Сировину у першому перколяторі заливають спирБруньки берези бородавчастої (Betula том етиловим відповідної концентрації "до дзеркаverrucosa Ehrh.), попередньо висушені, ділять на ла" і настоюють протягом 2год, потім проводять три рівні частини по 30,0г і завантажують у три перколяцію. У другий перколятор подають свіжий перколятори. Кількість екстрагента, розрахована з екстрагент або відпуск, одержаний після настоюурахуванням маси сировини та коефіцієнта спирвання сировини в першому перколяторі, "до дзертопоглинання, становить 315мл. Сировину у перкала" та проводять настоювання протягом 2год. У шому перколяторі заливають спиртом етиловим третій перколятор подають свіжий екстрагент або 65% "до дзеркала" і настоюють протягом 2 год. відпуск, одержаний після настоювання сировини в Через 2год проводять перколяцію і одержану видругому перколяторі, "до дзеркала" та проводять тяжку переносять у другий перколятор. У перший настоювання протягом 2год. перколятор знову подають свіжий екстрагент "до Три порції готового продукту об'єднують і одедзеркала". Сировину в обох перколяторах насторжують рідкий екстракт з бруньок берези бородавюють протягом 2год. Після цього витяжку, одержачастої. Одержаний рідкий екстракт відстоюють при ну із другого перколятора, переносять на сировину температурі 8°С не менше 2 діб, після чого фільтв третій перколятор, а в другий - переносять витярують під тиском. жку, одержану з першого перколятора. У перший Одержаний екстракт являє собою прозору ріперколятор втретє подають свіжий екстрагент, що дину світло-коричневого кольору з приємним хазалишився. Завантажені перколятори залишають рактерним запахом. Вихід кінцевого продукту стадля настоювання протягом 24год. новить 97,7-98,5%; сумарний вміст флавоноїдів в Через добу з третього перколятора отримують перерахунку на гіперозид становить 1,20%-1,94%. витяжку, яка є готовим продуктом. Витяжку, одерРідкий екстракт бруньок берези умовно позначежану з другого перколятора, переносять у третій ний шифром "ББ". перколятор. З першого перколятора одержують Спосіб ілюструється наступними прикладами. витяжку, сировину забирають і відтискають. ВитяПриклад 1 жку та відтиск з першого перколятора використоБруньки берези бородавчастої (Betula вують для настоювання сировини в другому перverrucosa Ehrh.), попередньо висушені, ділять на коляторі. Обидва перколятори залишають на 2год. три рівні частини по 30,0г і завантажують у три За 2год з третього перколятора одержують перколятори. Кількість екстрагента, розрахована з другу порцію готового продукту. З другого перкоурахуванням маси сировини та коефіцієнта спирлятора одержують витяжку, сировину забирають і топоглинання, становить 315мл. Сировину у первідтискають. Ці вилучення переносять у третій шому перколяторі заливають спиртом етиловим перколятор, де їх настоюють з сировиною протя70% "до дзеркала" і настоюють протягом 2 год. гом 2 год. За 2год одержують третю порцію готовоЧерез 2год проводять перколяцію і одержану виго продукту, до якої долучають відтиск із сировини. тяжку переносять у другий перколятор. У перший Три порції готового продукту об'єднують і одержуперколятор знову подають свіжий екстрагент "до ють рідкий екстракт з бруньок берези бородавчасдзеркала". Сировину в обох перколяторах настотої. Вихід кінцевого продукту, умовно позначеного юють протягом 2год. Після цього витяжку, одержашифром ББ-2, становить 97,9%; сумарний вміст 5 19508 6 флавоноїдів в перерахунку на гіперозид становить макопеєю України (Розділ 2.6. Біологічні випробу1,32%±0,20%. вання): Staphylococcus aureus - 6538 АТСС, Приклад 3 Staphylococcus epidermidis - 14990 АТСС, Бруньки берези бородавчастої (Betula Streptococcus faecalis - 1783, Candida albicans verrucosa Ehrh.), попередньо висушені, ділять на 10231 АТСС [3, 4]. три рівні частини по 30,0г і завантажують у три У чашки Петрі діаметром 9см вносили 10мл перколятори. Кількість екстрагента, розрахована з розплавленого густого живильного середовища урахуванням маси сировини та коефіцієнта спирдля вирощування бактерій (м'ясо-пептонний агар топоглинання, становить 315мл. Сировину у пердля S. aureus, S. epidermidis. Sir. faecalis) або розшому перколяторі заливають спиртом етиловим плавленого густого живильного середовища для 60% "до дзеркала" і настоюють протягом 2год. вирощування грибів (середовище Сабуро - для Через 2год проводять перколяцію і одержану виCandida albicans) із температурою близько 45°С і тяжку переносять у другий перколятор. У перший давали середовищу застигнути. Культури досліперколятор знову подають свіжий екстрагент "до джуваних тест-штамів вирощували на відповіднодзеркала". Сировину в обох перколяторах настому середовищі (м'ясо-пептонний агар - для S. юють протягом 2год. Після цього витяжку, одержаaureus, S. epidermidis, Sir. faecalis, середовище ну із другого перколятора, переносять на сировину Сабуро - для Candida albicans) протягом 18-24 год, в третій перколятор, а в другий - переносять витяпісля чого готували завис мікроорганізмів за оптижку, одержану з першого перколятора. У перший чним стандартом мутності 5 одиниць. перколятор втретє подають свіжий екстрагент, що 1мл завису, підготованого як описано вище, залишився. Завантажені перколятори залишають вносили у пробірку, що містила 10мл розплавледля настоювання протягом 24год. ного і охолодженого до температури не більше Через добу з третього перколятора отримують 45°С відповідного густого живильного середовивитяжку, яка є готовим продуктом. Витяжку, одерща. Швидко перемішували вміст пробірки і пережану з другого перколятора, переносять у третій носили у чашку Петрі, підготовану, як описано виперколятор. З першого перколятора одержують ще, що містила відповідне густе живильне витяжку, сировину забирають і відтискають. Витясередовище. Швидким погойдуванням чашки Петрі жку та відтиск з першого перколятора використорівномірно розподіляли верхній шар живильного вують для настоювання сировини в другому персередовища. Після застигання середовища у верколяторі. Обидва перколятори залишають на 2год. хньому шарі спеціальним пробійником виготовляЗа 2год з третього перколятора одержують ли лунки, в які стерильною мікропіпеткою вносили другу порцію готового продукту. З другого перкодосліджувані об'єкти. Для виключення впливу екслятора одержують витяжку, сировину забирають і трагенту на ріст тест-культур в контрольні лунки відтискають. Ці вилучення переносять у третій вносили 60%,65% та 70% спирт етиловий. перколятор, де настоюють їх з сировиною протяЧашки перевертали й інкубували протягом 24гом 2 год. За 2год одержують третю порцію готово48 годин при температурі 37°С - S. aureus, S. го продукту, до якої долучають відтиск із сировини. epidermidis, Str. faecalis, при температурі 22°С Три порції готового продукту об'єднують і одержуCandida albicans. ють рідкий екстракт з бруньок берези бородавчасПісля інкубації в термостаті за допомогою лупи тої. Вихід кінцевого продукту, умовно позначеного з окуляр-мікрометром оцінювали діаметри зон шифром ББ-3, становить 98,2%; сумарний вміст затримки росту мікроорганізмів навколо лунок. флавоноїдів в перерахунку на гіперозид становить Для порівняльної характеристики і оцінки ак1,20%±0,19%. тивності досліджуваних варіантів засобу ББ в якоАнтимікробну активність одержаних рідких ексті прототипу за способом одержання та характестрактів вивчали in vitro методом дифузії в агар ром дії використовували згаданий вище засіб Б-90 (метод двошарового висівання) [2]. Досліди стави[1]. Результати вивчення антимікробної та протили у триразовому паралельному відтворенні. Як грибкової активності засобів серії ББ та Б-90 предтест-культури використовували штами мікрооргаставлені у таблиці. нізмів, рекомендовані ВООЗ та Державною ФарТаблиця. Порівняльна оцінка антимікробної та протигрибкової активності засобів серії ББ та Б-90 Тест-штами мікроорганізмів S. aureus S. epidermidis Sir. faecalis Candida albicans Б-90 (прототип) 12,89±0,71 не досліджували недосліджували недосліджували Зони затримки росту мікроорганізмів, мм ББ-1 ББ-2 13,67±0,97 11,67±0,97 19,67±0,97 16,33±0,97 11,67±0,97 9,33±0,97 14,67±0,97 10,33±0,97 Як видно з даних таблиці, рослинні екстракти ББ-1, ББ-2, ББ-3 пригнічують ріст мікроорганізмів S. aureus, S. epidermidis. Sir. faecalis, Candida albicans. Оскільки при внесенні в контрольні лунки ББ-3 8,67±0,97 11,33±0,97 6,67±0,97 8,33±0,97 спирту етилового різної концентрації спостерігалося дуже слабке пригнічення росту мікроорганізмів діаметр зон затримки росту не перевищував 4,33±0,27мм - можна виключити вплив екстрагенту 7 19508 8 на ріст тест-культур. Найвищу активність щодо кового засобу для лікування багатьох дерматоловсіх досліджуваних штамів мікроорганізмів проявгічних захворювань. ляє рідкий екстракт, умовно позначений шифром Джерела інформації: ББ-1. У порівнянні з прототипом, умовно позначе1. Куцик Р.В. Скринінгове дослідження протиним Б-90, активність засобу ББ-1 щодо штаму мікробної активності лікарських рослин ПрикарS.aureus є вищою. паття відносно поліантибіотикорезистентних клініТаким чином, проведені дослідження свідчать, чних штамів стафілококів. Повідомлення 2. // що представлений удосконалений спосіб одерГалицький лік. вісник. -2005.-Т.12.-Х23.-С.52-58. жання рідкого екстракту дозволяє отримати рідкий 2. Методы определения чувствительности, екстракт з високим вмістом флавоноїдів як активустойчивости и толерантности микроорганизмов к но діючих речовин, який володіє вищою антимікантибиотикам, химиотерапевтическим препараробною активністю по відношенню до S. aureus, там. / Под ред. А.И.Корнищенко. - СПб: Интерменіж його порівняльний зразок - засіб Б-90. Окрім дика, 1999. - 336с. того, одержаний рідкий екстракт володіє високою 3. Державна Фармакопея України / Державне активністю щодо штаму S. epidermidis, а також підприємство "Науково-експертний фармакопейзначною активністю щодо штаму Sir. faecalis та ний центр". – 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001.- 556с. щодо дріжджового грибка Candida albicans. Вказані 4. Державна Фармакопея України / Державне властивості нових рослинних екстрактів дозволяпідприємство "Науково-експертний фармакопейють пропонувати вищезгаданий спосіб для одерний центр". – 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001.- Допожання ефективного антимікробного та протигрибвнення 1. - 2004. - 520с. Комп’ютерна верстка Н. Лисенко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601