Штам вірусу гепатиту каченят для виготовлення вакцини проти вірусного гепатиту каченят

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и касается нового штамма вируса гепатита утят, пригодного для получения вакцины против вирусного гепатита утят. Цель изоб-* ретения - новый штамм вируса гепатита утят, соответствующий по антигенной структуре эталонному и циркулирующим вирусам и характеризующийся высокой иммуногенностью и высокой репродуктивной активностью в развивающихся эмбрионах кур. Адаптационные свойства. Исходный возбудитель вирусного гепатита утят адаптирован к куриным эмбрионам, при этом сохраняет патогенность для эмбрионов и иммуногенность для утят. Титр инфекционностн возбудителя из штамма "КУНИИП" на куриных эмбрионах составляет 1(Гб-$(Г7 ЭЛЛ 50/0,? мл. На введение штамма "К-УНИИП" в организме утят образуются вирус-нейтралиэующие антитспа. Штамм "К-УНИИП" вируса гепатита утят предлагаемся использовать рак продуцент вакцины против вирусного гепатита утят, которая стимулирует у привитых утят напряженный иммунитет. I Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и касается созда ния нового штамма вируса гепатита утят, пригодного для получения вакцины против вирусного гепатита утят Цель изобретения - новый штамм вируса гепатита утят, соответствующий по антигенной структуре эталонному и циркулирующим вирусам и характеризующимся высокой иммуногенностью и высокой репродуктивной ак гивностью в развивающихся эмбрионах кур (РЭК). Штамм выделен от павших по причине вирусного гепатита утят, чатем аттенуирован и адаптирован к 8-9дневным РЭК. Хранится в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного Научно-контрольного института ветеринарных пррллра гов Госагропрома СССР под номером 08 и называется "К-УНИИП". 1459239 Морфологические п р и з н а к и . Вирусные частицы округлой формы величиной 20-40 нм, Культуральные с в о й с т в а . Штамм "К-УНИИП" репродуцируется в 8-9-днев- 5 ных РЭК. Адаптационные с в о й с т в а . Штамм "К-УНИИП" вирусного гепатита утят адаптирован к куриным эмбрионам. При 1 Г этом штамм сохраняет патогенность для РЭК и РЭУ и иммуногенность для у т я т . Биологическая активность штамма "К-УНИИП" на РЭК 6-7 1g ЭЛД 5 0 / 0 , 2 мл, а биологическая а к т и в )с ность штамма "ЗМ-УНИИП" 5-6 1g ЭЛД 50/0,2 мл на РЭУ, т . е . гомологичной для исходного вируса среде культивирования. Антигенные с в о й с т в а . Родственен 20 штаммам вируса г е п а т и т а , выделенным в СССР. На введение штамма КУНИИП" в организме у т я т образуются вирус нейтрализующие а н т и т е л а . 100%-ная 25 устойчивость утят к экспериментальному заражению вырабатывается при введении 10000 ЭЛД 5 0 / 0 , 2 мл штамма • "К-УНИИП" и 100000 ЭЛД 50/0,2 мл штамма "ЗМ-УНИИП", Вирулентные с в о й с т в а . Штамм в и 30 рулентен для однодневных утят при внутримышечном введении 5-10 ЭЛД 50/0,2 мл. При заражении 8-9-дневных РЭК вызывает их гибель ч е р е з 48-72 ч . Гибель РЭУ при заражении их вирусом гепатита из штамма "ЗМ-УНИИП" н а с т у - 35 пает через 72-96 ч . Стабильность биологических свойств прослежена до 200 пассажа на РЭК. Штамм "К-УНИИП" вируса гепатита 40 утят б е з в р е д е н , вызывает иммунитет у 100% привитых утят при внутримышечной аппликации в д о з е 10 4 ЭЛД 50/0,2 мл (разведение 1 : 1 0 0 ) , биоло* гическая активность в пределах 10 7 І О" ЭЛД 5 0 / 0 , 2 мл и может быть и с пользован в к а ч е с т в е вакцинного. П р и м е р . Изготовление жидкой вирус-замхины против вирусного г е патита у т я т . Куриные эмбрионы заражают в 8-9дневном в о з р а с т е в аллантоисную пол о с т ь суспензий вируса из штамма "К-УНИИТ" в д о з е 10*-10 5 ЭЛД 50/0,2 мл, (разведенным 1:100 на физиологическом р а с т в о р е ) , а затем инкубируют их в течение 24-72 ч при температуре 37+1°С и относительной влажности 60- 1 70%. Зараженные эмбрионы просматривают с помощью овоскопа 2 р а з а в день в течение 3 с у т . Все эмбрионы, погибшие за первые 24 ч после заражения, выбраковывают, а погибшие после 24 ч и позднее используют для отбора в и руссодержащего материала, предварительно охладив из при 2-4 С в т е ч е ние 2-3 ч . Эмбрионы вскрывают в у с ловиях строгой асептики, стерильными ножницами срезают часть скорлупы в области расположения воздушной к а меры, стерильным пинцетом снимают подскорлупную оболочку и аллантоисноамннотическую (экстраэмбриональную) жидкость отсасывают с помощью вакуумнасоса в стерильные флаконы емкостью не более 1 л и добавляют антибиотики, преимущественно пенициллин и с т р е п т о мицин по 1000 ЕЛ/мл вакцины или г е н тамицин 2-2,5 мкг/мл, а также к и с т а тин в количестве 500-1000 ЕД/мл. Из каждого флакона делают высевы экстраэмбриональной жидкости на питательные среды. До выяснения результатов проверки экстраэмбриональной жидкостн на стерильность флаконы с вируссодержащим материалом хранят при +2-4°С. Для изготовления вакцины используют только свободную от контаминации бактериями и грибами аллантоисно-амниотическую жидкость, к о т о - . рую сливают в одну емкость в а с е п т и ческих условиях, смешивают" и д о б а в ляют антибиотики, преимущественно пенициллин и стрептомицин по 1000 ЕД/мл или гентамицин 2-2,5 мкг/мп, а также нистатин в количестве 5001000 ЕД/мл. После смешивания вакцину разливают в стерильные флаконы емкостью 100 или 200 мл. Флаконы быстро закрывают резиновыми пробками и о б катывают металлическими колпачками. Все изготовленные серии вакцины подвергаются контролю на стерильность, безвредность, биологическую а к т и в ность и иммуногенность. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Штамм вируса гепатита утят ВГНКИ № 8 для изготовления вакцины против вирусного гепатита у т я т . 1459239 Редактор М. Самерханова Заказ 3326 ' Составитель И. Танеева Техред Л.Олийнык Корректор Г. Решетник Тираж 480 * Подписное ВКИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина,ТОЇ I