Спосіб нейрохімічної оцінки формування умовної реакції пасивного уникнення тварини

Спосіб нейрохімічної оцінки формування умовної реакції пасивного уникнення тварини, що 3 20629 4 ки формування умовної реакції пасивного уникСукупність наданих ознак дозволяє визначити нення тварини, що включає утворення умовної рівень цистеїнового катепсину Н після формуванреакції шляхом комбінаційного світлового і електня УРПУ у фронтальній корі, гіпокампі та Варолієричного впливів і наступне дослідження проникновому мості мозкових структур, що у тварин відпості мембран лізосом великих півкуль мозку, з вивідають за формування пам'яті, а від того, має значенням активності кислої фосфатази, РНК-ази, зв'язок з покращенням заявленого технічного реа проникності мембран лізосом великих півкуль зультату. Зміни концентрації вільного катепсину Н мозку - по концентрації лізосомних фракцій в гомовідбивають реакцію лізосомних протеїназ на форгенатах останніх [5]. мування, кодування та відтворення слідів нейроЯк і попереднє технічне рішення, прототип залогічної пам'яті, наприклад, на молекулярних, безпечує реєстрацію слідів навчання тварин по надмолекулярних, субклітинних і міжклітинних рівзміні проникності мембран лізосом мозку, а за ранях. хунок умовного та безумовного подразнень, а саНа Фіг. надана діаграма, що ілюструє розподіл ме, комбінації світлового та електричного впливів рівня вільної активності цистеїнового катепсину Н посилення ефективності формування УРПУ твау фронтальній корі (1), смугастому тілі (2), гіпокамрини після навчання у щурів відомих ліній. пі (3), медіальному таламусі (4) та Варолієвому Проте, ігнорування визначення вмісту лізосомості (5) головного мозку інтактних, навчених і мної кислої протеїнази чи протеолізу у фронтальанам-незованих щурів після формування УРПУ. ній зоні неокортексу, гіпокампі, Варолієвому мості, Відомості, які підтверджують можливість відмедіальному таламусі, смугастому тілі при виробтворення способу полягають у наступному. ленні УРПУ ще стримує інформативність об'єкта, Для здійснення способу нейрохімічної оцінки бо зміна рівня вільної активності катепсинів в них формування УРПУ тварини можливо залучення більш компетентно відбиває зміни рівня проникнобілих статевозрілих щурів, спеціалізованого присті мембран лізосом, а кисла фосфатаза разом з міщення для їх подразнення, складеного з великої РНК-азою головного мозку, навпаки, виглядають освітленої та малої темної камер, що поєднані під час протеолізу та модифікації білків не досить круглим отвором і постачені електрифікованою інформативними до відбиття слідів формування підлогою, а для визначення кількісного вмісту канейрологічної пам'яті й рівня вільного катепсину Н тепсину Н-гомогенати на трис-буферній основі у великих півкулях мозку. ("Sigma", USA), гідролізат 2-нафіламіду L-лейцину В основу заявленого способу поставлено за("Koch-Light Laboratories", Англія) та спектрофотодачу розробити такий спосіб нейро-хімічної оцінки метр. формування умовної реакції пасивного уникнення Сутність способу нейрохімічної оцінки формутварини, який шляхом залучення структур головання УРПУ тварини полягає в утворенні умовної вного мозку, що відповідають за формування пареакції шляхом комбінаційного світлового та елекм'яті, забезпечує покращення інформативності при тричного впливів, в дослідженні проникності мемвикористанні. бран лізосомних фракцій, вмісту лізосомного цисДля вирішення поставленої задачі у відомому теїнового катепсину Н у фронтальній зоні способі нейрохімічної оцінки формування умовної неокортексу, гіпокампі, Варолієвому мості, медіареакції пасивного уникнення тварини, що включає льному таламусі та смугастому тілі. Визначеня утворення умовної реакції шляхом комбінаційного кількості цистеїнового катепсину Н в гомогенатах світлового та електричного впливів і наступне довиділених структур здійснюють шляхом гідроліза слідження проникності мембран лізосом великих хромогенного субстрату лей-2-НА, з використанпівкуль мозку, додатково визначають рівень вільням спектрофотометра та ультрацентрифуги після ної активності лізосомного цистеїнового катепсину відповідної обробки аналізату в буферних розН у фронтальній зоні неокортексу, гіпокампі, Варочинах. лієвому мості, медіальному таламусі й смугастому Для перевірки інформативності способу був тілі. проведений експеримент (Таблиця 1). Перед фоОзнаки, які відрізняють пропонований спосіб рмуванням УРПУ щура, його розташовували в нейрохімічної оцінки формування умовної реакції середині освітленої камери, хвостом до отвору в пасивного уникнення тварини від прототипу полятемний відсік приміщення. Тварина досліджувала гають у додатковому визначенні рівня вільної акосвітлений відсік, знаходила отвір у темну камеру тивності лізосомного цистеїнового катепсину Н у та переходила до неї. Латентний період такої реафронтальній зоні неокортексу, гіпокампі, Варолієкції враховували як час з моменту розміщення вому мості, медіальному таламусі й смугастому тварини в камері, до повного переходу до темної тілі та забезпечують покращення інформативності, камери. Через 15с на підлогу камери подавали бо вищезазначені структури головного мозку призмінний імпульсний струм (тривалістю, щонаймеймають участь у формуванні енграм пам'яті, а під нше 10мс), інтенсивність стимуляції для кожної з час протеолізу та модифікації білків відбивають тварин підбирали індивідуально за порогом борівні змін цистеїнового катепсину Н і проникності льової чутливості. Отвір між камерами залишали мембран лізосом. Кількісне ж визначення вмісту відчиненим. За щуром, який переміщувався до вільного катепсину Н після вироблення умовної освітленої камери та намагався повернутися до реакції тварини, дозволяє оцінити ступінь й триватемного приміщення спостерігали протягом 3-х лість участі окремих утворень головного мозку в хвилин. Тварин, які повторно заходили до темної процесі формування умовно-рефлекторної реакції, камери протягом 3-х хвилин з експерименту вилущо констатує покращення інформативності дослічали. Через 2 години після вироблення пасивного дження. оборонного навичку кожну з тварин піддавали 5 20629 6 електрошокому впливу (I=200мА, t=500мс) для 2,5 та 1,9 рази та зниження її рівня в гіпокампі та виклику амнезії та втрати УРПУ. Протягом 72 госмугастому тілі у 2,0 і 4,5 рази, відповідно (див. дин спостерігали за поведінкою навчених щурів, а діаграму). коли вони не відрізнялись від поведінки інтактних Отже, підвищення вільної активності катепсищурів, здійснювали перевірку збереження умовної ну Н інформує про збільшення проникності мемреакції. За результатами перевірки щурів розділябран лізосом мозку, а разом із цим про отримання ли на 2 групи: з амнезією, втратою навички (30%) інформації більш високого порядку. Пропонований та збереженням УРПУ (70%). Після декапітації, у спосіб нейрохімічної оцінки формування УРПУ тварин вилучали головний мозок і виділяли фронтварини може бути корисним, бо ґрунтується на тальну зону неокортексу, гіпокамп, Варолієв міст, залученні тих стр уктур головного мозку тварини, медіальний таламус та смугасте тіло, які відбиваякі об'єктивно відповідають за формування пам'я ють слід феномену пам'яті. Активність вільного тного сліду, а його використання в нейрофізіології, катепсину Н, у відповідністю з корисною моделлю, невропатології, теоретичній або клінічній психоловизначали у фронтальній зоні неокортексу, смугагії, може забезпечити більш достовірні дослідженстому тілі, гіпокампі, медіальній частині таламусу і ня при використанні меншої кількості лабораторВаролієвому мості. Гомогенати (10%) готували на них тварин розповсюджених лабораторних ліній. 0,025 трисбуфері, виготовленому на основі NaCl Джерела інформації: (pH 7,4). Фактори активності досліджували спект1. Буреш Я., Бурешо ва О. і Хьюстон П.Дж. Мерофотометричним шляхом, за гідролізом 2тодики и основные експерименты по изучению нафтіламіду L-лейцину. мозга и поведения. М.: Высшая школа, 1991. При цьому було встановлено, що у різних 236с. структурах мозку досліджуваних тварин при виро2. Дроздов О.Л., Лещинська І.О., Кошелєв бленні УРПУ відзначались вірогідні зміни рівнів О.С., Чорна B.I. Вміст молекули клітинної адгезії амінопептидазної активності катепсину Н як у амNCAM в структура х головного мозку щурів при незованих тварин, так і тварин, які після електровідтворенні умовної реакції пасивного уникнення // шокового впливу зберігали умовну навичку. Через Neurophysiology.-l 999. -Vol.131. -№1. -С.73-75. 72 години спостерігалось виражене підвищення 3. Landmesser L. Synaptic plasticity: fastening активності ферменту у всіх структура х мозку тих synapses by adhesion // Curr. biol. -1997. -Vol. 628. щурів, що зберегли навичку з істотними змінами у P.286-292. фронтальній корі, гіпокампі та Варолієвому мосту, 4. Дергачев В.В. Молекулярные и клеточные наприклад, у 3,2, 2,8 і 1,9 рази, відповідно, при механизмы памяти. М.: Медицина, 1977.-250 с. р