Спосіб структурно-функціональної оцінки формування умовної реакції активного уникнення тварини

Спосіб структурно-функціональної оцінки формування умовної реакції активного уникнення тварини, що містить врахування характеру поведінки після початку навчання, який відрізняється тим, що додатково у фронтальній зоні кори головного мозку та його підкіркових структурах КІЛЬКІСНО визначають експресію глікопротешу NCAM шляхом твердофазного імуноферментного аналізу кції активного уникнення тварини, що містить врахування характеру поведінки, візуальну реєстрацію та хронометраж окремих компонентів поведінки [9] - прототип До причин, що перешкоджають досягненню технічного результату, що заявляється, відносяться візуалізація компонентів поведінки та хронометраж його окремих компонентів Це пояснюється тим, що означена візуалізація позбавлена КІЛЬКІСНИХ характеристик, а хро нометраж носить суб'єктивний характер Сукупність відомих приймань значно знижує вірогідність критерію, який досліджується, а саме, оцінки реакції активного уникнення В основу вдосконалення відомого способу структурно-функціональної оцінки умовної реакції активного уникнення тварини поставлена задача підвищити вірогідність оціночного критерію шляхом реєстрації змін клітинних контактів головного мозку при використанні Означений технічний результат досягається тим, що у відомому способі структурнофункціональної оцінки формування умовної реакції активного уникнення тварини, що містить врахування характеру поведінки, особливість полягає в тому, що додатково в різноманітних структурах головного мозку КІЛЬКІСНО визначають експресію глікопротешу NCAM, при використанні Кількісне визначення експресії глікопротешу NCAM, поряд з врахуванням характеру поведінки тварини, забезпечує можливість порівняння динаміки змін поведінки зі зміною вмісту білка, відповідального за процеси оцінку ступеня участі окремих утворень головного мозку в процесі формування умовно-рефлекторної реакції со 44391 Таким чином, реєструючи зміни клітинних контактів головного мозку, заявник не виключаючи візуалізацію компонентів поведінки та хронометраж його окремих компонентів і забезпечує підвищення вірогідності оціночного критерію умовної реакції активного уникнення тварини ВІДОМОСТІ, ЯКІ підтверджують можливість здійснення об'єкту, що заявляється, полягають у наступному Врахування характеру поведінки виконують за допомогою Y-подібного лабиринту з електрифікованою підлогою Для КІЛЬКІСНОГО визначення експресії глікопротеїну NCAM не обхідні білі щури, здебільшого, самці лінії Вістар, як експериментальні тварини (в контрольній, навченій та ненавченій групах) Крім того, для здійснення діагностики також потрібні центрифуга VAC 25, спектрофотометр для мікропланшетів Спосіб структурно-функціональної оцінки умовної реакції активного уникнення тварини здійснюється наступним чином По ВІДОМІЙ методиці [9] спочатку виробляється умовна реакція активного уникнення тварини, а через 2, 24 і 72 години, після початку навчання, враховується характер поведінки та визначається динаміка змін вмісту глікопротешу NCAM у фронтальній зоні кори головного мозку та в підкіркових структурах (смугастому ТІЛІ, ядрах медіального таламусу, Варолійовому мосту та ппокампі) Кількісне визначення експресії глікопротешу NCAM у згаданих структурах головного мозку знаходять шляхом твердофазного імуноферментного аналізу з використанням спектрофотометру для мікропланшет у мембранних фракціях виділених структур головного мозку, які одержуються за допомогою ультрацентрифуги VAC 25 Мембранна фракція виготовляється на буферному розчині, який містить 0,25мМ Трис-НСІ, 1мМ ЕДТА, 2мМ [3-меркаптоетанол, 0,2мМ PMSF, 0,02% NaN3,2% Тритон Х-100 Після КОЖНОГО З 3-Х досліджуємих інтервалів, виявляють КІЛЬКІСНИЙ вміст глікопротешу в тканині структур головного мозку, здійснюючи виміри з точністю до 1,000 ± 0,001 мкг/мг При ОЦІНЦІ даних дослідження порівнюють КІЛЬКІСТЬ означеного глікопротешу, виявлену у контрольних, навчених і ненавчених тварин Для перевірки рішення задачі та підтвердження досягнення технічного результату, що заявляються, нами було проведено експеримент (див Табл) На 3-х групах експериментальних тварин по ВІДОМІЙ методиці [9] вироблялася умовна реакція активного уникнення тварини Через 2, 24 і 72 годин, після початку навчання у тварин визначали динаміку змін концентрації глікопротешу NCAM у фронтальній корі головного мозку та підкоркових структурах (у тому числі в смугастому ТІЛІ, ядрах медіального таламусу, Варолійовому мості та ппокампі) Експресію NCAM, на різних етапах формування умовної реакції активного уникнення (УРАУ) тварин, порівнювали з величиною досліджуємого показника, у контрольній, навченій і ненавченій групах тварин (див Табл ) Наведені результати показали, що вже через 2 години після початку навчання тварин, КІЛЬКІСТЬ глікопротешу NCAM у корі головного мозку і підкоркових структурах збільшилася у 1,5 - 2,0 рази При подальшому навчанні тварин, на протязі 1 - З доби, КІЛЬКІСТЬ глікопротешу у фронтальній корі головного мозку та у смугастому ТІЛІ знизилася до рівня контролю, в той час як в медіальному таламусі його експресія зростала Отже, виявлена закономірність змін концентрації глікопротешу NCAM в різних структурах головного мозку тварини інформує про динаміку мікроструктурного забезпечення процесів формування пам'ятного сліду умовно-рефлекторної реакції активного уникнення та дає змогу оцінити про утворення нових клітинних контактів в умовах перебігу початкових етапів мнестичних реакцій Таблиця Експериментальні дані про структурно-функціональну оцінку формування умовної реакції активного уникнення тварини Фронтальна кора Смугасте тіло Мєднальний таламус NCAM, NCAMh NCAM, Ми/гканннн Мкг/ткяникн Мкг/тквдкнн Контроль 4l2r1l&± i9,6U 408,ОЙЯ±21.Я64 364.755 ±19,066 Через 2 гадини 362,546 А 4,977 365,544 ±0,152 310,411 ±11,373 Через 24 гп литій 431,817 ±23,589 472,178 ±36,675 430,838 ±35,153 Через 72 годннн 513,814±19,059 539,479 ±42,486 51\,663± 44,653 Інтервали формування У НА У 44391 Джерела інформації 1 Herrenstein, R J Method and theory in the study of avoidance Psychol Rev, 76, P 49 - 69, 1969 2 Brush, F R, Aversive Conditioning and Learning Academic Press, New York, 1971 3 Dickinson, A Contemporary Animal Learning Theory Cambridge University Press, Cambridge, 1980 4 D'Amato, M R Experimental Psychology Methodology, Pssychophysics and Learning McGraw-Hill, New York, 1970 5 Rachhn, H Behavior and Learning Freeman, Saan FranciscoCA, 1976 6 Doherty P , Fazeh M S, Walsh F S The neural cell adhesion molecule and synaptic plasticity // Neurobiol, 1995, V 26, P 437 - 446 7 Fields R D, Itoh К Neural cell adhesion molecule in activity-dependent development and synaptic plasticity // Trend Neurosci , 1996, P 567 570 8 Martin К С, Kandel E R Cell adhesion molecules, CREB, and the formation of new synaptic connection // Neuron, 1996, V 17, P 567 - 570 9 Буреш Я , Бурешова О , Хьюстон П Дж Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения - М Высшая школа, 1991, С 175-209 10 Landmesser L Synaptic plasticity fastening synapses by adhesion // Curr biol , 1997, V 628, P 286 - 292 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90