Спосіб одержання beta-лактамази

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ |3-ЛАКТАМАЗЫ путем культивирования продуцента Е.СоЄї, содержащего плазмиду pBR 322, с фагом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода Й-лактамаэы, фаг A ApQR вносят в культуруE.coPiW 3101 г е е А Ч З ^ и р 0 , причем используют фаг ^ ApQlf с множественностью от 1 до 20 фаговых корпускул на клетку. 1089119 Изобретение относится к получению белковых продуктов, например ферментов из микроорганизмов, и может быть использовано для получения биологических активных веществ, в частности фермента [ -лактамазы, І нз микроорганизмов в промышленных масштабах, а также для повышения биосинтеза продуктов рекомбинатных молекул ДНК плазмид при тестировании экспрессии последних. Известен способ получения биологически активного вещества на основе многокопийных плазмид, содержащих ген, ответственный за синтез заданного продукта. Фрагмент ДНК с генами рестриктазы и метилазы EcoR II встраивают в мультикопийный вектор, который обеспечивает как увеличение количества копий рекомбинатной плазмиды до 10, так и более эффективную экспрессию клонированных генов ферментов, причем плазмидная ДНК обеспечивает повышенный синтез фермента в 3 раза по сравнению с исходным уровнем [1J . Недостатками данного способа является то, что после процесса амплиф, сации антибиотики необходимо .1 удалять из культуральнон среды, поэтому является нетехнологичным. Наиболее близким к предлагаемому является способ получения р-лакта- * мазы, включающий выращивание культуры Е.саЄіс 600, содержащей плазмиду pBR 322 и последующее введение в эту культуру фага 71С1 857 с мутациями в генах Q и R jj-Q. Недостатком известного способа является невысокий выход фермента Р Цель изобретения - повышение выхода Р) -лактамазы. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получелия і лактамазы п у м культиви ' рования продуцента Е.со^1 содержащего плазмиду pBR 322, с фагом, фаг fl ApQ R вносят в культуру E.coEi W 3101 гее А113 ^"р° , причем используют фаг fl ApQ~R~ с множественностью от 1 до 20 фаговых корпускул на клетку. Способ осуществляют следующим образом. С помощью фага Я переключают белковый синтез с бактериальной хромосомы на геном фага и геном плазмиды. При этом в составе генома фага и в составе генома плазмиды содержится ген, отвечающий за синтез, интересующего нас продукта. Б частности используют фаг • , содержаf t щий в своем составе ген Ар, отвечающий на синтез фермента !Ь -лактамазы, разрушающего антибиотики с ji -лактамным кольцом, который по предлагаемому способу должен 10 содержаться и в геноме плазмиды. В качестве бактериальной культуры^ содержащей плазмиду pBR 322 и подвергающейся заражению фагом ' с Д Ар-агентом, используют Е co(?4W3101 15 ГЄС A 13Qup°. Используют эту культуру из-за снижения частоты рекомбинации между гомологичными последивательностями фага ft и плазмиды рВВ. 322, имеющими место в виде 20 Ар-гена. Мутация в тес А-гене это условие выполняет. 25 35 АО 45 5S Культуру E.co0