Спосіб визначення сироваткових імуноглобулінів g, a, m людини

Спосіб визначення сироваткових імуноглобулінів G, А, М, що включає приготування основи для розчинення в ній агарового гелю, змішування 3 37295 4 буфері. Змішують агар з антисироваткою (при t тільки на дистильовану воду дає можливість пра+56С). Заливають чашки Петрі сумішшю агар цювати в більш екологічно чистій обстановці, оскіантисироватка. Вирізають лунки в гелі. Вносять льки медінал, веронал відносяться до сенсибіліантиген. Відбувається імунодифузія з утворенням зуючих речовин. кілець преципітації в агаровому гелі. Відмивають. Згідно з корисною моделлю, підбір основи, на Висушують. Оцінюють преципітат. Підраховують якій готують агаровий гель здійснюється за допокількість імуноглобулінів по калібровочних графімогою тільки однієї речовини: дистильованої води ках відносно контрольної сироватки людини з віі при проведенні тесту ми отримуємо основу, на домими концентраціями імуноглобулінів G, А, М. якій готуємо агар і при внесенні в який, антисироСуттєвим в даному випадку є приготування ватки і антигену, вони дифундують і утворюють медінал - вероналового буферу (основи агарового кільця преципітації, які є такого ж діаметру якого гелю): для отримання 500мл буферу використовубули б при медінал - вероналовому буфері з рН ють - 1,38г. вероналу : 5.5 - диетилбарбітурової 8,6. кислоти, порошку погано розчинному у воді і 8,76г. Отже, визначення сироваткових імуноглобулімедіналу : 5.5 - диетилбарбітурату натрію, добре нів G, А, М ми проводимо за методом радіальної розчинному у воді. імунодифузії по Манчіні, в якій змінюємо тільки Готують його так : перший етап (основу для агарового гелю): медінал 1. Підігрівають 200мл дистильованої води і - вероналовий буфер замінюємо на дистильовану розчиняють медінал. воду. 2. Додають 200мл дистиляту. Приклад виконання на медінал - вероналово3. Висипають веронал. му буфері (найближчий аналог). Готують медінал 4. Підігрівають його до повного розчинення. вероналовий буфер (основу для агарового гелю): 5. Залишають все на добу. 1. Підігрівають 200мл дистильованої води і 6. Через 24 години доводять буфер до мітки розчиняють медінал. 500мл. 2. Додають 200мл дистиляту. 7. Отримують медінал - вероналовий буфер з 3. Висипають веронал. рН 8,6 (основу для агарового гелю). 4. Підігрівають його до повного розчинення. Власне складники буферу (основи агарового 5. Залишають все на добу. гелю) спричинили проблему: в зв'язку з зростан6. Через 24 години доводять буфер до мітки ням наркозалежних людей в Україні практично 500мл. стало неможливим отримати його інгредієнти : 7. Отримують медінал - вероналовий буфер з барбітурати (медінал і веронал). рН 8,6. Беруть дистильовану воду. Задачею корисної моделі є вдосконалення Для пояснення суті нововведення та його песпособу визначення сироваткових імуноглобулінів реваг над найближчим аналогом проведено наG, А, М шляхом введення нових інгредієнтів при ступний експеримент (лабораторне дослідження) : приготуванні буфер у - нової основи для агарового 1. Готують медінал - вероналовий буфер (осгелю, що зробить тест більш дешевшим і дозвонову для агарового гелю). лить зменшити час на його проведення. 2. Зважують 2г агар у. Отже, перед нами виникло завдання замінити 3. В вогнестійку колбу вливають 100мл медімедінал - вероналовий буфер (основу для агаронал - вероналового буферу. вого гелю) на інший, більш доступний буфер або ж 4. Ставлять колбу на водяну баню. більш екологічно чисту основу, на якій можна при5. Доводять буфер до кипіння. готувати агаровий гель : оскільки невеликі відхи6. Забирають з водяної бані. лення рН основи, на якій готують агаровий гель, 7. Додають 2г агару і розмішують. не впливають на процес імунодифузії. 8. Ставлять колбу на водяну баню до повного Поставлене завдання вирішується завдяки розчинення агару. тому, що у способі визначення сироваткових іму9. Розливають агаровий гель в пробірки Васеноглобулінів G, А, М, який включає в себе приготурмана. вання основи для розчинення в ній агарового ге11. Беруть дистильовану воду (основу для лю, змішування гелю з антисироваткою, вирізання агарового гелю). лунок в гелі, внесення антигену, проведення іму12. Розчиняють в ній агар. нодифузії з отриманням кілець преципітації в ага(Спосіб приготування медінал - вероналового ровому гелі, оцінку преципітата і підрахунок кільбуферу - основи для розчинення агару, наведено кості імуноглобулінів по калібровочних графіках, вище). відносно контрольної сироватки людини з відоми13. Розводять стандартну сировотку в 4 рази ми концентраціями трьох імуноглобулінів G, А, М ; методом „перекатки": згідно з корисною моделлю, як основу для приго- відкривають ампулу зі стандартом; тування агарового гелю використовують дисти- додають до неї 1мл фізіологічного розчину і льовану воду, в якій розчиняють агар. розчиняють; Введення нового компонента, на якому готу- беруть чотири пластмасові пробірки і підпиють агаровий гель :дистильованої води, дозволяє сують; економити кошти: дистильована вода коштує на- в пробірку №1 виливають вміст ампули зі багато дешевше, ніж медінал і веронал; зменшити стандартною сироваткою; затрати часу на приготування буферу - на дисти- в пробірки №2, №3, №4 дозатором додають ляті зразу ж можна готува ти агаровий гель; заміна по 0.5мл фізіологічного розчину; будь - якого буферу (основи для агарового гелю) 5 37295 6 - в пробірку №2 дозатором відбирають 0.5мл 39. В третю - 0.3мл антисироватки проти Ig M. розведеного стандарту з першої пробірки добре 40. В чашку Петрі (М2) виливають вміст треперемішують ; тьої пробірки і ставлять на рівну поверхню для - в пробірку №3 відбирають 0.5мл суміші з друрівномірного розподілу гелю. гої пробірки, перемішують; 41. Всі три чашки кладуть на 40хв в холодиль- в пробірку №4 відбирають 0.5мл суміші з ник. третьої пробірки, перемішують; 42. Виймають всі шість чашок з холодильника. - з четвертої пробірки відбирають 0.5мл суміші 43. В кожній чашці в агаровому гелі пробійниі виливають. ком роблять по 19 лунок. 14. Розводять антисироватки проти Ig G, IgA, 44. В чотири верхні лунки дозатором по 0.2мкл Ig M : розкапують стандартну сироватку відповідно : в - відкривають 3 ампули з антисироватками ; першу - цільну; в другу - розведену в двічі ; в тре- додають в кожну по 1мл фізіологічного розтю - в тричі; в че тверту - в чо тири рази. чину і розчиняють. 45. Беруть 15 досліджувальних сироваток хво15. Беруть три інсулінові шприци. рих. 16. В перший набирають 0.6мл антисироватки 46. В кожну з шести чашок відповідно, по черзі проти Ig G. розкапують кожну досліджувальну сироватку хво17. В другий - 0.6мл антисироватки проти IgA. рого по 0.2мкл. 18. В третій - 0.6мл антисироватки проти Ig M. 47. Всі шість чашок ставлять в вологі камери. 19. Беруть шість чашок Петрі. 48. Проводять імунодифузію одночасно на 20. Підписують відповідно: G1, A1, М1 - в ці агарах, розчинених на різних основах. чашки вносять агаровий гель, розчинений в меді49. Через добу беруть чашки Петрі з вологих нал - вероналовому буфері. камер і заливають оцтовою кислотою. 21. В чашки Петрі з написами G2, А2 , М2 50. Через 5хв зливають оцет і промивають вносять гель, приготований на дистильованій воді. чашки Петрі водою. 22. Беруть три пробірки з агаровим гелем, при51. Отримують в чашках Петрі: G1 і G2, А1 і готованому на медінал-вероналовому буфері. А2, М1 і М2 одинакові за розмірами кільця преци23. Розігрівають на водяній бані до повного пітації (див. Фіг.1, 2). розчинення. 52. Знімають прозорою лінійкою діаметр кі24. Охолоджують до +56С. лець і записують в журнал (див. табл.). 25. В першу пробірку з агаром додають 0.3мл 53. Підносять діаметр кілець преципітації до антисироватки проти Ig G. квадрату. 26. В чашку Петрі (G1) виливають вміст пер54. По трьох калібровочних кривих: відповідної шої пробірки і ставлять на рівну поверхню для для кожного імуноглобуліна, знаходять рівень рівномірного розподілу гелю. трьох сироваткових імуноглобулінів G, А, М для 27. В другу пробірку з агаровим гелем - 0.3мл кожного хворого. антисироватки проти Ig A. 55. В кінцевому підсумку отримують на двох 28. В чашку Петрі (А1) виливають вміст другої агарах, приготованих на різних основах, однаковий пробірки і ставлять на рівну поверхню. вміст сироваткових імуноглобулінів G, А, М. 29. В третю пробірку з агаровим гелем - 0.3мл Суть корисної моделі пояснюється в таблиці і антисироватки проти Ig M. на Фіг., де зображені : 30. В чашку Петрі (М1) виливають вміст тре- в табл. - кільця преципітації Ig G і Ig А, отритьої пробірки і ставлять на рівну поверхню для мані в агарових гелях, приготованих на дво х різних рівномірного розподілу гелю. основах: медінал - вероналовому буфері та на 31. Всі три чашки кладуть на 40хв в холодильдистильованій воді. ник. - на Фіг.1 - ча шка Петрі зліва : кільця преципі32. Беруть три пробірки з агаровим гелем, притації Ig G, які утворились в агарі, розчиненому на готованому на дистильованій воді. медінал - вероналовому буфері; - чашка Петрі 33. Розігрівають на водяній бані до повного справа : кільця преципітації Ig G в агаровому гелі, розчинення. приготованому на дистиляті; 34. Охолоджують розігрітий агар на медінало- на Фіг.2 - кільця преципітації Ig А, утворені в вому буфері до +56С агарових гелях, приготованих на двох основах : 35. В першу пробірку з агаром додають 0.3мл крайня, зліва чашка Петрі - з медінал - вероналоантисироватки проти Ig G. вим буфером ; крайня, справа чашка Петрі - з дис36. В чашку Петрі (G2) виливають вміст пертильованою водою. шої пробірки і ставлять на рівну поверхню для Спосіб здійснюється таким чином : заміною рівномірного розподілу гелю. медінал - вероналового буферу, на основі якого 37. В другу - 0.3мл антисироватки проти Ig A. готують агаровий гель на дистильовану воду, яка 38. В чашку Петрі (А2) виливають вміст другої дозволяє зробити дослідження екологічно чистіпробірки і ставлять на рівну поверхню. шим і безпечнішим. 7 37295 8 Таблиця Результати експерименту: кільця преципітації IgG I lgA, отримані на двох різних основах. Діаметри кілець преципітації IgG1 Порядкові номери стан- отриманих в агародартних сироваток і си- вому гелі, розчинероваток хворих ному в медінал – вероналовому буфері (мм) 1 (St) 1\2 (St) 1\4 (St) 1\8 (St) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 10.80 9.50 8.80 7.90 10.80 9.60 8.50 9.50 9.00 9.00 9.20 9.70 9.50 9.50 9.50 9.50 8.80 8.50 10.60 Комп’ютерна в ерстка А. Крижанівський Діаметри кілець Діаметри кілець преципітації Діаметри кілець преципіпреципітації IgG2, IgA1, о триманих отриманих в ага- в агаровому гелі, тації IgA2, Отриманих в агаровому гелі, розчинеровому гелі, роз- розчиненому в ному в дистильованій чиненому в дисти- медінал – вероводі (мм) льованій воді (мм) наловому буфері (мм) 10.80 8.00 8.00 9.50 7.50 7.50 8.80 6.50 6.50 7.90 5.60 5.60 10.80 8.00 8.00 9.60 7.50 7.50 8.50 6.60 6.60 9.50 8.00 8.00 9.00 5.20 5.20 9.00 8.00 8.00 9.20 5.20 5.20 9.70 7.50 7.50 9.50 7.50 7.50 9.50 8.00 8.00 9.50 8.00 8.00 9.50 8.00 8.00 8.80 5.60 5.60 8.50 7.50 7.50 10.60 6.50 6.50 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601