Спосіб морфологічного визначення стану суглоба

Спосіб морфологічного визначення стану суглоба, що передбачає виготовлення серії зрізів капсули суглобів, їх фарбування і мікроскопічне визначення показників з наступною оцінкою результатів, який відрізняється тим, що додатково в серії зрізів виявляють КІЛЬКІСТЬ судин і тканинних базофілів, розраховують їх співвідношення на одну судину, визначають індекси насичування та дегрануляцм як функціональні показники стану популяції цих клітин, при цьому по збільшенню співвідношення і/або менш виразній ЗМІНІ дисбалансу функціональних показників у ппертрофованій капсулі виявляють термінальну стадію ураження суглоба при остеоартрозі, а по зменшенню співвідношення і/або по більш виразному дисбалансу функціональних показників у вогнищах хронічного запалення чи грануляціях в склерозованій капсулі - стадію ураження суглоба при ревматоїдному артриті, з урахуванням того, що оцінку проводять відносно контрольних показників, які встановлюються по незміненій капсулі нормального суглоба Винахід відноситься до медицини, переважно до методів діагностики, що здійснюються з використанням біологічних клітин і може бути використаним для визначення патологічних відхилень стану тканин суглобів від норми В діагностичній практиці стан тканин досить часто аналізується за допомогою КІЛЬКІСНИХ діагностичних критеріїв, що характеризують ЖИТТЄДІЯЛЬНІСТЬ різних клітин, що утворюють тканини [13] Але, використання багатьох із них обмежено, здебільшого специфічністю показників Відомий спосіб мофолопчного визначення стану суглобу, що містить виділення з нього синовіальної рідини з наступною оцінкою клітинного вмісту [4] Проте, його використання стримується в зв'язку з тим, що клітинний стан вмісту синовіальної рідини може бути характерним лише для раннього періоду перебігу захворювання Найбільш приближении по технічному вирі що проводиться в термінальній стадії ураження суглобів, і фарбують надалі толуїдиновим синім фарбувачем після включення в парафін, а наступну оцінку патологічного стану зразків суглобної капсули здійснюють на підставі опису результатів мікроскопічної візуалізацм та призначення стадії ураження суглобу, у залежності від складності патологічних обставин [5] До причини, що стримує досягнення заявленого технічного результату належить відсутність визначення КІЛЬКІСНИХ показників, як критеріїв оцінки діагнозу, що спроможні надати дослідженню об'єктивний напрямок, а внаслідок цього, підвищити точність визначення стану суглоба У більшості випадків отримані результати потребують подальшого уточнення шляхом співставлення отриманих результатів з результатами альтернативних методів обстеження хворих, наприклад, рентгенологічних, радюімунолопчних тощо До основи удосконалення відомого способу визначення стану суглобу поставлена задача підвищити об'єктивність й точність оцінки шляхом визначення КІЛЬКІСНИХ І функціональних показників, що відповідають стадії ураження суглобу, при використанні Означений технічний результат досягається шенню задачі й максимальній КІЛЬКОСТІ ІСТОТНИХ ознак до об'єкта, який заявляється, є спосіб мофолопчного визначення стану суглобу, що містить вироблення серії зрізів капсули суглобів, їх фарбування і мікроскопічне визначення показників з наступною оцінкою результатів, ВІДПОВІДНО З яким, зразки капсули отримують при здійсненні оперативного втручання при ендопротезуванні, (О о 44406 тим, що у відомому способі визначення стану суглоба, що містить вироблення серії зрізів капсульним суглобів, їх фарбування і мікроскопічне визначення показників з наступною оцінкою результатів, особливість полягає в тому, що додатково в серії зрізів виявляють КІЛЬКІСТЬ судин і тканинних базофілів, розраховують їх співвідношення на 1 судину, визначають індекси насичування та дегрануляцм як функціональні показники стану популяції цих клітин, при цьому по збільшенню співвідношення і/або менш виразній ЗМІНІ дисбалансу функціональних показників у ппертрофованій капсулі виявляють термінальну стадію ураження суглоба при остеоартрозі, а по зменшенню співвідношення і/або по більш виразному дисбалансу функціональних показників у вогнищах хронічного запалення чи грануляціях в склерозованій капсулі - стадію ураження суглоба при ревматоїдному артриті, з урахуванням того, що оцінку проводять відносно контрольних показників, які встановлюються по незміненій капсулі нормального суглоба Права заявника розповсюджуються на можливість отримання даних для встановлення діагнозів, щодо термінальної стадії ураження суглобу при остеоартрозі (ОА), ревматоїдному артриті (РА) чи стану, що відбиває індивідуальну анатомічну норму, шляхом кількісної та функціональної оцінок або їх комбінацій поміж собою Причинно-наслідковий зв'язок сукупності істотних ознак, що заявляється, з очікуємим технічним результатом полягає в тому, що, по-перше, мікроскопічне виявлення КІЛЬКОСТІ судин і тканинних базофілів (ТБ) в серії зрізів дозволяє визначити їх взаємне співвідношення, як відносну одиницю виміру ступеня відхилення патологічного стану капсули суглобу від нормального, по-друге, визначення індексів насичування та дегрануляцм, як функціональних показників популяції клітин в патологічно уражених капсулах, сприяє отриманню більш ефективного відокремлювання термінальних стадій ураження суглобу при РА та ОА, що за сукупними даними дозволяє кваліфікувати їх, як відносно СТІЙКІ вимірювальні одиниці, що відбивають стан окремих зразків капсули Поряд із цим, розрахунок співвідношення КІЛЬКОСТІ ТБ на 1 судину дозволяє виключити вплив на КІЛЬКІСНИЙ вміст неконтролюємих факторів, наприклад габариту, обсягу, товщини зрізів, які здатні істотно порушувати ОЦІНОЧНІ критерії дослідження Використання пропонуємих кількіснофункціональних показників у способі діагностики надало можливість встановити закономірність виникання у ппертрофованій та склерозованій капсулах суглобу термінальної стадії при ОА та РА, здебільшого, по змінам означених співвідношень або виразливості дисбаланса індексів, з урахуванням того, що діагностична оцінка здійснюється відносно контрольних показників, які встановлюються по незміненій капсулі нормального суглобу Отже, сукупність істотних відокремлюючих ознак заявленого рішення задачі вважається суттєвою, бо має причинно-наслідковий зв'язок з технічним результатом, що заявляється Зіставлення заявленого об'єкту з прототипом 4 свідчить про те, що діагноз суглобної патології визначається не за описом результатів мікроскопічної візуалізацм аналізату і не за визначенням стадії ураження суглобу, у залежності від складності патологічних обставин, а здійснюється шляхом визначення кількісно-функціональних показників з наступним використанням останніх для оцінки результатів діагностики Вперше надана сукупність цих показників з можливістю отримання диференційованих діагностичних результатів за рахунок оцінки КІЛЬКІСНИХ, функціональних і комбінованих змін у зразках капсули, а також визначення в суглобі нормального стану, захворювання, переважно, його стадій ураження, зокрема термінальної стадії при ОА та РА, з можливістю підвищення об'єктивності й точності діагнозу у 3 4 рази Таким чином, пропозиція заявника відповідає критерію винаходу «новизна» Для підтвердження можливостей здійснення заявленого способу були досліджені фрагменти капсул тазостегнових суглобів у хворих на РА в стадії фіброзного анкілозу та ОА (ідюпатичний коксартроз) ІІ-ІІІ ступенів Зразки капсул одразу ж після відбору розміщували у розчин нейтрального 10% формаліну Після фіксації, вирізували 5 - 6 поперечних шматочків для подальшої стандартної обробки та отримання серії парафінових зрізів Після депарафінізації ці зрізи фарбували толуїдиновим синім фарбувачем для виявлення судин і ТБ (останні придбали після толуїдинового синього фарбувача метахроматичне забарвлення) На кожному зрізі при збільшуванні мікроскопу у 400 разів визначали КІЛЬКІСТЬ судин і ТБ Надалі розраховували їх КІЛЬКІСТЬ на 1 судину та наступні функціональні параметри ТБ - індекс насичування (Дн), що характеризує інтенсивність синтезу медіаторів, за формулою Д н = І ( Д Т + Т) І ( С + ДС), %[а], де, ДТ - дуже темні, Т - темні, С - СВІТЛІ, ДС - дуже СВІТЛІ клітини, - індекс дегрануляцм (Д), що характеризує активність секреції медіаторів, з формули fl = Z[(NTB 0 0) + (NTBi 1) + (NTB2 2) + (NTB3 3)] І Т К [ б ] , де, 0,1,2,3 -форми дегрануляцм (%), NTB, - КІЛЬКІСТЬ тканинних базофілів (ТБ) з даною формою секреції, 0 - не секретуючи, 1- слабо секретуючи, 2помірні, 3 - сильно секретуючи Отримані дані обробляли математично за методикою Ст'юдента У зразках капсул, що відповідали нормальному стану суглобу фізично здорових осіб, ТБ знаходили в низових структурах, їхні функціональні параметри характеризувались балансом індексів насичування та грануляції, з незначним переваженням величини індексу насичування у всіх структурно-функціональних зонах ворсинах, власно синовіальній оболонці, фіброзном'язовому шарі капсули КІЛЬКІСНІ показники знаходили простим співвідношенням кількостей ТБ і судин, з отриманням значення показника на 1 судину У зразках капсул суглобів термінальній стадії 44406 ураження PA визначали зменшену КІЛЬКІСТЬ ТБ, ЯКІ були повністю відсутніми у вогнищах склерозу, їх знаходили, переважно, в місцях хронічних запалень чи вогнищах грануляцій, що визначали у різних структурно-функціональних зонах потовщення капсул Функціональні параметри популяцій ТБ в різних шарах характерезувались при цьому виразливим дисбалансом індексів насичування та дегрануляцм А у зразках капсул, що відповідали суглобам з термінальною стадією ураження О А знаходили значне збільшення КІЛЬКОСТІ ТБ їхні функціональні параметри характеризувались ВІДМІННІСТЮ індексів насичування та дегрануляцм у пстотопографічних зонах капсули (визначених з урахуванням наявності структур функціональних зон в нативній капсулі) ппертрофованих ворсинах, власно синовіальній оболонці у стані склерозу, глибоких шарах фіброзної капсули та м'язах зовнішнього шару, без виразливих змін попередньо при обстеженні зразків незмінних капсул нормальних суглобі фізично здорових осіб жіночої статі, загиблих від травм другої локалізації (Табл №5) Заключения Остеоартроз ІІ-ІІІ ступеня, термінальна стадія ураження суглобу Хворій рекомендована операція тотального ендопротезування Приклад №2 У хворої Б Здійснювали обстеження капсули суглобу аналогічно за Прикладом №1 Надалі, при збільшенні мікроскопу у 400 разів, виявили КІЛЬКІСТЬ усіх судин (Ncyfl) і тканинних базофілів NTB, визначили співвідношення ТБ на 1 судину, а також Ь функціональні показники індекси насичування (Дн) та дегрануляцм (Д) за вище наданими формулами [а,б] Результати обчислення показників на першому, другому та третьому зрізах зрізах відбито у Табл № 6,7,8, При наступній ОЦІНЦІ результатів висновки корегували ВІДПОВІДНО до означеної вище умови, тобто по збільшенню співвідношень і/або менш виразливій ЗМІНІ дисбалансу функціональних показників у склерозованій капсулі виявляли термінальну стадію ураження суглобу при ОА, а по зменшенню співвідношень і/або по більш виразливому дисбалансу функціональних показників у вогнищах хронічного запалення чи грануляціях в ппертрофованій капсулі - стадію ураження суглобу при РА, відносно контрольних показників, котрі встановлюються по незміненій капсулі нормального суглобу Приклад №1 У хворої А в стерильних умовах взяли пункцію ураженого тазостегнового суглобу Отриманий зразок капсули взяли на стандартну обробку, а після парафінізацм виконали З зрізи, які пофарбували толуїдиновим синім фарбувачем і під мікроскопом визначили, що на зрізах були наявними власно синовіальна оболонка та ворсини стані гіпертрофії Надалі, при збільшенні мікроскопу у 400 разів, виявили КІЛЬКІСТЬ усіх суди (МСуд) і тканинних базофілів (NTB), визначили співвідношення ТБ на 1 судину, а також і функціональні показники індекси насичування (Дн) та дегрануляцм (Д) за вище наданими формулами [а,б] Результати обчислення показників на першому, другому та третьом зрізах зрізах відбито у Табл № 1,2,3, Дані обстеження звели у Табл №9 Усі дані були порівняні з контролем, що був отриманий попередньо при обстеженні зразків незмінних капсул нормальних суглобів фізично здорових осіб жіночої статі, загиблих від травм другої локалізації (Табл №5) На зрізах зразка капсули були наявними синовіальна оболонка та ворсини у стані виразливого склерозу з вогнищами хронічного запалення Заключения Ревматоїдний артрит, стадія фіброзного анкілозу (термінальна стадія ураження суглобу) Хворій рекомендована операція тотального ендопротезування тазостегневого суглобу Отже, завдяки визначенню сукупності КІЛЬКІСно-функцюнальних показників тканинних базофілів з'явилась можливість об'єктивно оцінити термінальну стадію ураження суглобів як ревматоїдним артритом, так і остеоартрозом з підвищенням точності кінцевого діагностичного результату майже у 3 - 4 рази Оцінка результатів по структурним показникам капсули, без використання тканин іншої локалізації, наприклад хряща чи епіфізів сполучених кісткових поверхонь, відкриває нові напрямки досліджень механізмів їхньої участі в розвитку суглобних патолопй, особливо при ревматоїдному артриті та остеоартрозі Таким чином, технічне рішення задачі задовольняє умові винаходу «промислова придатність» і за усіма наданими твердженнями може бути кваліфіковано винаходом України ВІДПОВІДНО Дані обстеження звели у Табл №4 Усі дані були порівняні з контролем, що був отриманий ВІДПОВІДНО Результати обчислення показників на першому зрізі Ncv fl 16 NTB 41 Ncvfl NTB 2,560 T% 5 Дт% 32 С% 16 ДС% 47 Дн 0,587 NTEo % NTEi % 92 5 NTB2 % 0 Таблиця №1 NTB3% Д 3 0,140 NTB2 % 6 Таблиця №2 NTB3% Д 32 1,206 Результати обчислення показників на другому зрізі Neva 5 NTB 51 Neva N T B 10,200 T% 29,4 Дт% 0 О /о 32,3 ДС% 38,2 Дн 0,417 NT Во % NTBi % 50 12 44406 Результати обчислення показників на третьому зрізі Neva 3 NTB 18 T% 17,2 Neva N T B 6,000 Дт% 16 ДС% 42,6 42,6 О /о Дн 0,496 NTBo % NTBi % 71,0 8,5 NTB2 % 3,0 Таблиця №3 NTB3% Д 17,5 0,668 Дані обстеження зрізів за Прикладом №1 Таблиця №4 Показники № зрізів 2 10,200 0,417 1,206 1 2,560 0,587 0,140 Співвідношення ТБ Індекс насичування Індекс дегрануляцм 3 6,000 0,496 0,668 Дані обстеження незмінених капсул нормальних суглобів Співвідношення ТБ 1,040 ±0,400 Таблиця № 5 Індекс дегрануляцм Д 1,013 ±0,244 Індекс насичування Д н 1,083 ±0,240 Результати обчислення показників на першому зрізі Ncvfl NTB Ncvfl NTB 100 52 0,520 T% 83,4 Дт% 8,22 Д С % Дн NTBo % NTBi % 4,11 4,11 11,14 84,4 10,3 О /о NTB2 % 3,4 Таблиця №6 NTB3% Д, 2,0 0,233 NTB2 % 0,0 Таблиця №7 NTB3% Д 0,0 0,000 NTB2 % 0,0 Таблиця №8 NTB3% Д 0,0 0,167 Результати обчислення показників на другому зрізі Ncvfl 25 NTB Ncvfl NTB 32 1,280 T% 0,0 Дт% 100 С% Д С % Дн 0,00 0,00 0,00 NTBo % NTBi % 100 0,0 Результати обчислення показників на третьому зрізі Ncvfl 23 NTB Ncvfl NTB 8 0,348 T% 83,33 Дт% 0,0 С% 0,0 Д С % Дн 16,67 4,999 NTBo % NTBi % 83,33 16,67 Дані обстеження зрізів за Прикладом №2 Таблиця №9 Показники Співвідношення ТБ Індекс насичування (Дн) Індекс дегрануляцм (Д) № зрізів 2 1,280 0,000 0,000 1 0,520 11,14 0,233 Джерела інформації 1 Ас 1173990 Способ определения активности процесса костеобразования / Илизаров ГА , ПалиенкоЛ А , Шрейнер А А (СССР) -1985 2 Ас 1274683 Способ определения активности костеобразования / Илизаров ГА , ПалиенкоЛ А , Шрейнер А А (СССР) -1986 3 5 А с 1821742 Способ определения гепа 3 0,348 4,999 0,167 тотропного действия веществ / Палиенко Л А , Гриша Н П , Ушаков В Ф \CCCP) -1992 4 Павлова В Н Синовиальная среда суставов-М Медицина, 1990 -С 115-155 5 Дедух Н В Остеоартроз // Консервативна терапія / За ред М О Коржа -X Прапор, 1999 С 98-115 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90