Спосіб лікування та профілактики захворювань риб

Спосіб лікування та профілактики захворювань риб, який включає згодовування рибам корму, що містить пробютик, який відрізняється тим, що як пробютик використовують субалін із розрахунку 200-400 доз (2,5-5 млрд живих бактерій Bacillus subtihs B-4759) на 1 тонну корму за схемою дворазове годування протягом 2 днів - 2 дні перерви при курсі годування 6-10 днів при температурі не нижче 16°С Винахід відноситься до галузі рибного господарства і може бути використаний для лікування та профілактики захворювань риб Серед факторів, що стримують розвиток рибного господарства, не останнє місце посідають хвороби риб, які призводять до зниження рибопродукти в н ості, значних економічних збитків, погіршення якості рибної продукції Підвищені ЩІЛЬНОСТІ посадки, відсутність достатньої КІЛЬКОСТІ доброякісних кормів, а в деяких випадках ускладнення екологічної ситуації погіршує фізіологічний стан вирощуваних риб, негативно впливає на їх імунну систему, сприяє виникненню захворювань інфекційної, інвазійної, аліментарної і поліетюлопчної природи Відмічається поширення інфекційних захворювань риб, що викликані ентеропатогенними збудниками, які, в першу чергу, властиві теплокровним тваринам - Klebsiella aerogenes, Salmonella anzonae, Eschenchia coh, Clostndium perfnngens, Aeromonas sobna, Vibrio cholerae, Campylobacter sp, Proteus vulgans, mirabihs, Yersima sp , Citrobacter sp , мікоплазми підвищення рівня засвоєння нерозчинних жирних кислот лососевими Однак, антибютикотерапія при своїх безперечних плюсах має і свої мінуси - це, в першу чергу, виникнення нових штамів антибютикорезистентних мікроорганізмів, в деяких випадках стійких до декількох антибіотиків одночасно, неповне виведення продуктів розпаду хіміотерапевтичних препаратів з організму риби, зниження імунобюлопчної резистентності макроорганізму Враховуючи те, що риби, на відміну від теплокровних, мають сповільнений обмін речовин, і в більшому ступені передають людині, яка є потенційним споживачем рибної продукції, по трофічному ланцюгу різні ШКІДЛИВІ речовини, перевищення допустимої дози антибіотику в органах і м'язах риби стає дуже небезпечним і здатним викликати хворобливий стан [4, 5] Важливою проблемою у рибництві є виникнення патолопй, спричинених використанням недоброякісних комбікормів, зокрема, контамшованих мікроміцетною та дріжджовою флорою В літературі повідомляється про часте виділення з кормів мікроскопічних грибів родів Aspergillus, Penicilhum, Fusanum - потенційних продуцентів небезпечних для тварин токсинів стеригматоцистину, патуліну, охратоксину, рубратоксину, зеараленону, коєвої кислоти, здатних викликати патологічні зміни шлунково-кишкового тракту [6, 7] Встановлено, що в зразках комбікормів, які використовувались в рибних господарствах, ступінь мікозної контамінації визначався станом корму та терміном його зберігання У зразках комбікорму, що тривалий час зберігався в господарстві, при запліснявшні, КІЛЬКІСТЬ мікроміцетів значно перевершувало допустимі в рибництві норми (до 1,5 тис к у о/г) Серед виділених мікроміцетів найчас Підсилення антропогенного тиску відбивається на водних об'єктах рибогосподарського значення, викликаючи порушення рівноваги нормального мікробюценозу як у водному середовищі, так і в організмі риби, що проявляється у збільшенні питомої ваги патогенних та умовно-патогенних мікроорганізмів Традиційно для боротьби з інфекційними хворобами риб бактеріальної етіології (аеромоноз, вібріоз, йерсинюз, псевдомоноз, бактеріальний нефрит) застосовували антибіотики окситетрациклін, фуразолідон, оксолінову кислоту, сульфанідні препарати, пеніцилін-G, анізаміцин [1, 2, 3] Також відмічено, що включення антибіотиків у корм в концентрації 0,5% обумовлювало значне ю 00 ю ю 51585 тіше зустрічались Penicilhum expansum, Pemcillsum mgncanc, Penicilhum citreo-vinde, Aspergillus niger, рідше - представники роду Mucor, серед дріжджеподібних грибів - види родів Candida та Rhodotorula [8] ВІДОМІ способи лікування та профілактики захворювань риб, в яких використовують такі пробютичні препарати, як "Ascogen", який у дозі 0,62 2,5г/кг корму сприяє збільшенню темпу росту райдужної форелі, однак у концентрації 5г/кг призводить до інгібування ростових процесів [9] А також пробютик на основі Streptococcus faecium M 74, 1 грам якого містить 5 0 - 1 0 9 живих мікроорганізмів Останні продукують молочну кислоту, здатну інгібувати розвиток деяких видів бактерій, особливо Eschencnia coll та Clostndium sp Препарат також покращує засвоєння корму та темп росту і масонакопичення [10] позитивного ефекту при наявності в організмі риб та кормах деяких видів патогенної та умовнопатогенної мікрофлори, наприклад, мікроміцетів Задачею винаходу є вдосконалення способу лікування та профілактики захворювань риб Задача вирішується шляхом годування риб кормом з пробютиком субаліном, який не зашкоджує здоров'ю людини, має широкий антагоністичний спектр дії як на патогенну мікрофлору, кормів так і на патогенну мікрофлору риб, а також, при певному режимі годування, активізує процеси обміну речовин у риб, покращує їх імуно-фізюлопчний статус, сприяє підвищенню приросту маси Об'єктом досліджень були різновікові групи КЛІНІЧНО здорових та хворих риб, вирощені в умовах рибних господарств України, а саме - дволітки коропа з початковою масою 22,63 23,83г Риб утримують у басейнах об'ємом 260м3 Відомо також про позитивне використання "Лактобактерину" для вирощування молоді осетра [11] При внесенні його в корм у КІЛЬКОСТІ 0,2% на першому етапі вирощування відмічається зниження кормових затрат на 20%, підвищення ефективності використання протеїну та енергії корму на приріст риби на 19 - 2 1 % та збільшення ретенцм основних груп поживних речовин та енергії на 12 25% На другому етапі вирощування спостерігалось збільшення на 9 - 13% вмісту докозагексаєнової кислоти, рівнем якої визначається СТІЙКІСТЬ риб до екстремальних впливів Крім того, лактобактерин сприяв розвитку молочнокислих бактерій, ріст яких при використанні штучних кормів значно пригнічується Початкова ЩІЛЬНІСТЬ - до 200 тис /га В способах профілактики та лікування аліментарних захворювань молоді тихоокеанських лососей використовується кормова добавка, що містить штам бактерій Lactobacillus acidophilum [12] Введення и в комбікорм у КІЛЬКОСТІ 10% на кілограм корму різко скорочувало ВІДХІД МОЛОДІ у перші 3 дні ГОДІВЛІ, а через 10 днів зникали ознаки аліментарної патології у хворих риб Згодовування молоді згірклого корму з додаванням 10% штаму Lactobacillus acidophilum не викликало відходу риб та розвитку аліментарних патолопй Однак в вищезазначених способах використовують препарати, які не мають широкого спектру антагоністичної дії, тобто не можуть одночасно пригнічувати ріст патогенної мікрофлори риб і неякісного корму, і в ряді випадків призводять до інпбіцм процесів росту риб На цей час в медицині і ветеринарії для профілактики і лікування різноманітних проявів кишкових захворювань та корекції механізмів імунного захисту все більшого поширення набувають способи з використанням перпаратів імуномодулюючоі та імуностимулюючої дії, зокрема, пробіотиків на основі аеробних спороутворюючих бактерій роду Bacillus, в тому числі і бюспорину, який прийнято за прототип [13] У способі прототипі до корму риб додають пробютик бюспорин, який містить живі бактерії Bacillus subtihs і має широкий антибактеріальний спектр дії Годування здійснюють щоденно протягом 10 - 20 днів , 2 рази на добу Однак, зазначений спосіб потребує значної КІЛЬКОСТІ профілактичного корму, не призводить до - личинки канального сома, які утримують у лотках з садками з газ-сита № 8 Об'єм садків 0,15м3 ЩІЛЬНІСТЬ 300 екз/садок Добова доза пробіотиків 0,04мг/садок Рецепт комбікорму для риб К 111-9 (автор ЖелтовЮ О), % Борошно рибне - 9,0, борошно м'ясокісткове 1,0, борошно ячмінне - 28,0, висівки пшеничні 15,0, дріжджі гідролізні - 3,0, шрот соняшниковий 30,0, кукурудза - 10,0, пшениця - 19,0, обрат сухий - 2,0, премікс П-2-1 або П-5-1-2,0 КІЛЬКІСТЬ пробютику, необхідного для внесення розраховують згідно паспортних даних На всіх етапах застосування профілактичного комбікорму здійснюють мікробіологічний контроль Обгрунтуванням використання в запропонованому способі пробютика субаліна служить вивчення антагоністичної дії пробіотиків бюспорину та субаліну у відношенні контамшуючої мікрофлори комбікорму та риб Встановлено, що загальна КІЛЬКІСТЬ гетеротрофних бактерій в рибному комбікормі К ІІІ-9 Укр, який використовувався в дослідженнях, знаходилась на рівні 196 ± 0,18 тис м к/г при коефіцієнті варіації 19,07%, що вказує на досить рівномірний розподіл бактеріального забруднення Серед мікроміцетів домінували представники родів Penicilhum, Aspergillus, Mucor, а їх КІЛЬКІСТЬ була на рівні 5,8 ± 1,24 тис к у о /г при коефіцієнті варіації 47,84%, що свідчить про неоднорідність мікозної контамінації Чутливість мікрофлори, виділеної з рибних комбікормів, до пробіотиків бюспорину та субаліну представлена втабл 1 Таблиця 1 Чутливість мікрофлори, контамшуючої рибний комбікорм К ІІІ-9 Укр, до бюспорину та субаліну Зони затримки росту культур, мм Мікром і цети Бактерії Penicilhum Aspergillus Mucor Бюспорин 7-13 0-5 0 5-7 Субалін 9-23 10-15 10 15-20 Препарат Як видно з наведених у таблиці даних, чутливість виділених мікроміцетів до пробіотиків сильно 51585 різнилася -зони затримки росту субаліном коливалися в межах 10 - 20мм, тоді як бюспорин пригнічував розвиток лише в зоні 5 - 7мм Слід ВІДМІТИТИ, що чутливість до субаліну виявляли 100% перевірених культур, в той час як до бюспорину чутливих було 62,5% штамів, а малочутливих та нечутливих - 37,5 Чутливою до пробютиків була і виділена з комбікорму К III 9 Укр бактеріальна флора - зони затримки росту складали 9 - 23мм (субалін) та 13мм (бюспорин) В ДОСЛІДІ були використані найбільш характерні ДНК-азопозитивні штами бактерій (97159, 97160, 97160а, 97161а) Від хворих риб було виділено 36 штамів бактерій, серед яких чутливими до субаліну були 53%, малочутливими - 42% та нечутливими - лише 5% Чутливість до бюспорину була нижчою і становила 25%, 17% та 58% ВІДПОВІДНО Таким чином, як по відношенню до гетеротрофних бактерій, виділених від риб, так і до мікрофлори, виділеної з комбікормів, більш активним виявився пробютик субалін При визначенні дози препарату, необхідно для виготовлення профілактичного комбікорму, орієнтуються на число живих клітин в 1 дозі, а не на масу За даними авторів субаліну, а 1 дозі препарату не повинно бути менше 1 млрд, живих мікробів клітин Bacillus subtihs, і верхня межа даного показника може сягати 5 млрд При підвищенні титру клітин у препараті КІЛЬКІСТЬ пробіотику у профілактичному комбікормі необхідно зменшувати Так, при підвищенні КІЛЬКОСТІ активних клітин в 1 дозі препарату до 5 млрд на 1т профілактичного комбікорму необхідно зменшити дозу пробіотику з 1000 до 200, а при середньому значенні титру 2,5 млрд м к /дозу - до 400 доз При годуванні однорічок коропа профілактичним комбікормом з субаліном було встановлено, що чисельність Bacillus subtihs на епітеліальній поверхні кишок була найбільша (51,33 - 77,31 тисмк/см 2 ) при дворазовому годуванні риб експериментальним комбікормом з субаліном в КІЛЬКОСТІ 400 доз/1т корму протягом двох днів На третю добу після припинення годуванні риб профілактичним комбікормом відбувається зниження КІЛЬКОСТІ клітин препарату, отже для економічного та раціонального його використання годування риб рекомендуємо проводити за схемою дворазове годування протягом 2 днів - 2 дні перерви Досліди ПО вивченню темпу росту личинок сома при годуванні кормом з пробютиками наведені у таблицях 2, 3 Вихідна маса личинок сома у всіх варіантах досліду була однакова - 22,5мг Таблиця 2 Ріст ЛИЧИНОК канального сома за варіантами досліду Дні підрощування Варіант Умови проведенВихідна досліду ня досліду маса, 5 10 мг 1 Бюспорин 22,5 39,8 60,1 Продовження таблиці 2 2 3 Субалін Контроль 22,5 22,5 49,3 35,3 98,6 45,1 Рибоводні результати підрощування личинок за варіантами досліду представлені в таблиці З Таблиця З Рибоводні результати підрощування личинок канального сома Показники ЩІЛЬНІСТЬ посадки, екз/сад - екз/м'5 Вихідна маса, мг Кінцева маса, мг Приріст, мг - мг/добу По відношенню до контр , % Вихід, % 1 Варіант досліду 2 3 300 300 300 2000 22,5 60,1 37,6 3,8 2000 22,5 98,6 76,1 7,6 2000 22,5 45,1 22,6 2,3 165,2 330,4 100 86,4 96,7 78,3 Дані, наведені у таблицях, свідчать, що вже через 5 днів підрощування личинок сома їх маса у контролі значно відстає від маси сома у ДОСЛІДІ Так, у контролі маса сома складала 35,3мг Найбільшого значення маса личинок сягає у другому варіанті досліду, при введенні у корм пробіотику субаліну, де вона досягає 49,3мг (140% від контролю) Аналогічна залежність відмічається і через 10 днів вирощування Кращий результат отримано при здійсненні способу з використанням субаліну маса личинок канального сома складає 98,6мг Приріст по відношенню до контролю становить 330,4% Таким чином, отримані результати свідчать, що впровадження запропонованого способу лікування та профілактики захворювань риб допоможе пом'якшити вплив несприятливих екологічних факторів, попередити контамінацію рибного комбікорму патогенною та умовно-патогенною мікрофлорою та його псування, поліпшити ріст риб за рахунок активізації процесів обміну, здійснити профілактику та лікування хвороб риб аліментарної та інфекційної природи Список літератури 1 Чугалинская Л О Изыскание новых препаратов для профилактики и лечения аэромоноза рыб // Итоги научн -практ работ в ихтиопатологии -М 1997 -С 120-121 2 Kaurstad О К Oxolmic acid as chemotherapeutic aid for fish // Nor Vetermaertidsskr - 1989 101, № 2 -P 109-113 3 Kozlowski F Baolama nad zastosowaniem Furazohdonu w leczeniu posoczmcy karri // Med weter -1971 - 27, № 8 - P 460 - 464 4 Игнатьева А Д , Коваль В А Ветеринарносанитарная экспертиза рыбы, выловленной из загрязненных водоемов // Бюл Всес ин-та эксперим вет -1981 - № 4 1 -С 50-56 5 Rumney С J , Courts J T , Smith S S , Rowland I R Microbiological end-point determination of antibiotics // Microb Ecol Health and Disease 1998 -10, №1 -P 3-11 6 Малиновская Л С , Овчинникова Л П Распространенность в комбикормах грибов - потенциальных продуцентов микотоксинов // Зоогигиена и вет сан при интенсив технол в животноводстве / ВНИИ вет сан -М 1989 - С 122 -127 7 Харченко С Н , Павленко О И , Марочкин П И , Tea Э М , Семенюк А Н Антагонистическая активность бактериальной флоры кормов в отношении возбудителя диареи телят // Микробиол журн -1993 - 55, № 6 - С 50 - 56 8 Вовк Н І Мікрофлора канального сома та и зміни при патологічних процесах за умов його вирощування в тепловодних рибних господарствах // Автореф дис канд бюл наук - К 1995 - 24 с 9 Adamek Z Effects of Ascogen probiotics sup 51585 8 plementation on the growth rate of rainbow trout under conditions of intensive culture // Zivoc Vyroba 1994 -39, № 3 -P 247-253 10 Bogut I, Milakovic Z, Bukvic Z, Brkic S, Zimmer R Influence of probiotic (Streptococcus faecium M 74) on growth and content of intestinal microflora in carp // Zivoc Vyroba - 1998 - 43, № 5 - P 231 - 235 11 Киянова Е В Влияние лактобактерина на продуктивные качества стартовых осетровых комбикормов //1 Конгресс ихтиол России тез докл Астрахань, 1997 -с 329 12 Валова В Н Пути повышения жизнестойкости молоди тихоокеанских лососей при искусственном выращивании // Междунар симп по марикультуре тез докл - Краснодар-Небуг - М 1995 - С 51-52 13 Патент України № 689 МПК А61К35/74 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71