Спосіб одержання полікомпонентної вакцини проти колібактеріозу свійської птиці та асоційованих з цією інфекцією захворювань

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб одержання полікомпонентної вакцини проти колібактеріозу свійської птиці та асоційованих з цією інфекцією захворювань, що полягає у культивуванні мікроорганізмів, наприклад, Escherichia coli; Salmonella galinarum, інактивації біологічної маси, стабілізації та включення до складу імуностимулюючих компонентів, який відрізняється тим, що вакцину виготовляють на основі високовірулентних та найбільш токсигенних сероварів штамів Escherichia coli 0151 "Крим" біовар 2 та біовар 4, крім цього додатково культивують штами Salmonella pullorum, Klebsiella pneumonia, Candida albicans, Staphylococcus aureus та Staphylococcus epidermidis, причому всі штами, окрім Candida albicans, інактивують біологічною речовиною ектерицидом та витримують впродовж однієї доби, а культуру Candida aldicans та надосадкові речовини всіх мікроорганізмів знезаражують автоклавуванням, після чого до одержаних антигенів додають вегетативну та спорову форми пробіотиків - Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, антигени та пробіотики об'єднують рівними долями в один комплексний антиген.

Текст

Спосіб одержання полікомпонентної вакцини проти колібактеріозу свійської птиці та асоційованих з цією інфекцією захворювань, що полягає у культивуванні мікроорганізмів, наприклад, Escherichia coli; Salmonella galinarum, інактивації біологічної маси, стабілізації та включення до складу імуностимулюючих компонентів, який від 3 ців. Автори встановили, що при імунізації курейнесучок специфічні антитіла через яйце передаються курчатам, котрі впродовж місяця залишаються імунними до збудників паратифу та колібактеріозу. Недоліком вакцини є включення у вакцину малоімуногенного штаму кишкової палички серовару О408, трудомісткість використання вакцини дворазовими внутрішньом'язовими ін'єкціями, а також використання канцерогенної речовини формаліну для інактивації збудників при виготовленні антигенів. Наразі для лікування хворих птахів використовують антибіотики, сульфаніламідні, нітрофуранові та різні комплексні препарати, фторхінолони. Відомий препарат енроксил - енрофлоксацин, що входить в склад енроксилу, належить до групи фторхінолонів та має широкий спектр антибактеріальної дії, активний до грампозитивних та грамнегативних мікроорганізмів, в тому числі до ешеріхій, протея, сальмонелл, пастерел, стафілококів, клебсієл, псевдомонад, бордетел, кампілобактерій, корінебактерій, клостридій та мікоплазм. Але цей препарат має суттєві недоліки, невисоку ефективність, токсичність та значну вартість, забій птахів можливий через 14 діб після лікування. Все більшу увагу привертають пробіотики. для лікування діарей птахів. В Україні виробляють ветеринарний препарат Мультибактерин для лікування різного роду діарей птахів, в склад якого включені Lactobacillus acidophilus, Bacterium bifidum adolescentis та Bacillus subtilis. Але використання лише пробіотиків без проведення специфічної вакцинації не вирішує проблеми захисту поголів'я птахів. Враховуючи актуальність проблеми специфічної профілактики колібактеріозу курей, Радчук Н.А. провів дослідження імуногенезу та можливості специфічної профілактики колібактеріозу птиці на промислових птахофермах. При вакцинації формолвакциною із штамів О2 і О78 утворювався імунітет у курчат до патогенних штамів кишкових паличок інших серологічних варіантів, таких як О151, О138 та О139 [1]. Але нашими дослідженнями цей факт, почасти до О151, не підтвердився [2,3]. Відомий патент RU 2372937 «Способ получения колибактериозной анатоксин-вакцины» [4]. Детоксикацію мікроорганізмів проводили попередньо 0,2% розчином формаліну при +40,1°С упродовж 6-7 діб, потім розчином етонію упродовж 7-9 діб при 40±1°С з наступною стерилізацією при 1,0 атм. - 20 хв. Таким методом одержання анатоксину значно подовжувався термін одержання вакцини (до 13-16 діб) з контролями до 18-20 діб. Спосіб надто тривалий та громіздкий, використання хімічних детоксикаторів, один з яких є високотоксигенною та канцерогенною речовиною, є недоречним, якщо використовується автоклавування. За прототип взято патент України на корисну модель №12945 «Вакцина "ПОЛІАВІСАН" асоційована інактивована концентрована проти колібактеріозу, сальмонельозу, анаеробної ентеротоксемії птиці» [5]. До складу вакцини входять розчинні та корпускулярні антигени Е.соlі, три види Salmonella: S.enteridis, S.typhimurium, S.gallinarum; анаеробні 61155 4 мікроорганізми: Clostridium perfringens типів А та С, інактивуюча рідина формальдегід, сорбент алюмінію гідрооксид, імуномодулюючий компонент у вигляді екстракту та стабілізуючий антитоксичний розчин. До недоліків цього вакцинного препарату можна віднести відсутність у складі вакцини антигенів до збудників інфекцій, що найчастіше асоціюються з колібактеріозом, таких, наприклад, як Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Candida albicans, Klebsiella pneumonia, Для інактивації мікроорганізмів у прототипі використовують формалін, що є небажано, бо він є токсичною та канцерогенною речовиною, крім того, сам процес інактивації триває достатньо довго - 5-7 діб. Задачею корисної моделі є розширення антигенного спектра вакцини та зниження її реактогенності, посилення імуногенної дії вакцини і безпечності її для використання тваринами, а також скорочення строків інактивації мікроорганізмів, включених в склад засобу. Задача вирішується тим, що, відповідно до запропонованої корисної моделі, в живильних середовищах вирощують найбільш імуногенні серовари штамів кишкових паличок Escherichia coli 0151 "Крим " 2-го та 4-го біоварів, культури Salmonella pullorum та Salmonella galinarum, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, дріжджовий грибок Candida albicans. За виключенням Candida albicans вирощені мікроорганізми інактивують, шляхом обробки бактерицидною біологічною рідиною -Ектерицидом (офіцінальний препарат). Candida albicans інактивують автоклавуванням, після чого всі одержані антигени, а також штами нормальної мікрофлори (пробіотики) Bacillus Subtilis та Bacillus licheniformis об'єднують в рівних пропорціях в один багатокомпонентний антиген. Загальна схема запропонованого рішення передбачає відділення вирощених мікроорганізмів від живильного середовища, центрифугування з наступною роздільною детоксикацією осаду мікроорганізмів та живильного середовища окремими методами: осад обробляють ектерицидом впродовж 1 доби при +37°С, живильне середовище з вмістом екзотоксинів обробляють автоклавуванням у режимах, залежних від виду мікроорганізмів, включених в полікомпонентну вакцину. Підбір штамів та технологія обробки мікроорганізмів сприяють одержанню оптимального складу антигенів та інших складових полікомпонентної вакцини проти колібактеріозу: - високопатогенних антигенів ентероінвазивних кишкових паличок Е.соlі 0151 "Крим", біоварів 4 та 2; - антигенів Salmonella pullorum та Salmonella galinarum, - ліпополісахаридів Klebsiella pneumonia , - анатоксинів термолабільних та термостабільних токсинів грамнегативних паличок, - білкових антигенів стінок клітин поіменованих мікроорганізмів, анатоксинів та тейхоєвих кислот Staphylococcus aureus та 5 61155 - гліцеринтейхоєвих кислот Staphylococcus epidermidis. Ліпіди ектерициду в поєднанні з ліпополісахаридами Klebsiella pneumonia, мурамілдипептидами та анатоксинами Staphylococcus aureus та Staphylococcus epidermidis утворюють мурамілдипептиди, які характеризуються високою імуногенною активністю, сприяють підвищенню імунітету [6]. Для одержання анатоксинів, ліпополісахаридів, мурамілдипептидів використовується біологічна речовина на основі риб'ячого жиру з бактерицидною активністю - ектерицид. Утворення мурамілдипептидів, які мають ліпідну основу, затримуються в тканинах органів вакцинованої птиці, пролонгують імуномодулюючу активність, і, таким чином, сприяють підвищенню імунітету. Максимальний термін інактивації мікроорганізмів біологічною речовиною ектерицидом з контролями складає 2 доби. Як імуностимулятор до складу вакцини входять вегетативні та спорові форми штамів Bacillus Subtilis та Bacillus licheniformis (офіцінальний препарат Біоспорін виробництва Київського заводу бактерійних препаратів Біофарма) . Вакцину готують наступним чином: Беруть кожний окремо свіжоізольовані ентероінвазивні (ЕІЕС) штами Escherichia coli 0151 "Крим" біовар 2 та 4, штами Salmonella pullorum та Salmonella galinarum та Klebsiella pneumonia, а також грампозитивні мікроорганізми Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, вирощують у м'ясо-пептонному бульйоні або у бульйоні Хоттінгера. Культивування проводять при +37°С впродовж 18-20 годин. Бульйонні культури центрифугують при 3000-5000 об./хв. 15-20 хв. До осаду мікроорганізмів додають 10-12 мл бактерицидної біологічної рідини ектерицид (концентрація 7 10 мікробних клітин), добре струшують та поміщають в термостат при +37°С на 18-20 годин, періодично струшують. Здійснюють контроль стерильності. Надосадкову живильну рідину зливають у стерильний посуд та інактивують автоклавуванням при 1атм.(120,6°С) впродовж 30 хв. Оброблені 6 ектерицидом культури та надосадкову рідину кожної культури контролюють на стерильність. Культури грибів Candida albicans вирощують в рідкому живильному середовищі Сабуро при +37°С 18 годин. Культури разом з живильним середовищем автоклавують при 1,5 атм. (127,8°С) 30 хв., охолоджують. Контролюють стерильність. Всі антигени об'єднують в рівних об'ємах в ємкості в один полікомпонентний антиген. Контролюють стерильність та токсигенність на білих мишах. Культури Bacillus subtilis та Bacillus licheniformis із фармакопейного препарату Біоспорін вирощують в рідкому живильному середовищі при +37°С 18-20 годин, об'єднують з полікомпонентним антигеном. Термін виготовлення вакцини з контролем не більше, ніж 2 доби. Запропонована корисна модель, у порівнянні з прототипом, забезпечує суттєвий виграш у часі та у вартості одержання вакцини. Вакцину використовують для аерогенної та пероральної імунізації птахів. Вакцину можливо використовувати як мукозальну, а також для аерозольної вакцинації з використанням аерозольного генератора, наприклад, САГ-1. Одержаний антиген змішують із сухим кормом: 0,5 л антигену на 1,0 кг зерна, вигодовують птицю за 1-2 години до аерозольної імунізації. Таким чином вакцинацію проводять впродовж 14 діб, ревакцинацію - через 14 діб. Вакцину перевіряли на безпечність та імуногенну активність на двох групах білих мишей (по 10 мишей в кожній). Вакцину вводили внутрішньочеревнево по 0,5 мл кожній миші. Напруженість поствакцинального імунітету визначали в одній групі через 7 діб, у другій - через 14 діб після введення вакцини. Видимих змін внутрішніх органів не виявили. Визначення титру антитіл в сироватках крові проводили в реакції мікрооб'ємної аглютинації в полістиролових пластинках для імунологічних реакцій. Урахування реакцій проводили з використанням стереоскопічного мікроскопу МБС-1. Результати дослідження наведені в таблиці. Таблиця Рівень специфічних антитіл в сироватках крові вакцинованих білих мишей. Антигени E.coli O151 "Крим" біовар 2 Е.соlі O151 "Крим" біовар 4 Salmon.pulloum-galinarum Klebsiella pneumonia Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Candida albicans Титри антитіл в сироватках крові ( в log2 (M±m) 1-гр.(через 7 діб) 7,2±0,2 7,2±0,2 7,1±0,2 5,9±0,3 5,8±0,3 5,8±0,3 5,4±0,5 Таким чином, запропонована корисною моделлю полікомпонентна вакцина не токсигенна, має властивість утворювати антитіла до кожного антигену включеного у вакцину. Приготування вакцини не є трудомістким та дорогим. 2-rp. (через 14 діб) 9,5±0,3 9,5±0,3 9,2±0,3 6,5±0,2 7,4±0,5 7,4±0,5 6,0±0,2 Джерела інформації: 1. Радчук Н.А. Колибактериоз птиц. Ленинград В.О «Агропромиздат». Ленинградское отделение, 1990. - С.70 2. Патент на корисну модель №46088 "Штам ентероінвазивної кишкової палички Escherichia coli 7 61155 O151 "Крим" біовар 4 (ЕІЕС) №808 для одержання профілактичної вакцини". 3.Патент на корисну модель №43125 "Штам ентероінвазивної кишкової палички Escherichia coli O151 "Крим" біовар 2 (ЕІЕС) №818 для одержання діагностичної сироватки". 4. Патент RU 2372937 Способ получения колибактериозной анатоксин-вакцины. 5. Деклараційний патент UA 12945 Вакцина "Поліавісан " асоційована інактивована концент Комп’ютерна верстка М. Ломалова 8 рована проти колібактеріозу, сальмонельозу, анаеробної ентеротоксемії птиці. 6. Елушанова Ф.Н., Шендеров Б.А.. Взаимоотношение пробиотических и патогенных лактобацилл хозяина в условиях совместного культивирования in vitro. Журн. микробиол., 2005. - №2. С.56-61. 7. Горгиев Т.Б. Авт. свид. на изобр. №118269 (18.03.1959) Способ стерилизации аутовакцины бактерицидным раствором. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for producing polyvaccine against colibacteriosis of fowl and associated diseases

Автори англійською

Savchenko Borys Ivanovych, Partyha Volodymyr Ivanovych, Hryhorasheva Iryna Mykolaivna

Назва патенту російською

Способ получения поликомпонентной вакцины против колибактериоза домашней птицы и ассоциированных с этой инфекцией заболеваний

Автори російською

Савченко Борис Иванович, Партига Владимир Иванович, Григорашева Ирина Николаевна

МПК / Мітки

МПК: A61K 39/02, A61K 36/00

Мітки: полікомпонентної, одержання, цією, вакцини, інфекцією, асоційованих, птиці, свійської, колібактеріозу, захворювань, спосіб

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/4-61155-sposib-oderzhannya-polikomponentno-vakcini-proti-kolibakteriozu-svijjsko-ptici-ta-asocijjovanikh-z-ciehyu-infekciehyu-zakhvoryuvan.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб одержання полікомпонентної вакцини проти колібактеріозу свійської птиці та асоційованих з цією інфекцією захворювань</a>

Подібні патенти