Штам бактерій рsеudомоnаs wіеrіngае – процент екзоцелюлярного полісахариду

СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИН (5U4 С 12 N 1/2Q//CC 12 N 1 / 2 0 , С 1.2 R 1:38) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ ПРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4223886/31-13 I (22) 02.03.87 (45) 30.01.89. Бюл. К 4 * (71) Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного (72) Р.И. Гвоздяк, Л.М. Яковлева, Г.М. Здоровенно, И.Я. Захарова, Л,В, Воронкова и Н.И. Клинкова (53) 576.8.075.3(088.8) (56) Микробиологический журнал, 1979, т. 41, № 4, с. 330-339. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS WIERINGAE - ПРОДУЦЕНТ ЭК30ЦЕЯПКШЯРН0Г0 ПОЛИСАХАРИДА (57) Изобретение относится к микробиологии, а именно к диагностике фитопатогенов. Целью изобретения является получение нового штамма P.wieringae, продуцирующего экзоцеллюлярный О-антигенный полисахарид. Штамм Pseudomonas wieringae депонирован в коллекции Всесоюзного научноисследовательского института защиты растений (ВИЗР) под номером 2062. Использование экзоцеллюлярного полисахарида позволяет получать диагностические сыворотки ко всем 9 серогруппам P. Syringae, 1 табл. 1 Клетки прямые, полиморфные, палочИзобретение относится к микробиоки размером 1,0-2,9 х 0,3-0,6 мк, логии, а именно к диагностике фиторасположенные одиночно, парами, патогенов. группами, короткими цепочками. Го Цель изобретения - получение новоГраму не красятся, подвижные, с пого штамма Pseudomonas wieringae, лярным расположением жгутиков, Спор продуцирующего экзоцеллюлярный 0-ан* не образуют. тигенный полисахарид. Отношение к кислороду: аэроб. Штамм Pseudomonas wieringae 7923 На картофельном агаре (КА) коловыделен из сахарной свеклы, пораненной сосудисто-паренхиматозным забо- 10 нии диаметром до 6 мм, беловато-серые, блестящие, слабо зернистые, со леванием. На протяжении всего периослегка конусовидно приподнятым центда хранения на картофельном агаре при комнатной температуре штамм старом и слабо волнистым краем. Б пробилен по своим основным признакам. ходящем свете колонии полупрозрачные, 15 уплотненный центр постепенно переходит в прозрачный как бы ямчатый край. Штамм Pseudomonas wieringae 7923 хранится в коллекции Всесоюзного наПри росте на мясопептонном агаре учно-исследовательского института (МПА) и агаризованной среде Хоттинзащиты растений (ВИЗР) под регистра20 гера образует колонии диаметром до ционным номером 2062. 4 мм, кремовато-серые, во многом Штамм ВИЗР № 2062 характеризуется сходные с ростом колоний на КА, отследующими культурально-морфологиличающиеся менее выраженной конусо-І ческими признаками. 00 1454847 видностью центра и более слабой волв течение 20 ч. ЭОПС получают из сунистостью края, пернатанта смыва клеток с твердой В мясопептонном бульоне (МПБ) питательной среды. Выход ЭОПС состави на среде Кинг Б растет с образоваляет 4-5% от сухого веса клеток бакнием желто-зеленого флуоресцирующего терий, пигмента. Образование пигмента отВ ЭОПС обнаружено 56% углеводов, сутствует на среде Кинг А, менее 1% белка и отсутствуют примеси Оптимальная температура роста 26нуклеиновых кислот. Углеводный кома 28 С. то понент состоит из галактозы, рамноШтамм ферментирует с образованием зы, глюкозамина. Препарат обладает кислоты глюкозу, сахарозу, ксилозу, высокой серологической активностью арабинозу, маннозу, маннит, сорбит, (с гомологичной 0-сывороткой титр в инозит, глицерин. Не использует лакреакциях кольцепреципитации 1 : тозу, мальтозу, рамнозу, дульцит, 15 :100000, гемагглютинации 1:1280 при адонит, салицин, В качестве источнииммуноэлектрофорезе обладает катодка углерода может использовать также ной подвижностью, сыворотка, полуо(-аланин, аргинин, глютамин, гистиченная к экзоцеллюлярному полисахадин, яблочную и винную кислоты. риду, агглютинирует гомологичную Способен расти на минеральных культуру в разведении 1:12800 2 0 средах. Не нуждается в витаминах и 1:51200). других дополнительных факторах роста. Экзоцеллюлярный О-антигенный поШтамм не продуцирует оксидазу и * лисахарид стабилен при длительном аргининдигидролазу, Каталазо-положихранении (10 лет). телен. 25 ЭОПС используют в качестве антигеЛакмусовое молоко не редуцирует, на для получения сыворотки путем имне образует индола и сероводорода. мунизации им кролей. Нитраты не редуцирует. Молоко послойП р и м е р 2. Сыворотку, полуно пептонизирует, желатин разжиж*ает. ченную от кролей, иммунизированных При искусственном заражении штамм 30 ЭОПС, используют в реакции агглютипатогенен для огурцов, пшеницы, гонации на стекле и в пробирках для роха , фасоли, суданской травы, лука, идентификации фитопатогенов. сои, кормовых бобов, столовой и корДанные идентификации фитопатогемовой свеклы, зеленых плодов груш. нов представлены в таблице. Бактерии вызывают реакцию сверхчув35 Таким образом, сыворотки, полученствительности на табаке. ные при иммунизации кролей экзоцеллюШтамм хорошо сохраняется на КА лярным О-антигенным полисахаридом и МПА под слоем вазелинового масла Pseudomonas wieringae ВИЗР К8 2062, и без такового при комнатной темпеявляются специфичными для всех фиторатуре,, а также в лиофильно высушен40 патогенов вида P. Syringae. ном сое тоянии. П р и м е р 1. Получение и харакФ о р м у л а и з о б р е т е н и я теристика ЭОПС. Для получения экзоцеллюлярного Штамм бактерий Pseudomonas wieО-антигенного полисахарида (ЭОПС) 45 ringae ВИЗР № 20G2 - продуцент экзоштамм ВИЗР Pseudomonas wieringae^ целлюлярного полисахарида. В 2062 выращивают на КА при 26-28 С " 1454847 Вид штамма Количество исследованных штаммов Фитопатогенные псевдомонады 9 серогрупп P. syringae 277 Идентифицироианы как фитояатогены, 97,8 Фитопатогенные псевдомонады Р. сichorii, P. solanacearum, P. gladioli, P. fluoroviolaceus Нефитопатогенные псевдомонады '5 видов Бактерии рода Erwinia, Bacillus, Xanthoraonas, Cprynebacterium, Klebsiella 70 10 (относятся к условно патогенным) 101 Редактор Н. Киштулинец Составитель А.Федоров Техред М.Ходанич Корректор С.Шекмар Заказ 7411/30 Тираж 500 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4