Штам гетероталічного гриба вlакеslеа тrіsроrа продуцент б – каротину

Изобретение относится к медицине, сельскому хозяйству и пищевой промышленности. Цель изобретения селекция (+) и (-) форм высокоактивного штамма-продуцента | -каротина. Ь Исходным штаммом служил штамм (+64) и (-490) Blakeslea trispora. Для проведения селекционной работы использовали метод последовательного мутагенеза на реплицирующейся ДНК, где в качестве мутагенного фактора применен нитрозогуанилин в концентрации • 500 мкг/мл при выживаемости 0,020,1% для К 1 + , и комбинированное действие УФ-облучения (выживаемость 57%) и нитрозогуанидина в указанной выше концентрации. 1 табл. 1 Изобретение относится к медицине, сельскому хозяйству и пищевой промышленности. Цель изобретения - селекция (+) и (-) форм высокоактивного штаммапродуцента р-каротина. Исходным штаммом служил (+64) и (-490) Blakeslea trispora. Для проведения селекционной работы использовали метод последовательного мутагенеза на реплицирующейся ДНК, где в качестве мутагенного фактора применен нитрозогуанидин в концентрации 500 мкг/мл при f выживаемости 0,02-0,1% для K l , и комбинированное действие УФ-облучения (выживаемость 5-7%) и нитроэогуанидина в указанной выше концентрации. Селекция велась параллельно на {+) и (-) формах. Полученный штамм К1 и К1 форм на качалках в условиях лаборатории института и завода обладал активностью от 155545 ед/100 мл 16-89 культуральной жидкости 223794 ед/100 мл культуральной жидкости (к.ж.). При исследовании в условиях ферментеров цеха активность ( -кароти3 на составляла 156860 ед/100 мл к.ж. 182880 ед/100 мл к.ж. - 191210 ед/100 мл к.ж., т.е. средняя активность составляла 177000 ед/100 мл к.ж. Штамм-прототип 8А и 8А , на котором работает производство, параллельно в условиях цеха показал среднюю активность 126000 ед/100 мл к.ж. и максимальную 166000 ед/100 мл к е ж., что на 35Z ниже активности штамма К1 4 и К Г . Штамм имеет следующую характеристику. Морфологические свойства: гифы нитевидные, часто с перетяжками или мелкими лопастными выростами, иногда переплетаются, образуя клубки. К I* "" имеет хорошо развитии-всггоГушный мице Сі СО О О U769OO лий серовато-белого, иногда желтовато-белого цвета. Бесполое спороношение только спорангиальное, представлено стилоспорангиями и споранги-ями. Стилоспорангии - 50-100 мкм в диаметре, образуются при 28°С. Спорангии - эллиптически-шаровидные 12х х16 - 10x14 мкм, трехспоровые, многочисленные. Спорангиоспоры также эл- , ;липтические 14x8 мкм, светло-табачного или табачного цвета, имеют про- ; дольную исчерченность. Для К1 характерно обилие спорообразования. К1~ воздушный мицелий оранжево-желтого 15 цвета (на сусло-агаре), разветвлен умеренно, мицелий плотный, окрашен в оранжевый цвет, окраска диффундирует в питательную среду. Культуральные свойства. Оптималь- 20 ной средой для выращивания гриба служит сусло-агар; 7-10-дневная культура физиологически наиболее активна. Гриб хорошо растет на мукоровом агаре с образованием обилия спор І Х у 2 5 же растет на МПА. На среде Чапека рост скудный со слабо развитым мицелием и слабой споруляцией. При совместном росте К1 + и К Г на чашках с сусло-агаром (на месте их контакта)эд образуется широкая полоса зигоспорообразования черного цвета, рядом широкая зона ярко-оранжевого цвета. Зигоспоры - черные, крупные, округлой формы. Образование интенсивной зоны зигоспор является отличитель35 ной чертой (маркером) предлагаемого штамма К1 + и К1~ от исходного штамма и прототипа. П р и м е р . Для глубинного выра40 щивания на колбах используют посевные ферментационные среды. Состав посевной среды.(густая), %: Мука соевая 2,3 Витамин В, 0,0002 45 Мука кукурузная А,7 КН^РО4 0,05 Вода водопро водная Остальное 6,2 рН ' 50 Среду разливают по 150 и 100 мл в качалочные колбы объемом 750 мл, стерилизуют в режиме 0,3 атм 90 мин* Засев (+) и (-) формами отдельно споров о-мицелиаль ной суспензией и .выра55 щивание 48 ч на качалках с 220240 об/мин при 28 С, После этого переносят в ферментационную среду следующего состава, %: Мука соевая Мука кукурузная 4,7 2,3 К Н?РО4 0,05 Витамин B f 0,0002 Подсолнечное масло 4 Вода водопроводная Остальное рН 6,1-6,5 до стерилизации. Среду разливают по 50 мл в качалочные колбы объемом 750 мл, стерилизуют и засевают. Соотношение (+) и (-) форм 1:10. Общее количество посевного материала составляло 20% к объему для ферментации. Выращивают на качалках при 220-240 об/мин при 28°С. Через 44 ч вводят сантохин 0,01% и р-ионон 0,1%. Процесс ферментации длится 90-96 ч, ' Активность р-каротина по 100 мл культуральной жидкости трех сравниваемых штаммов . Штамм Активность*, ед/100 мл к.ж. Штамм К\* и К Г 1 опыт 2 опыт 3 опыт 4 опыт 5 опыт 6 опыт 7 опыт Исходный (родитель) (+64) и (-490) 1 опыт 2 опыт 3 опыт 4 опыт 5 опыт 6 опыт 7 опыт Прототип 8А и 8А~ 1 опыт 2 опыт 3 опыт 4 опыт 5 опыт 6 опыт 7 опыт 155545 178541 181590 197218 199673 193794 223884 66246 44096 62300 52000 67107 88940 74230 125765 129343 104668 160118 142893 137990 166800 Таким образом, выделенный новый штамм по сравнению с прототипом об 5 U76900 6 ладает преимуществом, заключающимся ческий каротин, который составляет в повышенной способности к бносинте93-95% всех каротиноидов в получензу р-каротина. Штамм представляет ном продукте, собой новую культуру со стойкими Морфологическими признаками и свойФормула и з о б р е т е н и я ствами (на протяжении 4 лет), Использование его дает возможность поШтамм гетероталлического гриба лучать- высокоактивный микробиологиBlakeslea t r i s p o r a (ВКПМ F-373) продуцент р -каротина. Редактор Л.Павлова Составитель Н.Афанасьева Техред А.Кравчук Корректор Н.Король Заказ 641/ДСП Тираж 266 Подписное В И П Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР ВИИ 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101