Вакцина проти хвороби тешена свиней

ДЛЯ СЛУЖЕБНОГО ПОЛЬЗОВАНИЯ ЭК-3 W A 4 «3 О і О U і-О О союз советских СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК 3C5D А 6і К 39/125 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2838704/30-15 (22) 1 5 . 1 1 , 7 9 721 В.Ф. Романенко и О,Г, Прусс '71 Украинский головной научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии ' (53) 576.8.094.29(088.8) (56) 1. Patocka F. eC al., Experiences d1 irnniuniastion des perc contre la maladie de Teschen ases un vims de culture formole, Csl. Epidem Mikroviol. Immunol, 1958. 2, Mager A. B Gevebekulturimpfstof gegen die censteckende Schrveinelahmung lentralblatt fur Bakteriologil und Hygiene, Band 172, Heft 7/8, p, 465-480. (54.K57) ВАКЦИНА ПРОТИВ БОЛЕЗНИ ТЕШЕНА СВИНЕЙ, содержащая суспензию вируса в поддерживающей среде, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения иммуногенности, она в качестве вируса содержит Knterovirus suis-1 штамм "Перечеискпй-642" с активностью 10 '° - 1 0 -' Ц Д в I мл смеси поддерживающей П среды и наполнителя, причем в к а честве поддерживающей среды используют среду 199 и гидролизат лектальбумина, а в качестве наполнителя используют композицию, желатозы,, пептона и сахарозы при следующем с о о т ношении компонентов смеси» вес.%: Среда Ї99 30,0-33,0 0,5%-ный раствор гндролизата лак30,0-33,0 тал ьбумина 4,5%-ный раствор 11,0—13,0 желатозы 15%-ный раствор 12,0-14,0 пептона 15%-ный раствор 1I»0-13,0 сахарозы I 1040657 Изобретение относится к ветериI5%-ный раствор нарной вирусологии, а именно к разраї пептона 12,0-14,0 ботке средств профилактики вирусных 15%-ный раствор болезней свиней. 11,0-13,0 сахарозы В настоящее время профилактика Ниже приведен состав среды I99 энзоотического энцефамиелита (болези 0,5%-ного гидролизата лактальбуни Тешена) свиней основана на проведении общих ветеринарно-санитар— мина. ных мероприятий из-за отсуствия вак1. Среда 199 (мг в I 000 мл цин отечественного производства. раствора Зрла): L-Аргинин Известно применение с целью прохлоргидрат 70,0 филактики этой болезни вакцины, изL-Гистидин готавливаемой в Чехословакии 0 3 . хлоргидрат 20,0 Но упомянутая вакцина дорогостояL-Лизин щая и создает непродолжительный имхлоргидрат 70,0 мунитет. 40,0 L-Тирозин Известна также вакцина, содержаDL -Триптофан 20,0 щая инактнвнрованный Enterovirus DU -Фенилаланин 50,0 suis-1 штамма "Konratice" в дозе 20,0 L-Цйстин 10 ' ЦДДуя [2]. Ее получают путем 30,0 репродукции вируса в первичных клетDL -Метионин ках почки свиньи на поддерживающей 50,0 BL -Серии среде, состоящей из амниотической 60,0 DL. -Треонин жидкости крупного рогатого скота с 120,0 D Ц -Лейцин последующим добавлением разведенного DL "Изолейцин 40,0 бура-буфером гидроокиси алюминия и 50,0 В L -Валки . инактивирования формалином. DU-Глютамііновая кислота (моноОднако эта вакцина малоэффективгидрат ) 150,0 на, применяется в больших дозах и DL —Аспарагиновая обеспечивает защиту от болезни при интрацеребральном заражении 75% при60,0 кислота, витых животных. Кроме того, приникотиновая кислота сутствие в вакцине гидроокиси алю(витамин РРЯ миния создает трудности при ее ниацин ) 0,025 введении. 3)1, -Алании (альфа) 50,0 35 40,0 Цель изобретения - повышение им— L-Пролин муногенности. 10,0 U—Гидрок сипролин і Для достижения цели вакцина проГликоколл (глицин) 50,0 тив болезни Тешена свиней, содерU-Цистеин 0,1 Аденин — сульфат 10,0 жащая суспензию вируса в поддерживаю- 40 щей среде а качестве вируса содержит Гуанин — хлоргидрат Enterovirus suis-l штамм "Пере0,3 (неї) чинский—64 2" с активностью 0,3 Ксантин • 4|0 Ь 0 Ю -10 ' ГдДД в 1 мл смеси Гипоксантин 0,3 поддерживающей среды и наполнителя," Урацил 0,3 причем в качестве поддерживающей Метилурацил 0,3 среды используют среду 199 и гидроТиамин (витамин В 1 лиэат лактальбумина, а в качестве хлоргидрат 0,01 наполнителя используют композицию Ииридоксаль а л ь желатозы, пептона и сахарозы при дегид витамин В^, следующем соотношении компонентовр ПИрИДОКСИН " смеси, вес.%: 0,025 (хлоргидрат) Среда 199 0,5£-ный раствор гидролизата лактальбумина 4,5%-ный раствор желатоэы 30,0-33,0 55 30,0-33,0 11,0-13,0 Рибофлавин (витамия Bj } Витамин С (аскорбиновая кислота) Никотинамид (инацит- ?,чида) 0,01 0,05 0,025 ,1040657 Пантотенат кальИМЯ Р-Биотин Птероилглютами— новэя кислота (витамин В72 ) Холин —хлорид Инозит (ияозитол ) Парааминобензойная кислота ІПАБК) Витамин А'(.аксерофитол ) Витамин Д (кальциферол ) Витамин К, і 2-метил1 ,4-нефтохинон). Витамин Е (альфатокоферолфосфат), двунатриевая соль L-Глютатион Твин - 80 (полиоксиэтиленмоноолеатсорбитан. ) Холестерин \холистерол Ї Натрий уксуснокислый -тригидрат (3 Н201 L-Глютамин 0,01 ,0,01 5 0,01 0,50 0,05 10 0,05 0,1 0,1 15 0,01 0,01 0,05 ^Q 5,0 0,2 1 25 50,0 100,0 Аденозинтрифосфат (АТФ) — двубариевая соль 10,0 Адениловая кислота 0,2 (мышечная ) Железо азотнокислое трехвалентное ' Fe(HQ 3 ) 5 - 9Н,0 0,1 D-Рибоза ' 0,5 її-2-Дезоксирибоза 0,5 Солевой раствор Эрла содержит, мл: Раствор А 100,0 Раствор Б 100,0 Раствор фенола красного (0,,5%-ный) 10,0 Вода дистиллированная 790,0 Раствор А содержит, г в 1000 мл водьу Хлористый натрий INaCI) 68,0 Хлористый калий (КС И 4,0 Хлористый кальций безводный {,СаСІ2 ) 2,0 Сернокислый магний [M^SGv 7H 2 0) 2,0 Раствор Б ( в І000 мл воды ): 30 35 40 45 50 55 4 Натрий двууглекислый (бикарбонат - ЫаНС03) 22,0 Натрий фосфорнокислый одиозамещенный (NaH2PCy 2H2O> 1,4 Глюкоза 10,0 2. Гидролизат л?>.талъбумина (0,5%-ный раствор) содержит, г Гидролизат лактальбумин ферментативного 5,0 раствора Хенкса (по весу) 995,0 Раствор Хенкса содержит, мл Раствор А 50, 0 Раствор Б 50, 0 Раствор фенола красного (0,5%-ный ) 4,0 Вода дистиллированная 896 ,0 Раствор А содержит, г в 1000 мл воды: Хлористый натрий (NaCl) 160,0 Хлористый калий (КС1) 8,0 Хлористый кальций безводный (CaVAz } 2,8 Сернокислый магний (М^504- 7Н 2 0) 4,0 Раствор Б, г в 1000 мл воды: Натрий двууглекислый , (NaHCO3) '7,0 Фосфат натрия двутамещенного (Na z HP0 4 2H 2 0) 1 ,2 Глюкоза 20,0 Вакцина, основу которой составляет вакциоиный вирус Enterovirus suis-1 штамм "Перечинский-642", представляет собой лиофилизирован'ный препарат в виде порошка желтоватого цвета. Вакционный вирус накапливают в перевиваемой культуре клеток линии СПЭВ. Ростовая среда для выращивания клеток состоит из среды 199 и 0,5%—ного гидролизата лактальбумина в равных частях с добавлением, 10Zной нормальной бычьей сыворотки. Вирус инокулируют в дозе 0,8-2,5 ЦЦД ГС ид клетку, заменив при этом ростовую среду на поддерживающую, которая состоит из тех же ко^онен— тов, что и ростовая среда, но без бычьей сыворотки. Репродукцию вируса осуществляют в термостате при температуре +37+0,5* в течение 16-20 v. 5 1040657 После дегенерации клеток вирусПептон 15 2-нои содержашую суспензию замораживают концентрации на при температуре - 25-30°С с последуюдистиллированной 13,0 щим оттаиванием в термостате при воде температуре 37°іО,5 й С. Вируссодержа— 5 Сахарозу 15% коніцую культуральную жидкость центрифуцентрации на дистилгируют при 2500-3000 об/мин в течение лированной воде 12,0 30 мин. Декантат смешивают с наполниНаполнитель поедварительно телем о стерилизуют автокпавированием при Ниже приведен минимальный состав 0,7 атм 30 мин. Смешанную с наполчируссодержащей суспензии с содернителем вирупеодержащую жидкость жанием в 1 мл 10*-° -10*° ЦПДЇО расфасовывают во флаконы и подвервируса в поддерживающей среде, вес,%: гают лиофилизации при температуре Среда 199 30,0 37° ±Ю, ЪСС с предварительным замо0,5%-нын гидролизат раживанием при температуре лактальбумина 30,0 Наполнитель, содержащий желатозу о готовой вакцине определяют 4,5%—ной концентраинфекционный титр вируса к культуре клеток, который должен быть не ции на дистиллированниже 104'0 -Ю 4 * 5 ЦПД 4 о /мл. Вакцина 13,0 ной воде проверяется на стерильность путем Пептон \5%-лон конвысева на питательные среды (мясоцентрации на дистилпептонный бульонj мясопетонный 14,0 лированной воде 25 печеночный бульон под вазелиновым Сахарозу 15%-ной маслом, мясопептонный агар, агар концентрации на дисСабуро ). Безвредность и ареакто13,0 тиллированной воде генность вакцины испытывается Ниже приведен максимальный путем внутримышечного введения ее состав вируссодержащей суспензии с поросятам 3—3^5 месячного возраста содержанием в 1 мл 10*'° -)0 6 ' 0 ЦПД, в объеме 5 мл с последующим клинивируса в поддерживающей среде, ческим наблюдением и измерением темвес.%: пературы тела (утром и вечером) в Среда 199 33,0 течение 10 дней. Иммуногенные свой0,5%-нын гидролизат ства вакцины проверены в лабераторлактальбумина 33,0 ных опытах и в производственных Наполнитель, содерусловиях, В лабораторных опытах вакжащий: цину вводили свиньям в дозе fe Желатозу 4,5%—ной 10*'° -10 '° ЦГЩ Ч0 на голову внутриконцентрации на дисмышечно за ухом или на внутренней тиллированной воде и,о стороне бедра,в объема ),0 мл двукПептон Ї 5^-ной конратно с интервалом 14 дней. Напряцентрации на дистилженность иммунитета в условиях лированной воде 12,0 эксперимента проверяли путем комбиСахарозу 15%~ной нированного заражения свиней через концентрации на димесяц после вакцины вирулентным стиллированной воде 11,0 штаммом вируса Enterovirus suis-1 шт, "Нестеровский-975" в дозе 4S Ниже приведен средний состав ви* 0,4 1 0 ЦПД 5 с или 138680 цнтопатируссодержащей суспензии с содержаческих вирусных частиц интрацере4 0 м нием в I мл 10 ' -10 ЦПД?(Г ви. или 693400 брально и 2 4 0 4 5 Щ.Д руса в поддерживающей среде, вес.% вирусных частиц интраназально. Во Среда 199 31,5 всех опытах вакцинированные свиньи 0,5%-ньгіі гидролизат не проявляли признаков заболевания лактальбумина 31,5 в течение 45 дней после заражения Наполнитель, содержащий 5S при одновременном проявлении клиЖелатозу 4,5%-ноЙ концентрации на ники болезни Тешена и гибели на дистиллированной 8—16 суткч всех контрольных (не воде 12,0 пркэитых ) свиней.. 040657 • Экспериментальное испытание вакПродолжение цины на 85 подсвинках в лабораторных опытах показало высокую ее иммуногенную активность, обеспечивающую 100%-ную защиту животных от заражения .летальной дозой вирулентного штамма вируса энзоотического К-ч им, Чапаева 100 энцефаломиелита болезни Тешена Населенные пункты Эффективность вакцины в производ4340 10 (личный сектор ) ственных условиях проверяется в неблагополучных хозяйствах по энзо— отическому энцефаломиелиту (болезни Барановский район Тешена ) свиней Митомирской области . УССР согласно разрешения Главного К-з "Украина" 20 управления ветеринарии МСХ СССР по 15 рекомендации Ученого совета ВсесоюзК-з им. 40-летия ного государственного научно-контроль Октябрьской ревоного института ветеринарных препаралюции 3500 тов МСХ СССР, Вакцинации подвергнуто 15070 свиней в трех районах области. Населенные пункты Результаты испытания эффективнос(личный сектор J 6350 ти вакцины против экзоотического энцефаломиелита (болезни Тешена ) Червоноармейский район свиней приведены в таблице 1. Често применения Коли- Резуль- 25 К-з "Завет Ильича" 290 вакцины чество таты приви- примеНаселенные пункты нения тых (личный сектор) 357 свиней вакци таблиці^ То же " " " " ны 2 1 Дзержинский район К-з км. 18 парт— съезда Редактор 113 Р. Тимонина 3 Всего: Случаев выделения больных животных не было. 15070 Согласно актам производственной проверки вакцина при применении ее в. неблагополучных хозяйствах на седьмые сутки прерывает заболевание свиней и обеспечивает 100%—ную з а щиту привитых животных от заболевания болезнью Тешена до 1,5 л е т . Составитель А. Макаров Техред Л.Марятшова КорректорВ. Заказ 3907/ДСП Тираж 450 Подписное В И П Государственного комитета СССР НИИ по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб, , д*. 4/5 Филиал П П "Патент", П г. Ужгород, ул. Шоектная, 4 Синицкая