Тест-система для одночасного виявлення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини першого та другого типів (віл 1/2) та анти-віл антитіл “dia-hiv 1/2-ag /ab-biotin”

Реферат: Тест-система для одночасного виявлення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини першого та другого типів (ВІЛ ½) та анти-ВІЛ антитіл "DIA-HIV Vi-Ag/Ab-biotin" належить до біотехнології, імунохімії та медицини. UA 72004 U (12) UA 72004 U UA 72004 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для посилення чутливості імуноферментних тест-систем для одночасного виявлення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини першого та другого типів (ВІЛ 1/2) та анти-ВІЛ антитіл при скринінговому обстеженні зразків сироваток або плазми крові людини на наявність антитіл проти вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ) і структурного білка р24 ВІЛ. Відома тест-система для виявлення антигену р24 ВІЛ і антитіл проти нього у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці ВІЛ-інфекції і СНІДу [1]. В основі тест-системи лежать моноклональні антитіла проти р24 ВІЛ і рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів ВІЛ, використані в складі Імуносорбенту, а як кон'югат застосовані біотинільовані моноклональні анти-ВІЛ-антитіла та стрептавідин, зв'язаний з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для одночасного виявлення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини першого та другого типів (ВІЛ 1/2) та анти-ВІЛ антитіл. Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованими моноклональними антитілами проти антигену р24 ВІЛ-1 та рекомбінантними поліпептидами аналогами-антигенів р36 ВІЛ-2, gp41 та gp120 ВІЛ-1. До складу кон'югату застосовують біотинільовані моноклональні антитіла до інших епітопів р24 ВІЛ і рекомбінантні поліпептиди – аналоги антигенів ВІЛ-1 і ВІЛ-2, а також стрептавідин, зв'язаний з пероксидазою. Ферментативну реакцію визначають за допомогою субстратного однокомпонентного розчину з хромогеном. За одну постановку (2 години) можна проаналізувати 91 сироватку. Приклад 1. Визначення наявності антигену р24 ВІЛ та анти-ВІЛ антитіл в сироватці крові хворої С, 1993 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбента з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти р24 ВІЛ-1 та рекомбінантними поліпептидами аналогами-антигенів gp41 і gpl20 ВІЛ-1 та рЗб ВІЛ-2 вносять кон'югат - біотинільовані моноклональні антитіла до інших епітопів р24 ВІЛ і рекомбінантні поліпептиди аналоги-антигенів ВІЛ-1 і ВІЛ-2, а потім досліджуваний матеріал сироватку крові від хворої для визначення наявності ВІЛ-інфекції та контрольні зразки (2 позитивних і 3 негативних). Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі 37 C протягом 60 хв. Після закінчення інкубації видаляють вміст лунок за допомогою промивача або 8-канальної піпетки та промивають лунки шість разів розчином для промивання планшетів. В лунки планшета вносять по 100 мкл розчину кон'югату - стренптавідину та рекомбінантні поліпептиди ВІЛ, мічені пероксидазою, і інкубують планшет у 15 хв. при кімнатній температурі. Після закінчення інкубації промивають лунки шість разів і вносять по 100 мкл розчину проявника (однокомпонентний субстратний розчин з хромогеном) та інкубують при 18-22 C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 1 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. При ОГ більше граничного значення досліджувана проба розцінюється як позитивна. Досліджений матеріал від хворої було ідентифіковано як позитивний на наявність ВІЛінфекції зі значенням ОГ = 1,65. Результати визначення антигену р24 ВІЛ та анти-ВІЛ антитіл в сироватці хворої, отримані при застосуванні пропонованої тест-системи, порівнювали з даними, одержаними при використанні тест-системи "Genscreen Plus HIV Ag-Ab". Приклад 2. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи. Використовуючи названі тест-системи, досліджували сироватки крові (по 20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у двох повторюваностях кожною тест-системою за описаною методикою. Обидві тест-системи показали однакові результати: з 20 позитивних сироваток всі зразки виявлено як позитивні, що складає 100 % чутливості. З 100 негативних сироваток виявилися справді негативними 100 (специфічність – 100 %). Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення ВІЛ-інфекції. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. Використана Джерела інформації: 1. Инструкция по применению тест-системи "Genscreen Plus HIV Ag-Ab-kit for drtection of HIV infection in human serum/plasma by enzyme immunoassay" виробництва "Bio-Rad" (Франція) 2003, 20 с. 1 UA 72004 U 2. Михайлов А. Т., Симирский В. Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. М.: Наука, 1981. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система для одночасного виявлення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини першого та другого типів (ВІЛ ½) та анти-ВІЛ антитіл "DIA-HIV 1/2-Ag/Ab-biotin," в якій на полістироловий планшет сорбовані антитіла проти антигену р24 ВІЛ-1 та очищені ВІЛ-1 і ВІЛ-2 антигени, а як кон'югат використовують біотинільованої анти-ВІЛ-1-антитіла та стрептавідин, зв'язаний з пероксидазою, яка відрізняється тим, що імуносорбент включає моноклональні антитіла проти антигену р24 ВІЛ-1 та рекомбінантні поліпептиди - аналоги антигенів р36 ВІЛ-2, gp41 і gp120 ВІЛ-1, а кон'югати - біотинільовані моноклональні антитіла проти інших епітопів р24 ВІЛ-1 та рекомбінантні поліпептиди ВІЛ-1 і ВІЛ-2, а також стрептавідин, пов'язаний з пероксидазою, а як проявник використовується однокомпонентний субстратний буфер з хромогеном. 15 Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2