Тест-система для одноетапного виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини “dia-hiv 1/2″

Реферат: Тест-система для одноетапного виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини "DIAHIV ½" належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для серологічної діагностики ВІЛ-інфекції та СНІДу. UA 72005 U (12) UA 72005 U UA 72005 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для серологічної діагностики ВІЛ-інфекції та СНІДу. Відома тест-система для виявлення антитіл проти ВІЛ у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці ВІЛ-інфекції і СНІДу [1]. В основі тест-системи лежать рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів ВІЛ, використані як в імуносорбенті так і в складі кон'югату, які реагують з антитілами проти цього збудника. В основу корисної моделі поставлена задача створити імуноферментну тест-систему на основі злітного рекомбінантного поліпептиду Gag, до складу якого входять амінокислотні залишки білків р24, р17 і р7 та рекомбінантних білків Env gp41, gp 120 ВІЛ-1, а також р36 і gp 110 ВІЛ-2. Поставлену задачу вирішують шляхом одноетапного аналізу з використанням рекомбінантних поліпептидів ВІЛ в складі як імуносорбенту, так і кон'югату, міченого пероксидазою з подальшим виявленням цього комплексу однокомпонентним проявником тетраметилбензидином (ТМБ), що дозволяє спростити процедуру постановки аналізу. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для одноетапного аналізу антитіл до ВІЛ в сироватках крові з використанням злітного рекомбінантного поліпептиду Gag, до складу якого входять амінокислотні залишки білків р24, р17 і р7 та рекомбінантних білків Env gp41, gp 120 ВІЛ-1, а також р36 і gpl 10 ВІЛ-2 як в імуносорбенті, так і в кон'югаті, міченому пероксидазою, з подальшим виявленням цього комплексу однокомпонентним проявником тетраметилбензидином (ТМБ), що дозволяє спростити процедуру постановки аналізу. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до ВІЛ-1 в сироватці крові хворого С., 1990 року народження. Визначення проводять згідно з відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього вносять у лунки планшета з фіксованими на ньому злітним рекомбінантним поліпептидом Gag, до складу якого входять амінокислотні залишки білків р24, р17 і р7 та рекомбінантними білками Env gp41, gp 120 ВІЛ-1, а також р36 і gpl 10 ВІЛ-2, досліджуваний матеріал від хворого для визначення наявності ВІЛ-інфекції та контрольні зразки (2 позитивних і 3 негативних) в буфері з кон'югатом - сумішшю рекомбінантних поліпептидів, мічених пероксидазою. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі 37 C протягом 90 хв. Після закінчення інкубації промивають лунки вісім разів і вносять по 100 мкл розчину однокомпонентного проявника (субстратний розчин з хромогеном) та інкубують при 18-22 C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 50 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 1 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. При ОГ більше граничного значення досліджувана проба розцінюється як позитивна. Досліджений матеріал від хворого було ідентифіковано як позитивний на наявність ВІЛінфекції. Приклад 2. Визначення наявності антитіл до ВІЛ-2 в сироватці крові хворого G., 1988 року народження. Аналіз проводили аналогічно прикладу 1. Досліджений матеріал від хворого G. було Ідентифіковано як позитивний на наявність ВІЛ-інфекції. Аналіз проводили аналогічно прикладу 1. Досліджений матеріал від хворого С. було ідентифіковано як позитивний на наявність ВІЛ-Інфекції. Приклад 3. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи. Використовуючи пропоновану тест-систему і набір "Genscreen Plus HIV ½" (BioRad) [1], досліджували сироватки крові (по 20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у двох повторах кожною тест-системою за описаною методикою. Обидві тест-системи показали однакові результати: з 20 позитивних сироваток всі зразки виявлено як позитивні, що складає 100 % чутливості. З 100 негативних сироваток виявилися справді негативними 100 (специфічність - 100 %). Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення ВІЛ-інфекції. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. Джерела інформації: 1. Инструкция по применению тест-системи "Genscreen Plus HIV 1|2-kit for drtection of HIV infection in human serum/plasma by enzyme immunoassay" виробництва "BioRad" (Франція) 2005, 20 с. 2. Михайлов А. Т., Симирский В. Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. - М.: Наука, 1981. 1 UA 72005 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система для одноетапного виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини, в якій в складі імуносорбенту і кон'югату використовуються рекомбінантні поліпептиди ВІЛ, яка відрізняється тим, що для спрощення постановки реакції застосовується одноетапний аналіз антитіл до ВІЛ в сироватках крові з використанням злітного рекомбінантного поліпептиду Gag, до складу якого входять амінокислотні залишки білків р24, р17 і р7 та рекомбінантних білків Env gp41, gp 120 ВІЛ-1, а також р36 і gp 110 ВІЛ-2 як в імуносорбенті, так і в кон'югаті, міченому пероксидазою, з подальшим виявленням цього комплексу однокомпонентним проявником тетраметилбензидином (ТМБ), Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2