Імуноферментна тест-система для виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини (віл-1, віл-2, віл-0) (dia-hiv 1/2-0) модифікована

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини (ВІЛ-1, ВІЛ-2, ВІЛ-0) (DIA-HIV ½-0) в складі імуносорбенту і кон'югату використовуються рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів р17, р24, gp41, gp120 ВІЛ-1 та р36 ВІЛ-2. Для підвищення чутливості і специфічності діагностикуму до імуносорбенту і кон'югату додаються рекомбінантні білки gp110 ВІЛ-2 і злітний Env-Gag поліпептид ВІЛ-0, а також використовується однокомпонентний проявник, що дає змогу за рахунок одноетапної процедури з одночасною інкубацією сироваток і кон'югату провести імуноферментний аналіз і виявити інфікованих на ВІЛ-1, ВІЛ-2 і ВІЛ-0. UA 72419 U (12) UA 72419 U UA 72419 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для серологічної діагностики ВІЛ-інфекції та СНІДу. Відома тест-система для виявлення антитіл проти ВІЛ у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці ВІЛ-інфекції і СНІДу [1]. В основі тест-системи лежать рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів ВІЛ-1 і р 36 ВІЛ-2, використані в імуносорбенті і в складі кон'югату, які реагують з антитілами проти цього збудника. В основу корисної моделі поставлена задача створити імуноферментну тест-систему на основі нових рекомбінантних поліпептидів-аналогів ВІЛ і за рахунок цього забезпечення надійного виявлення антитіл проти ВІЛ-1, ВІЛ-2 та ВІЛ-0 і підвищення чутливості та специфічності діагностикуму. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи на основі рекомбінантних поліпептидів р17, р24, gp41 і gp120 ВІЛ-1, р36 та gp110 ВІЛ-2 і злітного Env-Gag поліпептиду ВІЛ-0 в складі як імуносорбенту так і кон'югату, за рахунок цього забезпечується надійне виявлення антитіл проти ВІЛ-1, ВІЛ-2 та ВІЛ-0 і підвищується чутливість та специфічність аналізу. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до ВІЛ-1 в сироватці крові хворої А., 1985 року народження. Визначення проводять згідно з відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього вносять у лунки планшета з фіксованими на ньому рекомбінантними поліпептидами р17, р24, gp41 і gp120 ВІЛ-1, р36 та gp110 ВІЛ-2 і злітного Env-Gag білка ВІЛ-0 досліджуваний матеріал від хворої для визначення наявності ВІЛ-інфекції та контрольні зразки (2 позитивних і 3 негативних) в буфері з кон'югатом - сумішшю рекомбінантних поліпептидів, мічених пероксидазою. Накривають планшет клейкою плівкою або кришкою та інкубують при температурі 37 °C протягом 90 хв. Після закінчення інкубації промивають лунки вісім разів і вносять по 100 мкл однокомпонентного розчину проявника та інкубують при 18-22 °C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 1 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. При ОГ більше граничного значення досліджувана проба розцінюється як позитивна. Досліджений матеріал від хворої було ідентифіковано як позитивний на наявність ВІЛінфекції. Приклад 2. Визначення наявності антитіл до ВІЛ-2 в сироватці крові хворого G., 1978 року народження. Аналіз проводили аналогічно прикладу 1. Досліджений матеріал від хворого G. було ідентифіковано як позитивний на наявність ВІЛ-інфекції. Приклад 3. Визначення наявності антитіл до ВІЛ-0 в сироватці крові хворого С., 1979 року народження. Аналіз проводили аналогічно прикладу 1. Досліджений матеріал від хворого С. було ідентифіковано як позитивний на наявність ВІЛ-інфекції. Приклад 4. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи. Використовуючи пропоновану тест-систему і набір "Genscreen Plus HIV ½" (BioRad) [1], досліджували сироватки крові (по 20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у двох повторах кожною тест-системою за описаною методикою. Обидві тест-системи показали однакові результати: з 20 позитивних сироваток всі зразки виявлено як позитивні, що складає 100 % чутливості. З 100 негативних сироваток виявилися справді негативними 100 (специфічність - 100 %). Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення ВІЛ-інфекції. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. Джерела інформації: 1. Инструкция по применению тест-системи "Genscreen Plus HIV 1/2 - kit for detection of HIV infection in human serum/plasma by enzyme immunoassay" виробництва "BioRad" (Франція) 2005, 20 с. 2. Михайлов А. Т., Симирский В. Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. - М.: Наука, 1981. 1 UA 72419 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл довірусів імунодефіциту людини (ВІЛ-1, ВІЛ-2, ВІЛ-0) (DIA-HIV ½-0), де в складі імуносорбенту і кон'югату використовуються рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів р17, р24, gp41, gp120 ВІЛ-1 та р36 ВІЛ-2, яка відрізняється тим, що для підвищення чутливості і специфічності діагностикуму до імуносорбенту і кон'югату додаються рекомбінантні білки gp110 ВІЛ-2 і злітний Env-Gag поліпептид ВІЛ-0, а також використовується однокомпонентний проявник, що дає змогу за рахунок одноетапної процедури з одночасною інкубацією сироваток і кон'югату провести імуноферментний аналіз і виявити інфікованих на ВІЛ-1, ВІЛ-2 і ВІЛ-0. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2