Тест-система для кількісного визначення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини (dia-hiv-p24-s) підвищеної чутливості

Реферат: Тест-система для кількісного визначення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини (DIA-HIVp24-S) підвищеної чутливості використовуються антитіла проти ВІЛ-1, а як кон'югат біотинільовані антитіла проти ВІЛ-1 та стрептавідин, зв'язаний з пероксидазою. В тест-системі застосовані моноклональні антитіла до різних епітопів білка р24 ВІЛ-1 як в імуносорбенті, так і в кон'югаті - біотинільованих моноклональних антитіл проти ВІЛ, комплекс АТ-АГ-АТбіотинільовані виявляється стрептавідином, зв'язаним з пероксидазою з підсиленням сигналу за рахунок введення в систему біотинтираміну. UA 72421 U (12) UA 72421 U UA 72421 U 5 10 15 20 25 30 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана в клініці для підтвердження діагнозу і моніторингу лікування ВІЛ-інфекції та СНІДу, а також для науково-дослідних робіт. В Україні розроблена і випускається тест-система для виявлення антигенів ВІЛ (DIA-HIVp24) виробництва НВК Діапроф-Мед [1]. Також існує тест-система "Elavia HIV-1Ag" виробництва "Sanofi Diagnostics Pasteur" (Франція) для детекції антигену вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-1) методом імуноферментного аналізу [2]. В цих тест-системах на полістироловий планшет сорбовані антитіла проти ВІЛ-1, а як кон'югат використовують біотинільовані антитіла проти ВІЛ1 та стрептавідин, зв'язаний з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи, що діє за принципом твердофазного імуноферментного аналізу "сандвіч" варіанта з додатковою ампліфікацією сигналу шляхом введення біотинтирамін-стрептавідинового підсилення. Поставлену задачу вирішують шляхом використання моноклональних антитіл зі специфічністю до різних епітопів білка р24 ВІЛ-1 в імуносорбенті і кон'югаті - біотинільованих моноклональних антитіл проти ВІЛ та стрептавідину, зв'язаного з пероксидазою. Ампліфікація сигналу виконується за рахунок введення в систему біотинтираміну і додатковою інкубацією з кон'югатом стрептавідину з пероксидазою. Приклад 1. Визначення р24 ВІЛ в сироватці крові хворого Д. 1990 р. народження. При внесенні в лунки планшета досліджуваних зразків сироваток інфікованої крові антиген р24 зв'язується як зі специфічними моноклональними антитілами на твердій фазі (імуносорбенті), так і з біотинільованими анти-р24 антитілами в складі кон'югату, створюючи комплекси антиген-антитіло (АТ-АГ-АТ-біотин). Після інкубуції планшета при 42 °C протягом 1 години і 6 разового відмивання лунок. Імунні комплекси виявляють за допомогою стрептавідину з пероксидазою, який вносять в лунки планшета на 15 хв. Після відмивання лунок в них додають біотинтирамін на 15 хв., а потім знову кон'югат стрептавідину з пероксидазою і інкубують ще 15 хв. Після відмивання 6 разів в лунки додають розчин проявника (однокомпонентний субстратний розчин з хромогеном) та інкубують при 18-22 °C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості антигену р24 вірусу імунодефіциту людини у сироватці. В таблиці приведені дані порівняння чутливості тест-систем за значенням співвідношення ОГ до ГЗ граничного значення ГЗ (ОГ/ГЗ). При ОГ/ГЗ > 1,0 сироватка визначається як позитивна. Таблиця Порівняння чутливості тест-систем Концентрація р24, пкг 1000 500 250 100 50 20 10 5 2,5 1 DIA-HIV-p24 ОГ/ГЗ 10,3 9,9 8,6 6,7 2,6 0,9 0,7 0,5 0,4 0,3 DIA-HIV-p24-S, ОГ/ГЗ 16,9 15,3 13,9 11,6 8,3 4,6 3,4 2,4 1,5 0,8 ElaviaHIV-1 ОГ/ГЗ 11,3 12,1 9,6 8,1 5,2 2,1 1,2 0,8 0,5 0,4 Ag, 35 40 Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення 2,5 пкг антигену р24 ВІЛ-1. Проста і надійна в роботі. Джерела інформації: 1. Горлов Ю.І., Раєвська Г.Є., Семиноженко В.П. та ін. Тест-система імунофермента для виявлення антигену р24 ВІЛ у сироватці або плазмі крові (DIA-P24-HIV). Деклараційний патент на винахід UA № 67617 А від 15.06.2004. Бюл. № 6. 2. Иструкция по применению тест-системи "Elavia HIV-l Ag-kit for detection of HIV-1 Ag by enzyme immunoassay" виробництва "Sanofi Diagnostics Pasteur" (Франція) 2002, 17 c. 1 UA 72421 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система для кількісного визначення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини (DIA-HIVp24-S) підвищеної чутливості, в якій використовуються антитіла проти ВІЛ-1, а як кон'югат біотинільовані антитіла проти ВІЛ-1 та стрептавідин, зв'язаний з пероксидазою, яка відрізняється тим, що в тест-системі застосовані моноклональні антитіла до різних епітопів білка р24 ВІЛ-1 як в імуносорбенті, так і в кон'югаті - біотинільованих моноклональних антитіл проти ВІЛ, комплекс АТ-АГ-АТ-біотинільовані виявляється стрептавідином, зв'язаним з пероксидазою з підсиленням сигналу за рахунок введення в систему біотинтираміну. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2