Тест-система для кількісного визначення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини (dia-нiv-р24-m)

Реферат: Тест-система для кількісного визначення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини (DIA-HIVp24-m) на полістироловий планшет сорбовані антитіла проти ВІЛ-1. Використовуються для сорбції на планшет і в кон'югаті, пов'язаному з біотином, моноклональні антитіла, специфічні до різних епітопів антигену р24 ВІЛ, а також стрептавідин, мічений пероксидазою та однокомпонентний субстратний буфер з хромогеном. UA 72422 U (12) UA 72422 U UA 72422 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана в клініці для підтвердження діагнозу і моніторингу лікування ВІЛ-інфекції та СНІДу, а також для науково-дослідних робіт. Існують тест-системи для детекції антигену вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-1) методом імуноферментного аналізу [1]. В цих тест-системах на полістироловий планшет сорбовані антитіла проти ВІЛ-1, а як кон'югат використовують моноклональні антитіла проти антигену р24 ВІЛ-1, мічені ферментом. В основу корисної моделі поставлена задача створити тест-систему підвищеної чутливості для кількісного визначення антигену р24 ВІЛ-1. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи, що діє за принципом твердофазного імуноферментного аналізу "сандвіч" варіанта з додатковою ампліфікацією сигналу шляхом введення біотин-стрептавідинового підсилення. Поставлена задача вирішують шляхом використання імуносорбенту з сорбованими моноклональними антитілами проти одних епітопів антигену р24 ВІЛ, кон'югату біотинільованих моноклональних антитіл проти інших епітопів ВІЛ, а також стрептавідину, зв'язаного з пероксидазою і однокомпонентного субстратного буферу з хромогеном. Приклад 1. Визначення р24 ВІЛ в сироватці крові хворого О. 1990 р. народження. Досліджувані зразки сироваток вносять в лунки полістиролового планшета, де засорбовані моноклональні антитіла проти білка р24 ВІЛ. При наявності в сироватці вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ), антиген р24 зв'язується як зі специфічними антитілами на твердій фазі, так і з біотинільованими анти-р24 антитілами в складі кон'югату, створюючи комплекси антигенантитіло (АТ-АГ-АТ-біотин). Інкубують планшет при 42 °C протягом 1 години і відмивають лунки 6 разів буфером для промивання планшетів. Імунні комплекси виявляють за допомогою стрептавідину з пероксидазою, який вносять в лунки планшета на 15 хв. Після відмивання лунок в них додають розчин однокомпонентного проявника (субстратний розчин з хромогеном) та Інкубують при 18-22 °C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості антигену р24 вірусу імунодефіциту людини у сироватці. В сироватці хворого О. було виявлено білок р24 ВІЛ в концентрації 50 пкг/мл, що свідчить про інфікованість людини. Для моніторингу лікування хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД необхідно визначати наявність ВІЛ в сироватках крові. Для цього частіше використовують полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР), але цей метод дуже дорогий і не всі лікарські заклади мають таке обладнання. Тому використання імуноферментного методу для кількісного визначення антигену р24 ВІЛ дає змогу швидко і недорого контролювати хід лікування по зниженню кількості білка р24 ВІЛ в сироватці крові хворого. Приклад 2. Визначення проводили аналогічно прикладу 1. Порівняльні результати наведені в таблиці. Таблиця Порівняння кількості білка р24 ВІЛ в сироватці хворого до і після лікування протягом 2 місяців Дата аналізу 10.02.2011 25.02.2011 10.03.2011 25.03.2011 45 50 Кількість білка р24 ВІЛ, пкг/мл 500 250 100 20 Примітка Початок лікування Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення до 5 пкг антигену р24 ВІЛ-1. Проста і надійна в роботі. Джерела інформації: 1. Горлов Ю.І., Раєвська Г.Є., Семиноженко В.П. та ін. Тест-система імунофермента для виявлення антигену р24 ВІЛ у сироватці або плазмі крові (DIA-P24-HIV). Деклараційний патент на винахід UA № 67617 А від 15.06.2004. Бюл. № 6. 2. Иструкция по применению тест-системи "Elavia HIV-1Ag-kit for detection of HIV-1 Ag by enzyme immunoassay" виробництва "Sanofi Diagnostics Pasteur" (Франція) 2002, 17 с. 1 UA 72422 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Тест-система для кількісного визначення антигену р24 вірусу імунодефіциту людини (DIA-HIVp24-m), де на полістироловий планшет сорбовані антитіла проти ВІЛ-1, яка відрізняється тим, що використовуються для сорбції на планшет і в кон'югаті, пов'язаному з біотином, моноклональні антитіла, специфічні до різних епітопів антигену р24 ВІЛ, а також стрептавідин, мічений пероксидазою та однокомпонентний субстратний буфер з хромогеном. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2