Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу igm до збудника токсоплазмозу людини (toxoplasma gondii) уніфікована “dia-toxo-igm-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до збудника токсоплазмозу людини (Toxoplasma gondii) уніфікована "DIA-TOXO-IgM-u", в якій антигени збудника Т. gondii використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. В тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а кон'югат - антигени збудника Т. gondii, мічені пероксидазою, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 72424 U (12) UA 72424 U UA 72424 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини, і може бути використана для виявлення антитіл класу IgM до збудника токсоплазмозу в сироватці або плазмі крові людини з метою визначення активного перебігу інфекції - вперше набутої або її рецидиву. Токсоплазмоз - протозойне захворювання, збудником якого є облігатний внутріклітинний паразит Toxoplasma gondii. Зараження токсоплазмозом відбувається при вживанні в їжу термічно недостатньо оброблених м'ясопродуктів, уражених цистами токсоплазм. Можлива також трансплантаційна передача токсоплазм - при трансплантації органів інфікованих донорів, і конгенітальна - при внутрішньоутробному зараженні плоду від матері через плаценту. В переважній більшості випадків набутий токсоплазмоз протікає в латентній або хронічній формі. Латентна форма токсоплазмозу характеризується безсимптомним перебігом, що ускладнює клінічну діагностику захворювання. В теперішній час для діагностики токсоплазмозної інфекції широко застосовують метод імуноферментного аналізу для виявлення IgG і IgM специфічних антитіл. При первинному інфікуванні IgM антитіла до Т. gondii з'являються через 1-2 тижні від моменту інфікування та виявляються протягом декількох місяців. Виявлення специфічних IgM у обстежуваного є ознакою первинної інфекції або реактивації інфекційного процесу та має пряме діагностичне значення при наявності клінічних симптомів захворювання. Відома тест-система для виявлення імуноглобулінів класу М проти Т. gondii у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці токсоплазменої інфекції [1]. В основі тест-системи лежать антигени збудника Т. gondii, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. Задачею корисної моделі є створення імуноферментної тест-системи для визначення наявності антитіл класу IgM до Т. gondii в сироватці або плазмі крові людини з використанням моноклональних антитіл проти IgM людини на твердій фазі, кон'югату - антигену Т. gondii, міченого пероксидазою та однокомпонентного розчину хромогену. Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини. При внесенні в лунки планшету досліджувані зразки сироваток, при наявності в них імуноглобулінів класу М, утворюються комплекси анти-IgM-IgM. На наступному етапі IgM, специфічні саме до Т. gondii, виявляють за допомогою антигенів Т. gondii у складі пероксидазного кон'югату. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають однокомпонентний розчин проявника. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgM антитіл до Т. gondii у зразках сироваток або плазми крові. Приклад. Визначення наявності антитіл до Т. gondii в сироватці крові хворої К, 1989 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти IgM людини вносять по 90 мкл розчину для розведення сироваток і про 10 мкл досліджувані зразки і позитивний та негативний контролі. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (37±2)°С протягом 60 хв. Після закінчення інкубації промивають планшет 4 рази розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл кон'югату. Знову інкубують планшет при (37±2)°С протягом 30 хвилин. Промивають планшет 6 разів розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл однокомпонентного розчину хромогену ТМБ. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (18-25)°С в темному місці протягом 30 хвилин. Для зупинення кольорової реакції вносять в лунки по 100 мкл стоп-реагенту (в тій же послідовності внесення, що й ТМБ). Не більше як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм). Для обліку результатів розраховують середнє значення ОГ негативного контролю - НКсер і граничне значення (ГЗ) по формулі: ГЗ=НКсер+0,3. Результат аналізу вважається негативним, якщо ОГ досліджуваного зразка менше ГЗ. Результат аналізу вважається позитивним, якщо ОГ досліджуваного зразка більше ГЗ. Досліджений матеріал від хворої було ідентифіковано як позитивний на наявність токсоплазмозної інфекції. Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл класу IgM до збудника токсоплазмозу, проста і надійна в роботі. Джерела інформації:: 1. Инструкция по применению тест-системи "ВектоТоксо-IgM антитела - стрип", Новосибирск, РФ, 2010. 2. Михайлов А.Т., Симирский В.Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. - М.: Наука, 1981. 1 UA 72424 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до збудника токсоплазмозу людини (Toxoplasma gondii) уніфікована, в якій антигени збудника Т. gondii використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою, яка відрізняється тим, що в тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а кон'югат антигени збудника Т. gondii, мічені пероксидазою, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2