Тест-система імуноферментна для кількісного аналізу та визначення авідності антитіл класу igg вірусу краснухи (dia-rubella-igg-av)

Реферат: Тест-система імуноферментна для кількісного аналізу та визначення авідності антитіл класу IgG до вірусу краснухи "DIA-Rubella-IgG-av", в якій на полістироловий планшет сорбовані рекомбінантні антигени, а як кон'югат використовуються антитіла проти імуноглобулінів класу IgG людини. Використовується пероксидазний кон'югат моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини, однокомпонентний розчин хромоген та два позитивних контролів (високо- і низькотитражних), відкаліброваних відносно 1-го Міжнародного стандарту ВООЗ - Anti-Rubella immunoglobulin, Human, RUBI-1-94 (NIBSC), а для визначення індексу авідності специфічних IgG антитіл досліджувану сироватку інкубують в паралельних лунках імуносорбенту і потім один зразок промивають в звичайному режимі, а інший обробляють дисоціюючим розчином, який руйнує комплекси антигенів з низькоавідними IgG антитілами, при чому індекс авідності розраховують як відношення оптичної густини, отриманої при виявленні специфічних IgG антитіл в присутності дисоціюючого розчину, до оптичної густини, отриманої при аналізі даного зразка, не обробленого їм. UA 72423 U (12) UA 72423 U UA 72423 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для кількісного аналізу авідності антитіл класу IgG до вірусу краснухи в сироватці або плазмі крові. Для оцінки рівня захисного імунітету проти краснухи найбільш широкого розповсюдження набув метод імуноферментного аналізу. Наявність в крові специфічних IgG антитіл до вірусу краснухи є показником минулої інфекції або проведеної вакцинації. У пацієнтів з гострою інфекцією в динаміці спостерігається збільшення рівня специфічних IgG. Визначення індексу авідності специфічних IgG антитіл (міцність зв'язку специфічних антитіл з антигенними детермінантами вірусу) дозволяє диференціювати первинну інфекцію від захворювання, перенесеного в минулому. Низькоавідні IgG антитіла до вірусу краснухи з'являються на п'ятий день після появи висипу та циркулюють в організмі протягом двох місяців. Висока авідність специфічних IgG антитіл дозволяє виключити недавнє первинне інфікування. Відома тест-система для виявлення антитіл проти вірусу краснухи у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці цитомегаловірусної інфекції [1]. В основі тест-системи лежать антигени вірусу або рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів вірусу краснухи, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовують антилюдські антитіла, зв'язані з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для кількісного аналізу та визначення авідності антитіл класу IgG до вірусу краснухи в сироватці або плазмі крові. Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованими антигенами вірусу краснухи, пероксидазного кон'югата моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини, однокомпонентного розчину хромогену та двох позитивних контролів (високо- і низькотитражних), відкаліброваних відносно 1-го Міжнародного стандарту ВООЗ - Anti-Rubella immunoglobulin, Human, RUBI-1-94 (NIBSC). Для визначення індексу авідності специфічних IgG антитіл досліджувану сироватку інкубують в паралельних лунках імуносорбенту. Потім один зразок промивають в звичайному режимі, а інший обробляють дисоціюючим розчином (ДР), який руйнує комплекси антигенів з низькоавідними IgG антитілами. Антитіла, що залишились зв'язаними з антигеном, виявляють пероксидазним кон'югатом. Індекс авідності розраховують як відношення оптичної густини, отриманої при виявленні специфічних IgG антитіл в присутності ДР, до оптичної густини, отриманої при аналізі даного зразка, не обробленого ДР та виражають його в %. Приклад 1. Визначення авідності антитіл класу IgG до вірусу краснухи в сироватці крові хворої Α., 1991 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому антигенами вірусу краснухи вносять в лунки по 100 мкл попередньо розведених (1:50) сироваток та контролів. Для визначення індексу авідності специфічних IgG антитіл досліджувану сироватку інкубують в паралельних лунках імуносорбенту. Потім один зразок промивають в звичайному режимі, а інший обробляють дисоціюючим розчином (ДР), який руйнує комплекси антигенів з низькоавідними IgG антитілами. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (37±2)°С протягом 30 хв. Після закінчення інкубації промивають планшет 6 разів розчином для промивання. Антитіла, що залишились зв'язаними з антигеном, виявляють пероксидазним кон'югатом, який вносять в лунки по 100 мкл. Знову інкубують планшет при температурі (37±2)°С протягом 30 хв. Промивають лунки 6 разів розчином для промивання, вносять в них по 100 мкл однокомпонентного розчину хромогену ТМБ і інкубують при температурі (18-25)°С в темному місці протягом 30 хв. Для зупинення кольорової реакції (в тій же послідовності внесення що й ТМБ) вносять в лунки по 100 мкл стоп-реагенту. Не більше як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм). Для обліку результатів розраховують середнє значення ОГ негативного контролю - НКсер і граничне значення (ГЗ) по формулі: ГЗ = НКсер + 0,2. Результат аналізу вважається негативним, якщо ОГ досліджуваного зразка менше ГЗ. Результат аналізу вважається позитивним, якщо ОГ досліджуваного зразка більше ГЗ. Індекс авідності розраховують тільки для позитивних сироваток як відношення ОГ, отриманої при виявленні специфічних IgG антитіл в присутності ДР, до оптичної густини, отриманої при аналізі даного зразка, не обробленого ДР за формулою Індекс авідності ОГ зразка, обробленог ДР о  100% ОГ зразка, не обробленог ДР о 1 UA 72423 U 5 10 15 Якщо індекс авідності специфічних антитіл менше 30 %, сироватка містить низькоавідні антитіла. Якщо індекс авідності більше 30 %, сироватка містить високоавідні антитіла, спорідненістю до антигенів вірусу краснухи, і їх рівень в організмі стабілізується. Низькоавідні IgG антитіла до вірусу краснухи за відсутності специфічних IgM реєструються в завершальній фазі гострого періоду захворювання. В цьому випадку для підтвердження діагнозу первинної інфекції необхідно відстежувати динаміку зростання кількості специфічних IgG антитіл та зростання їх афінітету. При порушенні імунної відповіді в організмі протягом тривалого часу можуть циркулювати специфічні низькоавідні IgG антитіла без IgM. При хронічному процесі виявляються високоавідні специфічні IgG антитіла, рівень яких лишається незмінно високим. Наявність в крові високоавідних IgG антитіл до вірусу краснухи і специфічних IgM свідчить про реактивацію вірусу або про реінфекцію. Джерела інформації: 1. Инструкция по применению тест-системи "Краснуха IgG авидность". С-Пб.: Алкор-Био, 2010 р. 2. А.Т.Михайлов, В.Н.Симирский "Методы иммунохимического анализа в биологии развития". М.: "Наука", 1981. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 25 30 Тест-система імуноферментна для кількісного аналізу та визначення авідності антитіл класу IgG до вірусу краснухи, в якій на полістироловий планшет сорбовані рекомбінантні антигени, а як кон'югат використовуються антитіла проти імуноглобулінів класу IgG людини, яка відрізняється тим, що використовують пероксидазний кон'югат моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини, однокомпонентний розчин хромоген та два позитивних контролів (високо- і низькотитражних), відкаліброваних відносно 1-го Міжнародного стандарту ВООЗ - Anti-Rubella immunoglobulin, Human, RUBI-1-94 (NIBSC), а для визначення індексу авідності специфічних IgG антитіл досліджувану сироватку інкубують в паралельних лунках імуносорбенту і потім один зразок промивають в звичайному режимі, а інший обробляють дисоціюючим розчином, який руйнує комплекси антигенів з низькоавідними IgG антитілами, при чому індекс авідності розраховують як відношення оптичної густини, отриманої при виявленні специфічних IgG антитіл в присутності дисоціюючого розчину, до оптичної густини, отриманої при аналізі даного зразка, не обробленого їм. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2