Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу igm до treponema pallidum уніфікована “dia-syph-igm-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до Тгероnеmа pallidum уніфікована "DIA-SYPHa-IgM-u", в якій рекомбінантні поліпептиди - аналоги антигенів Тгероnеmа pallidum, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. В тест-системі "DIA-SYPH-IgM-u" застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а кон'югат - рекомбінантні поліпептиди Тр17 і Тр47 - аналоги антигенів збудника сифілісу Тгеропета pallidum, мічені пероксидазою, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 72425 U (12) UA 72425 U UA 72425 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класу IgM до Treponema pallidum в сироватці або плазмі крові людини для серологічної діагностики вродженого сифілісу і диференційної оцінки різних стадій цього захворювання з метою визначення активного перебігу інфекції - вперше набутої або її рецидиву. В Росії виробляється тест-система "РекомбиБест антипаллидум-IgM" (ЗАО "Вектор-Бест", Новосибірськ), в складі якої на твердій фазі сорбовані антитіла проти IgM людини; кон'югат рекомбінантний білок Т. pallidum, мічений пероксидазою, сироватки досліджуються без розведення [1]. Задачею корисної моделі є створення імуноферментної тест-системи для визначення наявності антитіл класу IgM до Т. pallidum в сироватці або плазмі крові людини з використанням моноклональних антитіл проти IgM людини на твердій фазі, кон'югату - рекомбінантних антигенів Тр17 та Тр47 Т. pallidum, мічених пероксидазою, та однокомпонентного розчину хромогену. Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини. При внесенні в лунки планшету досліджувані зразки сироваток, при наявності в них імуноглобулінів класу М, утворюються комплекси анти-IgM-IgM. На наступному етапі IgM, специфічні саме до Т. pallidum, виявляють за допомогою рекомбінантних антигенів Тр17 та Тр47 Т. pallidum у складі пероксидазного кон'югату і однокомпонентного розчину хромогену. Приклад 1. Визначення антитіл класу IgM проти Т. pallidum у сироватці крові дитини К., 2009 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього вносять в лунки планшета-імуносорбента з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти IgM людини по 90 мкл розчину для розведення сироваток та по 10 мкл досліджуваної сироватки крові дитини для виявлення в ній антитіл класу М та контрольні зразки (2 позитивних і 3 негативних). Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі 37 °C протягом 30 хв. Після закінчення інкубації видаляють вміст лунок за допомогою промивача або 8-канальної піпетки та промивають лунки чотири рази розчином для промивання планшетів. В лунки планшета вносять по 100 мкл розчину кон'югату - суміші рекомбінантних поліпептидів Тр17 та Тр47 - аналогів антигенів Т. pallidum, мічених пероксидазою, та інкубують планшет у термостаті 30 хв. при 37 °C. Після закінчення інкубації промивають лунки шість разів і вносять по 100 мкл розчину проявника (однокомпонентний розчин хромогену ТМБ) та інкубують при 18-22 °C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості антитіл у сироватці. Досліджувана сироватка дитини була ідентифіковано як позитивна на наявність антитіл класу IgM до антигенів Т. pallidum. Результати визначення антитіл класу IgM до Т. pallidum в сироватці, визначені при застосуванні тест-системи (DIA-IgM-SYPH), порівнювали з даними, отриманими при використанні тест-системи виробництва ЗАО "Вектор-Бест" (Росія). Приклад 2. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи. Використовуючи названі тест-системи, досліджували сироватки крові (по 20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у двох повторностях кожною тест-системою за описаною методикою. Усі 20 позитивних сироваток показали наявність антитіл класу IgM до Т. pallidum, що складає 100 % чутливості. З 100 негативних сироваток виявилися справді негативними всі 100 (специфічність - 100 %) у пропонованій тест-системі. В порівнюваній тест-системі з Росії з 20 достеменно позитивних сироваток 20 також були позитивними. Чутливість тест-системи становила 100 %. З 100 негативних сироваток - 1 сироватка була виявлена як хибно-позитивна. Специфічність порівняльної тест-системи становила 99 %. Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл класу IgM проти антигенів Т. pallidum в сироватках крові, при діагностиці сифілісу, проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. Джерела інформації:: 1. Инструкция по применению тест-системы "РекомбиБест антипаллидум-lgM-CTpHn" производства ЗАО "Вектор-Бест", п. Кольцово, Новосибирской обл., 2010, 3 с. 1 UA 72425 U 2. Михайлов А.Т, Симирский В.Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. - М.: Наука, 1981. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до Тгероnеmа pallidum уніфікована, в якій рекомбінантні поліпептиди - аналоги антигенів Тгероnеmа pallidum, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою, яка відрізняється тим, що в тест-системі "DIA-SYPH-IgM-u" застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а кон'югат - рекомбінантні поліпептиди Тр17 і Тр47 - аналоги антигенів збудника сифілісу Тгеропета pallidum, мічені пероксидазою, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2