Спосіб депонування міскантусу у культурі in vitro

Реферат: Спосіб депонування міскантусу у культурі in vitro включає використання рослин міскантусу в укоріненому стані, зменшення гормональних компонентів у живильному середовищі, збільшення концентрації цукрози, використання живильного середовища, отримання життєздатних бруньок. При цьому використовують модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга повного набору компонентів та додають БАП, цукрозу, ІОК при заданих параметрах культивування. UA 77119 U (54) СПОСІБ ДЕПОНУВАННЯ МІСКАНТУСУ У КУЛЬТУРІ IN VITRO UA 77119 U UA 77119 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, селекції, зокрема для збереження і депонування цінних селекційних матеріалів. В селекційному процесі важливим є вихідний матеріал, який використовують для створення форм рослин з більш цінними показниками продуктивності. Біотехнологічні методи дозволяють прискорювати процеси отримання вихідного матеріалу. Проте, деякі культури після декількох пасажів втрачають здатність до клонування і коефіцієнт розмноження знижується вдвічі та виникає потреба вводити вихідний матеріал знову. Для збереження матеріалу у культурі in vitro використовують депонування. За використанні певних умов культивування, депонування є тим способом яке забезпечує консервування та збереження вихідних генотипів протягом тривалого часу без пересаджування. Відомим і найбільш близьким до корисної моделі є метод збереження генетичного різноманіття повільно ростучих in vitro колекції цукрових і кормових буряків [Редько В.І., Роїк М.В., Недяк Т.М., Бех Н.С., Слуцька Н.П. Повільно ростучі in vitro колекції цукрових і кормових буряків як метод збереження їх генетичного різноманіття // Зб. наук, праць ІЦБ. - К.: Аграрна наука.-2008. - С. 231-234]. Даний метод базується на тому, що використовують культуральні рослини цукрових і кормових буряків, які депонують на живильному середовищі із збільшеною концентрацією осмотика - цукроза - 60 г/л. У середовищі проводять збіднення його за рахунок зменшення мінеральних і гормональних компонентів та використовують ¼ С200. Температура становить 4±1 °C при інтенсивності освітлення 500 лк. Період між пересадками бруньок цукрових і кормових буряків до 6-12 місяців. Відомий і пропонований способи депонування мають спільні ознаки: використання культуральних рослин, зменшення гормональних компонентів у живильному середовищі, збільшення концентрації цукрози, використання живильного середовища, отримання життєздатних бруньок. Проте, за використання відомого способу, депонування цукрових і кормових буряків на культуральних рослинах міскантусу виявилось не ефективним. Використання ¼ С200 та зменшення мінеральних і гормональних компонентів не дозволило отримати високий рівень рентабельності при зберіганні розсади. За даного способу не досягається період між пересадками до 6-12 місяців. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб депонування міскантусу у культурі in vitro, що дасть можливість тривалий час не проводити пересаджування матеріалу, забезпечить високий рівень рентабельності при зберіганні розсади. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі збереження генетичного різноманіття повільно ростучі in vitro колекції цукрових і кормових буряків використовують культуральні рослини цукрових і кормових буряків, які депонують на живильному середовищі із збільшеною концентрацією осмотика - сахароза - 60 г/л. Для депонування застосовують модифіковане живильне середовище за прописом Гамборга і Евелега (С 200) та беруть лише ¼ частину мінеральних і гормональних компонентів. Культивування проводять за температури 4±1 °C при інтенсивності освітлення 500 лк. Період між пересадками бруньок цукрових і кормових буряків становить від 6 до 12 місяців. Кількість новоутворених пагонів 3-5 штук. Запропонований спосіб депонування міскантусу у культурі in vitro включає використання рослин міскантусу, які висаджують на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга у яке додано цукрози - 40,0-60,0 мг/л, БАП - 0,3 мг/л та ЮК - 0,3 мг/л. Температура культивування 10±2 °C та освітлення 3000-4000 лк. Термін депонування 10-12 місяців. Кількість новоутворених пагонів 8 штук. Новими відмінними від існуючого найближчого аналога ознаками є: - використання культуральних рослин міскантусу; - депонування рослин в укоріненому стані; - використання модифікованого живильного середовища за прописом Мурасіге і Скуга; - використання повного набору мінеральних компонентів у живильному середовищі; - додавання БАП - 0,3 мг/л; - підвищена концентрація цукрози - 40,0-60,0 г/л; - для укорінення додавання ІОК - 0,3 мг/л; - температура культивування - 10±2 °C; - освітлення 3000-4000 лк; - депонування рослин в укоріненому стані. Відмінні від найближчого аналога ознаки при взаємодії з відомими дозволяють отримати високий вихід стерильних та життєздатних новоутворених пагонів, здешевити та удосконалити 1 UA 77119 U 5 10 15 склад живильного середовища, збільшити термін депонування до 12 місяців, отримати вищий коефіцієнт розмноження, підвищити рівень рентабельності. Ефективність нового способу депонування міскантусу у культурі in vitro вивчали на насінні п'яти сортів: New, Late, Sinensis, Sachariflorus, Early. Згідно з отриманими результататами досліджень видно, що заміна модифікованого живильного середовища за прописом Гамборга і Евелега на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга дає можливість отримати більшу кількість новоутворених пагонів (8 штук). Використання повного набору мінеральних компонентів у живильному середовищі, а не ¼ та 40,0-60,0 г/л цукрози дозволяє подовжити термін депонування рослин до 10-12 місяців. Як показали результати досліджень доцільним є додавання БАП та ІОК - 0,3 мг/л. Слід відмітити, що важливим моментом при депонуванні є те, що рослини знаходяться в укоріненому стані. Освітлення збільшили до 3000-4000 лк та температуру із 4±1 °C до 10±2 °C. Спосіб депонування міскантусу у культурі in vitro здійснюється таким чином: використовують рослини міскантусу та висаджують їх на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга у яке додано цукрози - 40,0-60,0 мг/л, БАП - 0,3 мг/л та ІОК - 0,3 мг/л. Культуральні рослини в стані укорінення та при освітленні 3000-4000 лк і температурі культивування 10±2 °C, дають можливість отримати 8 штук новоутворених пагонів. Термін депонування становить 10-12 місяці (табл. 1). 20 Таблиця 1 Показники ефективності використання запропонованого способу депонування міскантусу Показники Мінеральна основа середовища для депонування Цукроза, г/л ІОК мг/л НОК мг/л БАП мг/л Кількість новоутворених пагонів, шт. Довжина фотоперіоду, годин Освітлення, лк Температура культивування, °C Стан розвитку Коефіцієнт розмноження Теомін депонування, місяці 25 Відомий спосіб ¼ С200 60,0 0,8 0,8 0,1 3-5 16 500 4±1 не укорінені 3-5 6 Запропонований спосіб MS 40,0-60,0 0,3 0,3 8 16 3000-4000 10±2 укорінені 8 10-12 Впровадження запропонованої корисної моделі сприятиме отриманню високого виходу стерильних та життєздатних новоутворених пагонів, дозволить здешевити та удосконалити склад живильного середовища, збільшити термін депонування до 12 місяців, отримати вищий коефіцієнт розмноження, підвищити рівень рентабельності. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 Спосіб депонування міскантусу у культурі in vitro, що включає використання культуральних рослин, зменшення гормональних компонентів у живильному середовищі, збільшення концентрації цукрози, використання живильного середовища, отримання життєздатних бруньок, який відрізняється тим, що використовують рослини міскантусу в укоріненому стані, які пересаджують на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга повного набору компонентів та додають БАП - 0,3 мг/л, цукрози - 40,0-60,0 г/л, ІОК - 0,3 мг/л, за температури культивування - 10±2 °C та освітленні 3000-4000 лк. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2