Контрацептивний засіб з антимікробною та цитотоксичною дією

1.Контрацептивний засіб з антимікробною та цитотоксичною дією на основі спиртового екстракту з рослинної сировини, який відрізняється тим, що він містить рідкий або згущений, або висушений екстракт з листя та/або кори клену ясенелистого, одержаний шляхом екстракції сировини 3040% спиртом етиловим, з вмістом екстрактивних речовин не менше 18мас. %. 2. Контрацептивний засіб за п.1, який відрізняється тим, що він виконаний для місцевого застосування у лікарській формі таблеток, мазей, кремів, гелів, супозиторіїв або аерозолів. (19) (21) a200510411 (22) 04.11.2005 (24) 15.03.2007 (46) 15.03.2007, Бюл. №3, 2007р. (72) Фєдченкова Юлія Анатоліївна, Хворост Ольга Павлівна, Маркова Віра Михайлівна, Малоштан Людмила Миколаївна, Малий Володимир Валентинович (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ (56) UA 66635 А, 17.05.2004 UA 28314 C, 16.10.2000 Компендиум. Лекарственные препараты 2004/ Под ред. В.Н.Коваленко, А.П, Викторова. К.: Морион, 2004. - Л.597, Л.584. 3 78448 забезпечує не лише виражену контрацептивну дію засобу, але й має антимікробну та цитотоксичну активність, що дозволяє рекомендувати засіб для профілактики і лікування запальних процесів та новоутворень піхви, засіб не має побічних негативних е фектів та протипоказань для застосування. Поставлене завдання вирішується таким чином, що контрацептивний засіб з антимікробною та цитотоксичною дією на основі спиртового екстракту з рослинної сировини згідно з винаходом містить рідкий або густий або сухий екстракт з листя та/або кори клену ясенолистого, одержаний шляхом екстракції сировини 30-40% спиртом етиловим, з вмістом екстрактивних речовин не менше 18мас.%. Заявлений засіб може бути використаний безпосередньо у формі екстракту або інших лікарських формах для місцевого застосування: кремів, мазей, гелів, супозиторіїв, аерозолей, таблеток. Заявлений засіб у формі екстракту з листя та/або кори клену ясенолистого одержують наступним чином. Подрібнену сировину піддають дрібній екстракції принаймні тричі 30-40% спиртом етиловим при співвідношенні сировини до екстрагенту як 1:15-1:20. В якості сировини можуть бути використані окремо листя або кора або їх суміш у рівних частинах. Одержані екстракти об'єднують і відстоюють протягом 10-12 годин, піддають фільтрації, видаляють осад та одержують рідкий екстракт, який при необхідності будь-яким відомим способом концентрують до густого або сухого екстракту з вмістом екстрактивних речовин у готовому продукті 18-25мас.%. Готовий продукт розфасовують у тару та використовують безпосередньо або для виготовлення відповідних лікарських форм. 4 Одержані екстракти мають колір від коричневого до чорно-зеленого та гіркий смак. Вихід готового продукту 24-29%. Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1. Заявлений засіб одержували наступним чином. У екстракторі 1кг листя клену ясенолистого заливали тричі 30% спиртом етиловим при загальному співвідношенні сировини до екстрагенту 1:15 і екстрагували протягом 12 годин, одержані екстракти об'єднували, відстоювали протягом 12 годин і відфільтровували, одержали рідкий екстракт з вмістом екстрактивних речовин 18мас.%. Приклад 2. У екстракторі 1кг кори клену ясенолистого заливали тричі 40% спиртом етиловим при загальному співвідношенні сировини до екстрагенту 1:15 і екстрагували протягом 12 годин, одержані екстракти об’єднували, відстоювали протягом 12 годин і відфільтровували, одержаний рідкий екстракт упарювали до густого екстракту з вмістом екстрактивних речовин 25мас.%. Приклад 3. Контрацептивну дію заявленого засобу вивчали in vitro за його здатністю пригнічувати рухову активність сперматозоїдів. В якості матеріалу дослідження використовували сперму чоловіка. Оцінку контрацептивної дії проводили за результатами сперміцидного ефекту шляхом оцінки безпосередніх змін у спермограмі. Контрацептивну дію заявленого засобу у формі густого екстракту з листя клену ясенолистого вивчали у порівнянні з такою ж дією комплексу полісахаридів з листя смородини чорної у формі густого екстракту та густо го екстракту кори вільхи клейкої (прототип). Результати, одержані у першу хвилину досліду, надані у Таблиці 1. Таблиця 1 Вплив заявленого засобу у формі густого екстракту листя клену ясенолистого на рухомість сперматозоїдів у спермограмі у порівнянні з відомими засобами Рухомість сперматозоїдів за спермограмою Активно рухомі Рухомі Такі, що місцево хитаються Нерухомі Контроль Густий екстракт кори Густий екстракт листя клена вільхи клейкої ясенолистого (n=5) Комплекс полісахарид ів з листя смородини чорної 0,5% 5% 0,5% 5% 20±1 32±1 0 22±2 0,5% 0 12±2 0 0 0 0 0 0 30±1 48±249±2 0 31±1 0 18±2 30±3 39±2 100 69±2 100 Аналіз даних Таблиці 1 свідчить про те, що використання густого екстракту заявленого засобу вже у концентрації 0,5% призводить до зникнення активно рухомих та р ухомих сперматозоїдів, а в дозі 5% - до знерухомлення всіх сперматозоїдів негайно після застосування. Заявлений засіб у концентрації 0,5% вірогідно перевищує контрацептивну дію засобів порівняння аналогічної концент рації, а у дозі 5% є 100%-во ефективним як і засіб за прототипом. Приклад 4. Контрацептивну дію заявленого засобу у формі густи х екстрактів з листя та кори клену ясенолистого вивчали у порівнянні з густим екстрактом кори вільхи клейкої за прототипом в умовах досліду, аналогічних прикладу 3, при збільшенні часу експозиції до 10 хвилин. Дані досліду наведені у Таблиці 2. 5 78448 6 Таблиця 2 Вплив заявленого засобу у формі густи х екстрактів з листя та кори клену ясенелистого на рухомість сперматозоїдів у спермограмі при експозиції до 10 хвилин у порівнянні з прототипом (n=5) Рухомість сперматозоїдів за спермограмою Контроль Активно рухомі Рухомі Такі, що місцево хитаються Нерухомі Густий екстракт кори Густий екстракт листя Густий екстракт кори клену вільхи клейкої клену ясенолистого ясенолистого 5% 0,5% 5% 0,5% 5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20±1 32±1 0,5% 0 0 30±2 12±1 0 0 0 0 0 18±1 88±2 100 100 100 100 100 Дані Таблиці 2 свідчать, що при збільшенні часу експозиції до 10 хвилин зростає контрацептивна дія досліджених засобів, причому досягається повна нерухомість сперматозоїдів під впливом заявленого засобу у формі густих екстрактів як з листя, так і з кори клену ясенолистого у концентраціях 0,5% та 5%. Аналогічний ефект досягається при використанні засобу за прототипом лише у концентрації 5%, у меншій концентрації 0,5% спостерігається деяка кількість сперматозоїдів, що місцево хитаються, тобто у цій концентрації засіб за прототипом поступається за контрацептивною дією заявленому засобу. Приклад 5. Антимікробну активність заявленого засобу вивчали методом дифузії в агар (метод «колодязів») з використанням двошарової заливки чашок Петрі. Як тест-культури використовували різні музейні та клінічні штами бактерій та грибів. У порівняльному аспекті у досліді вивчали вплив на тесткультури 2% розчинів заявленого засобу у формі густи х екстрактів з листя та кори клену ясенолистого і густого екстракту з кори вільхи клейкої (прототип) та 30% спирту етилового. В якості критеріїв ступеня антимікробної активності досліджених засобів вибрано діаметр зони затримки росту тесткультур (мм), дані експерименту наведені в Таблиці 3. Таблиця 3 Вивчення антимікробної активності заявленого засобу у порівнянні з прототипом Тест-штами Staphylococcus aureus ATCC 25923 Echerichia coli ATCC 25922 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Bacillus subtillis ATCC 6633 Candida albicans ATCC 885-653 2% розчин густого 2% розчин густого 2% розчин густого екстракту листя екстракту вільхи екстракту кори клену клену ясенелисклейкої ясенелистого того Зона затримки росту, мм 30% спирт 27,7±0,3 25,0±0,6 29,5±0,9 14,3+0,9 9,5+0,4 17,5+0,5 14,0+0,7 12,3+0,5 15,6+0,8 11,2+0,9 8,5±0,7 13,3+2,3 15,5+0,8 4,2+0,6 Аналіз даних Таблиці 3 свідчить про виражену антимікробну активність заявленого засобу. Засіб у формі густого екстракту кори та листя клену ясенолистого на відміну від прототипу пригнічує ріст Bacillus subtillis ATCC 6633, та проявляє антимікробну активність по відношенню до Staphylococcus aureus ATCC 25923 на рівні прототипу. По відношенню до Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 більш активно діє густий екстракт з листя клену ясенолистого, стосовно Candida albicans ATCC 885-653 - густий екстракт кори клену ясенелистого. Приклад 6. Оцінка цитотоксичної дії заявленого засобу у формі густого екстракту з листя клену ясенолистого проводилась за допомогою удосконаленого методу Шрека. Суть цього методу полягає в тому, що при суправітальному фарбуванні 1% водним розчином метиленового синього живі клітини кісткового мозку не пропускають барвник, в той час як мембрана пошкоджених клітин фіксує забарвлення. За критерій оцінки цитотоксичної дії прийнята кількість забарвлених клітин зі 100 нарахованих у полі зору мікроскопу. Дані експерименту наведені в Таблиці 4. 7 78448 8 Таблиця 4 Цитотоксична дія заявленого засобу у формі густих екстрактів кори та листя клена ясенолистого (n=5) Заявлений засіб Густий екстракт листя клена ясенелистого Густий екстракт кори клена ясенелистого 1% Кількість забарвлених клітин Концентрація розчинів заявлених засобів 0,25% 0,062% 0,015% 73±1 40±1 19±1 86±2 56±1 28±1 18±1 Отримані результати переконливо доводять цитотоксичну дію на клітини кісткового мозку заявленого засобу у формі густи х екстрактів з листя та кори клена ясенолистого. У даній комбінації найбільш активним виявився густий екстракт кори клена ясенолистого, що дозволяє передбачити його більш ефективну дію при новоутвореннях різної етіології. Проведені дослідження дозволяють зробити висновок про виражену контрацептивну, антимікробну та цитотоксичну дію заявленого засобу у формі густи х екстрактів з листя та кори клену ясенолистого та перспективність подальших робіт по створенню лікарських засобів у різних лікарських формах на їх основі. З метою забезпечення індивідуального підходу до вибору способів використання та очікуваного результату від застосування заявленого засобу останній може бути виконаний у формі мазі, крему, гелю, аерозолю, таблеток, супозиторіїв. Діючою речовиною всіх зазначених Комп’ютерна в ерстка М. Ломалова лікарських форм є екстракт з листя та/або кори клену ясенолистого необхідної густини з вмістом екстрактивних речовин не менше 18мас.%, а допоміжні речовини вибирають з переліку фармацевтично прийнятих формоутворюючих речовин. Використання в якості сировини листя та/або кори клену ясенолистого обумовлює практично однакову ефективність заявленого засобу, проте дещо більшу цитотоксичну дію має засіб з кори клену ясенолистого. Заявлений засіб отримують за простою технологією у стандартних промислових умовах з вітчизняної доступної сировини. Заявлений засіб є ефективним контрацептивним засобом, завдяки його антимікробним властивостям засіб може бути використаний при лікуванні та профілактиці запальних процесів, наприклад, кольпітів та вагінітів, а завдяки цитотоксичній активності - при новоутвореннях піхви. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601