Спосіб визначення субмікроскопічних змін пінеалоцитів при тривалому освітленні

Реферат: Спосіб визначення субмікроскопічних змін пінеалоцитів при тривалому освітленні включає визначення біохімічних та фізіологічних показників та використання препарату тетрапептид епіталону. UA 81331 U (12) UA 81331 U UA 81331 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до нормальної фізіології, і може бути використана при клінічних діагностичних та наукових дослідженнях, а також при виконанні експериментальних науково-дослідних та дисертаційних робіт. Відомо на сьогодні, що епіталон має протекторною дію, індукує розвиток компенсаторноадаптаційних перебудов, відновлює серотонін-продукуючу активність шишкоподібної залози у денний період спостереження, а також збільшує кількість гранул мелатоніну в пінеалоцитах у 02.00 год. порівняно з щурами, які знаходяться в умовах постійного освітлення [Пішак В.П., Булик Р.Є. Механізми участі шишкоподібної залози в забезпеченні циркадіанної ритмічності фізіологічних функцій // Бук. мед. вісник.-2006. - Т. 10, № 4. - С. 5-8]. На основі аналізу даних про амінокислотний склад пептидів шишкоподібної залози в СанктПетербурзькому інституті біорегуляції і геронтології ПЗО РАМН сконструйований і синтезований тетрапептид епіталон. Попередні дослідження показали, що він має онкостатичну, антиоксидантну та геропротекторну дію. Відомості, що віддзеркалюють ефекти епіталону на морфологічні зміни в шишкоподібній залозі при тривалій експозиції світлом відсутні. За найближчий аналог способу вибрана корисна модель № 34445 Застосування епіталону як препарату для корекції змін про- та антиоксидантного захисту при стресі в експерименті (автори: Пішак В.П., Ломакіна Ю.В., Висоцька В.Г., Булик Р.Є. Бюл. № 15 від 11.08.2008 p.), який базується на біохімічних та фізіологічних змінах в організмі. Недоліком аналога є використання епіталону при визначенні тільки біохімічних та фізіологічних показників, не враховуючи цитологічні зміни в пінеалоцитах. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб визначення субмікроскопічних змін пінеалоцитів при тривалому освітленні з використанням препарату тетрапептиду епіталону. Поставлена задача вирішується тим, що для визначення ультраструктурних змін пінеалоцитів шишкоподібної залози у циркадіанній залежності використовується тривале освітлення та введення тетрапептиду епіталону. Технічне вирішення: Експериментальні тварини поділені на три серії, у кожній з яких забір біоматеріалу здійснювався о 14.00 і о 02.00 год. Вибрані терміни проведення експерименту зумовлені різною функціональною активністю шишкоподібної залози у вказані часові періоди доби. Тварини першої серії (контроль) перебували 7 діб за умов звичайного світлового режиму LD (світло з 08.00 до 20.00 год., освітленість люмінесцентними лампами на рівні кліток 500 лк). Щури другої серії перебували за умов постійного освітлення (LL - моделювання гіпофункції шишкоподібної залози) впродовж 7-ми діб. Тваринам третьої серії, які знаходилися за умов експерименту, як і щури другої серії, щоденно о 19.00 год. внутрішньоочеревинно уводили епіталон (Санкт-Петербурзький інститут біорегуляції і геронтології ПЗО РАМН) підшкірно, дозою 0,5 мкг/кг, в 0,5 мл 0,9 % розчину натрію хлориду. Після закінчення 7-денного експерименту наступного дня о 14.00 і 02.00 год. здійснювали виведення тварин з експерименту шляхом одномоментної декапітації під етаміналовим наркозом (40,0 мг/кг внутрішньоочеревинно). Для електронно-мікроскопічного дослідження шишкоподібної залози забір матеріалу проводили згідно з загальноприйнятими правилами. Після трепанації вилучали залозу і фіксували її в 2,5 % розчині глютаральдегіду, який готували на фосфатному буфері Міллонга з активною реакцією середовища рН 7,2-7,4. Фіксований матеріал переносили у буферний розчин і промивали протягом 20-30 хв. Після цього впродовж 60 хв здійснювали постфіксацію матеріалу, використовуючи для цього 1 % розчин чотириокису осмію на буфері Міллонга. Далі проводили дегідратацію матеріалу в спиртах і ацетоні та заливали в суміш епоксидних смол відповідно до загальноприйнятої методики. Дослідження в інтактних тварин у нічний період доби проводили при слабкому (2 лк) червоному світлі, яке практично не впливає на біосинтез мелатоніну шишкоподібною залозою. Епіталон протективно впливає на ультраструктуру пінеалоцитів щурів, які знаходилися за умов постійного освітлення; індукує компенсаторно-адаптаційні перебудови, спричинює відновлення серотонін-продукувальної активності залози в денний період спостереження та зростання кількості гранул мелатоніну в пінеалоцитах о 02.00 год. Спосіб дії епіталону на субмікроскопічні зміни пінеалоцитів при тривалому освітленні забезпечується тим, що при користуванні запропонованим способом відмічено протекторний вплив епіталону на ультраструктуру пінеалоцитів щурів, які знаходилися за умов постійного освітлення; компенсаторно-адаптаційні перебудови, спричинені відновленням серотонінпродукувальної активності залози в денний період спостереження та зростання кількості гранул мелатоніну в пінеалоцитах о 02.00 год. Одним з механізмів впливу епіталону на функціональний стан шишкоподібної залози при дії світла може бути тенденція до нормалізації балансу нейромедіаторів у мозкових структурах, і, 1 UA 81331 U 5 як наслідок, відновлення чутливості залози до периферичних регуляторних сигналів. Вперше для оцінки субмікроскопічних змін пінеалоцитів при тривалому освітленні використано препарат - епіталон. Технічний результат: при користуванні запропонованим способом відмічено підвищення точності визначення оцінки субмікроскопічних змін пінеалоцитів при тривалому освітленні. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 Спосіб визначення субмікроскопічних змін пінеалоцитів при тривалому освітленні, що включає визначення біохімічних та фізіологічних показників, який відрізняється тим, що використовують препарат тетрапептид епіталону. Комп’ютерна верстка М. Ломалова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2