Спосіб виготовлення децелюляризованого матриксу для серцево-судинних трансплантатів

Реферат: Спосіб виготовлення децелюляризованого матриксу для серцево-судинних трансплантатів включає інкубацію протягом двох діб у 10 мМ розчині етилендіамінтетраоцтової кислоти або етилендіамінтетраоцтового натрію з розчинником у вигляді середовища "Ігла" із подальшою відмивкою, причому як розчинник для етилендіамінтетраоцтової кислоти або етилендіамінтетраоцтового натрію використовується середовище "Ігла" без кальцію, а тривалість відмивки трансплантатів від робочого розчину збільшена до двох діб, при цьому, під час обробки графтів для більшої її ефективності використовують ролер. UA 85240 U (12) UA 85240 U UA 85240 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель стосується біотехнології та медицини, а саме - тканинної інженерії, клітинної терапії та серцево-судинної хірургії. Може бути використана в спеціалізованих кардіохірургічних відділеннях для заміщення дефектів клапанно-судинного апарата, що супроводжуються порушеннями гемодинаміки. Прототипом запропонованого способу є метод обробки тканин трансплантатів, який передбачає інкубацію їх у розчині з агентами, що викликають апоптоз у клітинах донорської тканини. Інкубацію проводять упродовж 2 діб у середовищі "Ігла" в модифікації Дюльбекко (ДМЕМ) із 10 мМ вмістом етилендіамінтетраоцтової кислоти або 2 М сорбітолу із подальшою відмивкою у фосфатному сольовому буфері із рН=7,2 протягом 24 годин із трикратною зміною розчину [1]. Недоліком цього способу є те, що зазначений метод обробки трансплантатів ініціює апоптоз, але не зменшує загальної кількості клітин у тканині. Крім того, після гістологічного аналізу оброблених таким чином зразків виявляється, що ініціація апоптозу проходить лише у клітинах поверхневого шару тканини. Клітини ж у товщі тканини залишаються абсолютно інтактними [1]. Таким чином, зниження загрози розвитку імунологічної реакції в організмі хазяїна після трансплантації, що є однією з головних цілей, буде незначним через залишок життєздатних клітин у товщі тканини, а також високу загальну кількість клітин у її поверхневому шарі. Задачею корисної моделі є удосконалення відомого способу отримання позаклітинного матриксу серцево-судинних графтів свиней із мінімальним вмістом клітин, що дозволить зменшити кількість чужорідних антитіл і, як наслідок, знизити імунну відповідь організму реципієнта, а також вірогідність відторгнення трансплантату. Поставлена задача вирішується таким чином. У відомому способі виготовлення децелюляризованого матриксу для серцево-судинних трансплантатів проводять інкубацію протягом двох діб у 10 мМ розчині етилендіамінтетраоцтової кислоти або етилендіамінтетраоцтового натрію з розчинником у вигляді середовища "Ігла" із подальшою відмивкою і, відповідно до корисної моделі, як розчинник для етилендіамінтетраоцтової кислоти або етилендіамінтетраоцтового натрію використовується середовище "Ігла" без кальцію, а тривалість відмивки трансплантатів від робочого розчину збільшена до двох діб. При цьому, під час обробки графтів для більшої її ефективності використовують ролер. Спосіб здійснюють таким чином. Забір сердець свиней проводять в умовах операційної згідно із вимогами "Європейської конвенції про захист хребетних тварин, що використовуються для експериментів або у наукових цілях" (Страсбург, 18.03.1986) і постанови Першого національного конгресу з біоетики (Київ, 2001). Виділення серцево-судинних графтів проводять в умовах стерильності у середньому через 4 години після забору. Далі графти, після попередньої промивки у фосфатному буфері, інкубуються, впродовж 2 діб, у поживному середовищі "Ігла" без кальцію із додаванням 10 мМ етилендіамінтетраоцтової кислоти або етилендіамінтетраоцтового натрію. Використання середовища "Ігла" без кальцію дає можливість зниження схильності тканини до кальцифікації без зменшення поживності розчину для матриксу. Флакони із графтами, що знаходяться у розчині, поміщають до термостату із температурою 37 °C на ролер для постійного помішування із метою збільшення площі обтікання тканини розчином і, як наслідок, ефективності інкубації. Через одну добу робочий розчин замінюється на свіжий. Після інкубації графтів у розчині, що індукує апоптоз, їх переміщають на дві доби до розчину із фізіологічним вмістом солей (розчин Хенкса) для відмивки, що дає можливість мати час для реалізації апоптозу. При цьому флакони також поміщають до термостату і постійно мішають. Менша концентрація етилендіамінтетраоцтової кислоти у розчині, як і менший час експозиції, знизять ефективність впливу та кількість загиблих клітин. Інкубація графтів у розчині з більшою концентрацією етилендіамінтетраоцтової кислоти буде мати пагубний вплив не лише на клітини, але й на позаклітинний матрикс, у той час як його інтактність і цілісність є дуже важливими. Збільшення часу інкубації графтів у робочому розчині також деструкційно впливає на волокна матриксу. Перевага наведеного способу полягає в тому, що загальна кількість клітин, як на поверхні, так і у товщі тканини, зменшується, а серед клітин, що залишаються, високий відсоток таких, що мають морфологічні ознаки апоптозу. У той же час позаклітинний матрикс є морфологічно і функціонально цілісним. Усе вищезазначене дозволяє використовувати отриманий децелюляризований матрикс як каркас для серцево-судинного протезу і значно знизити імунологічну відповідь на трансплантат одразу після операції, а також очікувати більш швидку заміну клітин і волокон матриксу донорської тканини на клітини і матрикс реципієнта. Джерело інформації: 1 UA 85240 U Акатов B.C., Фесенко Н.И., Соловьев В.В. и др. Подавление кальцификации трансплантатов клапанов сердца путем их девитализации // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия.-2010. - T.V, № 1. - С. 41-46. 5 10 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб виготовлення децелюляризованого матриксу для серцево-судинних трансплантатів, що включає інкубацію протягом двох діб у 10 мМ розчині етилендіамінтетраоцтової кислоти або етилендіамінтетраоцтового натрію з розчинником у вигляді середовища "Ігла" із подальшою відмивкою, який відрізняється тим, що як розчинник для етилендіамінтетраоцтової кислоти або етилендіамінтетраоцтового натрію використовується середовище "Ігла" без кальцію, а тривалість відмивки трансплантатів від робочого розчину збільшена до двох діб, при цьому, під час обробки графтів для більшої її ефективності використовують ролер. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2