Спосіб оцінки життєздатності клітин за умови їх вирощування у культурі

Реферат: В способі оцінки життєздатності клітин за умови їх вирощування у культурі оцінку життєздатності клітин здійснюють диференціюванням повноцінних і неповноцінних клітин шляхом виконання послідовних етапів: підраховують кількість усіх клітин у суспензії вихідного посадкового матеріалу і вносять певний об'єм суспензії клітин у зону А і одночасно вносять такий же об'єм живильного середовища у зону Б чашки Петрі, оснащеної тетраполярною електродною системою, через певний час відбирають пробу у зоні Б та підраховують кількість пасивно дифундованих клітин, повторюють процедуру внесення клітинної суспензії і живильного середовища у чашку Петрі, включають систему автоматичної подачі прямокутних імпульсів постійного струму на І і III робочі електроди, розраховують різницю між загальною кількістю клітин і підрахованою кількістю клітин зони А, що надає сумарну кількість функціонально активних клітин і визначають дійсну кількість функціонально активних клітин, віднімаючи від сумарної кількості функціонально активних клітин кількість пасивно дифундованих клітин. UA 95263 U (12) UA 95263 U UA 95263 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до способу вирощування мультипотентних стовбурових клітин, і може бути використана для лікування відповідних захворювань людини. Деякі дослідники при розмноженні (проліферації) клітин у культурі оцінюють відповідність складу живильного середовища фізіологічним потребам клітин по приросту (Δ) числа клітин (n) на момент засіву (n0) та після інкубації (nt) за одиницю часу ( - година, доба): -1 -1 Δn=n1· -n0· . Інші розраховують приріст у відсотках до вихідного рівня. В обох випадках виходять із припущення, що всі клітини у культурі рівноцінні і мають однакову функціональну активність, тобто - життєздатність. Досвід, накопичений в біології за останні роки, стверджує, що таке припущення не відповідає дійсності. У будь-якій популяції клітин або організмів існує дисперсія якості та життєздатності її складових. Якщо нехтувати цим фактом, виникає певна похибка в оцінці результатів. Вона знижує ефективність кінцевих результатів - досягнення максимальної продуктивності культури. Запропонований нами спосіб усуває цей недолік і підвищує кінцеву ефективність культивації. Розроблений спосіб дозволяє диференціювати повноцінні і неповноцінні (частково або повністю дефективні) клітини перед посівом, тобто досягати максимальної продуктивності культури. Запропонована корисна модель пояснюється з посиланням на креслення. Схема тетраполярної електродної системи у чашці Петрі. Для реалізації способу оцінки життєздатності клітин необхідні такі прилади та інструменти: 1) Світлооптичний мікроскоп. 2) Чашка Петрі (Ø 35-50 мм) або прозора кювета іншої форми з чотирма хрестовино розташованими електродами (див. креслення). 3) Компенсатор власного потенціалу електродів від -100 до +100 mV. 4) Генератор прямокутних імпульсів постійного струму 100÷200 mV; 60÷120 с. Спосіб оцінки життєздатності клітин реалізується шляхом послідовного виконання наступних етапів: 1. Підраховують кількість усіх клітин (No) у суспензії вихідного посадкового матеріалу у полі зору мікроскопа при стандартному розведенні і збільшенні. 2. Частину об'єму суспензії клітин вносять у зону А чашки Петрі з живильним середовищем, яку додатково оснащено спеціальною тетраполярною електродною системою (див. креслення). Водночас у зону Б додають живильне середовище об'ємом, рівним об'єму суспензії клітин зони А. 3. Вимірюють власний потенціал спочатку І, потім III електрода по відношенню до спарених II і IV електродів порівняння. При їх нерівності - компенсують різницю потенціалів і при їх рівності переходять до наступного етапу. 4. Через 120 с із зони Б відбирають пробу та підраховують кількість пасивно дифундованих клітин (NБД). 5. Промивають чашку Петрі, заповнюють свіжим живильним середовищем і повторюють процедуру згідно п. 2 та п. 3. 6. Включають систему автоматичної подачі прямокутного імпульсу постійного струму на І і III робочі електроди. При цьому усі функціонально активні клітини починають переміщуватися у зону Б. 7. Через 120 с відбирають пробу із зони А та підраховують кількість клітин (NАφ). φ 8. Розраховують сумарну кількість функціонально активних клітин (NА ), які або пасивно дифундують, або мають достатній фізіологічний електричний заряд на мембрані та реагують на зовнішнє електричне поле: φ φ NБ =N0-NА . 9. Визначають дійсну кількість функціонально активних клітин (Nv) без пасивно дифундованих: Nv=NБφ-NБД. 10.Етапи 1-9 повторюють через кілька діб культивування, оцінюючи ступінь проліферації клітин у культурі в різних середовищах або умовах інкубації. 55 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 60 Спосіб оцінки життєздатності клітин за умови їх вирощування у культурі, який відрізняється тим, що оцінку життєздатності клітин здійснюють диференціюванням повноцінних і неповноцінних клітин шляхом виконання послідовних етапів: підраховують кількість усіх клітин у 1 UA 95263 U 5 10 суспензії вихідного посадкового матеріалу і вносять певний об'єм суспензії клітин у зону А і одночасно вносять такий же об'єм живильного середовища у зону Б чашки Петрі, оснащеної тетраполярною електродною системою, через певний час відбирають пробу у зоні Б та підраховують кількість пасивно дифундованих клітин, повторюють процедуру внесення клітинної суспензії і живильного середовища у чашку Петрі, включають систему автоматичної подачі прямокутних імпульсів постійного струму на І і III робочі електроди, розраховують різницю між загальною кількістю клітин і підрахованою кількістю клітин зони А, що надає сумарну кількість функціонально активних клітин і визначають дійсну кількість функціонально активних клітин, віднімаючи від сумарної кількості функціонально активних клітин кількість пасивно дифундованих клітин. Комп’ютерна верстка С. Чулій Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2