Антитіло проти cgrp

Реферат: Винахід належить до людського генно-інженерного антитіла проти CGRP або його антигензв'язуючого фрагмента, застосування вказаного антитіла для одержання фармацевтичної композиції, способу лікування болю при остеоартриті та мігрені. UA 109658 C2 (12) UA 109658 C2 UA 109658 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Цей винахід стосується галузі медицини, зокрема, антитіл проти зв'язаного з геном кальцитоніну пептиду (CGRP). Більш конкретно, цей винахід стосується антитіл проти CGRP і застосування згаданих антитіл проти CGRP для лікування болю при остеоартриті або мігреней. Зв'язаний з геном кальцитоніну пептид (CGRP) являє собою нейропептид, що складається з 37 амінокислот, який секретується нервами центральної та периферичної нервових систем. CGRP є дуже поширеним у сенсорних нервах як периферичної, так і центральної нервової системи, і демонструє велику кількість різних видів біологічної активності. Є повідомлення про те, що CGRP відіграє певну роль, яка полягає в тому, що після виділення з нервових волокон трійчастого та інших нервів, CGRP опосередковує свої біологічні реакції шляхом зв'язування із специфічними рецепторами клітинної поверхні. Є повідомлення про те, що CGRP відіграє певну роль при мігренях, оскільки цей пептид виділяється при стимуляції сенсорних нервів і має високу вазодилаторну активність. Виділення CGRP підвищує проникність судин і подальше випотівання білків плазми (транссудацію білків плазми) у тканини, інервовані нервовими волокнами трійчастого нерва при стимулюванні цих волокон. Крім того, результати досліджень показали, що результатом вливання CGRP пацієнтам, які страждають на мігрені, було виникнення мігренеподібних симптомів. Також є повідомлення про те, що CGRP відіграє певну роль при остеоартриті (ОА). Остеоартрит являє собою хронічний стан, яким уражений великий відсоток людей у всьому світі. Біль при артриті характеризується гіпералгезією (аномально висока чутливість організму до подразників, нешкідливих за нормальних умов) та спонтанним болем (біль у стані покою). Запалення суглоба спричинює сенсибілізацію периферичної і центральної нервових систем. При сенсибілізації периферичної нервової системи високопорогові за нормальних умов CGRPвмісні больові рецептори починають реагувати на легкий тиск, пов'язаний з нормальним рухом суглоба. CGRP діє як місцевий полегшувач запальних процесів. Цей безперервний процес з часом призводить до сенсибілізації центральної нервової системи, а саме спинного мозку, так що нейрони стають чутливими до стимулювання як запаленої, так і незапаленої тканини. На передклінічних моделях болю при остеоартриті у пацюків було виявлене збільшення кількості CGRP-позитивних нервових волокон, що позитивно корелює з інтенсивністю болю. Сучасні традиційне лікування болю при остеоартриті передбачає застосування нестероїдних протизапальних лікарських засобів (NSAID) та селективних інгібіторів Cox-2 (циклооксигенази-2). З часом багато пацієнтів стають нечутливими до цих засобів або неспроможними переносити високі дози, необхідні для ефективного полегшення інтенсивності болю. Подальше лікування полягає у внутрішньосуглобових ін'єкціях (гіалуронан) або у застосуванні опіатів. Кінцевим способом лікування є хірургічна операція з повною заміною суглоба. Багато із цих способів лікування мають негативні побічні ефекти у межах від шлунковокишкових (NSAID) до серцево-судинних (інгібітори Cox-2), є складними та/або не дуже ефективними (внутрішньосуглобові ін'єкції), спричинюють ризик зловживання (опіати) або обмежуються лише 1 суглобом (внутрішньосуглобові ін'єкції, хірургічне втручання). Незважаючи на те, що антитіла проти CGRP для лікування мігреней та для лікування запального болю вже були розкриті [мігрені – WO 2007/076336 та WO 2007/054809; остеоартрит – дивись Антитіло G1 у WO 2009/109908A1], все ще існує потреба у альтернативних варіантах. За варіантом, якому віддається перевага, такий альтернативний спосіб лікування має бути безпечним та ефективним. За варіантом, якому віддається більша перевага, альтернативний спосіб лікування остеоартриту має забезпечити тривале полегшення інтенсивності болю на численних суглобах і переноситися пацієнтами без ризику виникнення залежності та/або зловживання. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить варіабельну ділянку легкого ланцюга (LCVR) і варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR), де згадана LCVR містить амінокислотні послідовності LCDR1, LCDR2 та LCDR3, й HCVR містить амінокислотні послідовності HCDR1, HCDR2 та HCDR3, вибрані з групи, яку складають: a) LCDR1 – rasqdidnyln (SEQ ID NO: 3), LCDR2 – YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 – QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 – gytfgnywmq (SEQ ID NO: 12), HCDR2 – aiyegtgdtryiqkfag (SEQ ID NO: 13) та HCDR3 – lsdyvsgfsy (SEQ ID NO: 14); b) LCDR1 – rasqdidnyln (SEQ ID NO: 3), LCDR2 – YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 – QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 – gytfgnywmq (SEQ ID NO: 12), HCDR2 – aiyegtgktvyiqkfag (SEQ ID NO: 15) та HCDR3 – lsdyvsgfsy (SEQ ID NO: 14); c) LCDR1 – raskdiskyln (SEQ ID NO: 6), LCDR2 – YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 – QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 – gytfgnywmq (SEQ ID NO: 12), HCDR2 – aiyegtgktvyiqkfad (SEQ ID NO: 16) та HCDR3 – lsdyvsgfGY (SEQ ID NO: 39); 1 UA 109658 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 d) LCDR1 – rasrpidkyln (SEQ ID NO: 8), LCDR2 – YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 – QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 – gytfgnywmq (SEQ ID NO: 12), HCDR2 – aiyegtgktvyiqkfag (SEQ ID NO: 15) та HCDR3 – lsdyvsgfGy (SEQ ID NO: 39); та e) LCDR1 – rasqdidkyln (SEQ ID NO: 9), LCDR2 – YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 – QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 – gytfgnywmq (SEQ ID NO: 12), HCDR2 – aiyegtgktvyiqkfag (SEQ ID NO: 15) та HCDR3 – lsdyvsgfGy (SEQ ID NO: 39), причому згадане людське генно-інженерне антитіло проти CGRP зв'язується з людським CGRP. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR та HCVR, де LCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 3, LCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 4, LCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 5, HCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 12, HCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 13 і HCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 14, причому згадане людське генно-інженерне антитіло проти CGRP зв'язується з людським CGRP. Цим винаходом запропоноване людське генноінженерне антитіло проти CGRP або його антигензв'язувальний фрагмент, що містить LCVR та HCVR, причому LCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 3, LCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 4, LCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 5, HCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 12, HCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 15 і HCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 14, причому згадане людське генно-інженерне антитіло проти CGRP зв'язується з людським CGRP. Цим винаходом запропоноване людське генноінженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR та HCVR, де LCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 6, LCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 7, LCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 5, HCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 12, HCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 16 і HCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 39, причому згадане людське генно-інженерне антитіло проти CGRP зв'язується з людським CGRP. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR та HCVR, де LCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 8, LCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 4, LCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 5, HCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 12, HCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 15 і HCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 39, причому згадане людське генно-інженерне антитіло проти CGRP зв'язується з людським CGRP. Цим винаходом запропоноване людське генноінженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR та HCVR, де LCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 9, LCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 7, LCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 5, HCDR1 являє собою послідовність SEQ ID NO: 12, HCDR2 являє собою послідовність SEQ ID NO: 15 і HCDR3 являє собою послідовність SEQ ID NO: 39, причому згадане людське генно-інженерне антитіло проти CGRP зв'язується з людським CGRP. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR та HCVR, де LCDR1 – RASX1X2IX3X4YLN (SEQ ID NO: 10), LCDR2 – YTSX5YHS (SEQ ID NO: 11), LCDR3 – QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5) і HCDR1 – GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 – AIYEGTGX6TX7YIQKFAX8 (SEQ ID NO: 37) і HCDR3 – LSDYVSGFX9Y (SEQ ID NO: 38), де X1 – Q, R або K; X2 – D або P, X3 – D або S, X4 – N або K, X5 – G або E, X6 – K або D, X7 – V або R, X8 – D або G і X9 – G або S, причому згадане людське генно-інженерне антитіло проти CGRP зв'язується з людським CGRP. За іншим варіантом здійснення цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить варіабельну ділянку легкого ланцюга (LCVR) і варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR), де згадана LCVR містить: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASX1X2iX3X4YLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSX5YHSGVPSRFS GSGSGTDFTX6TISSLQPEDX7ATYYCQQGDALPPTFGX8GTKX9EIK, де X1 – Q, K або R; X2 – D або P; X3 – D або S; X4 – K або N; X5 – E або G; X6 – F або L; X7 – I або F; X8 – Q або G; і X9 – L або V (послідовність SEQ ID NO: 42), і згадана HCVR містить: QVQLVQSGAEVKKPGX1SVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWMGAIYEGTGX2TX3Y IQKFAX4RVTX5TX6DX7STSTX8YMELSSLRSEDTAVYYCARLSDYVSGFX9YWGQGTX10VTVSS, де X1 – A або S; X2 – K або D; X3 – V або R; X4 – G або D; X5 – M або I; X6 – R або A; X7 – T або K; X8 – V або A; X9 – G або S; і X10 – L або T (послідовність SEQ ID NO: 43), причому згадане антитіло зв'язується з людським CGRP. За іншим варіантом здійснення цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить варіабельну ділянку легкого ланцюга (LCVR) і варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR), причому згадані LCVR та HCVR являють собою амінокислотні послідовності, вибрані з групи, яку складають: 2 UA 109658 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 a) LCVR – послідовність SEQ ID NO: 17, і HCVR – послідовність SEQ ID NO: 22; b) LCVR – послідовність SEQ ID NO: 18, і HCVR – послідовність SEQ ID NO: 23; c) LCVR – послідовність SEQ ID NO: 19, і HCVR – послідовність SEQ ID NO: 24; d) LCVR – послідовність SEQ ID NO: 20, і HCVR – послідовність SEQ ID NO: 25; та e) LCVR – послідовність SEQ ID NO: 21, і HCVR – послідовність SEQ ID NO: 26. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 17, і HCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 22. За варіантом здійснення, якому віддається перевага, цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 18, і HCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 23. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 19, і HCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 24. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 20, і HCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 25. Цим винаходом запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить LCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 21, і HCVR, представлену послідовністю SEQ ID NO: 26. Цим винаходом також запропоноване людське генно-інженерне антитіло проти CGRP, яке містить легкий ланцюг (LC) і важкий ланцюг (HC), де амінокислотні послідовності згаданих LC і HC вибрані з групи, яку складають: a) LC – послідовність SEQ ID NO: 27, і HC – послідовність SEQ ID NO: 32; b) LC – послідовність SEQ ID NO: 28, і HC – послідовність SEQ ID NO: 33; c) LC – послідовність SEQ ID NO: 29, і HC – послідовність SEQ ID NO: 34; d) LC – послідовність SEQ ID NO: 30, і HC – послідовність SEQ ID NO: 35; та e) LC – послідовність SEQ ID NO: 31, і HC – послідовність SEQ ID NO: 36. За одним із варіантів здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить LC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 27, і HC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 32. За іншим варіантом здійснення цього винаходу людське генноінженерне антитіло проти CGRP містить LC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 28, і HC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 33. За іншим варіантом здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить LC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 29, і HC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 34. За іншим варіантом здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить LC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 30, і HC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 35. За іншим варіантом здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить LC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 31, і HC, представлений послідовністю SEQ ID NO: 36. За одним із варіантів здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить два легкі ланцюги і два важкі ланцюги, де амінокислотна послідовність кожного LC представлена послідовністю SEQ ID NO: 27, і амінокислотна послідовність кожного HC представлена послідовністю SEQ ID NO: 32. За одним із варіантів здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить два легкі ланцюги і два важкі ланцюги, де амінокислотна послідовність кожного LC представлена послідовністю SEQ ID NO: 28, і амінокислотна послідовність кожного HC представлена послідовністю SEQ ID NO: 33. За одним із варіантів здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить два легкі ланцюги і два важкі ланцюги, де амінокислотна послідовність кожного LC представлена послідовністю SEQ ID NO: 29, і амінокислотна послідовність кожного HC представлена послідовністю SEQ ID NO: 34. За одним із варіантів здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить два легкі ланцюги і два важкі ланцюги, де амінокислотна послідовність кожного LC представлена послідовністю SEQ ID NO: 30, і амінокислотна послідовність кожного HC представлена послідовністю SEQ ID NO: 35. За одним із варіантів здійснення цього винаходу людське генно-інженерне антитіло проти CGRP містить два легкі ланцюги і два важкі ланцюги, де амінокислотна послідовність кожного LC представлена послідовністю SEQ ID NO: 31, і амінокислотна послідовність кожного HC представлена послідовністю SEQ ID NO: 36. Цим винаходом також запропонований антигензв'язувальний фрагмент антитіл, опис яких наведений вище. Цим винаходом також запропоновані людські генно-інженерні антитіла проти CGRP, які мають IC50