Аналоги глюкагоноподібного пептиду 2 (glp-2)

1. Аналог глюкагоноподібного пептиду 2 (GLP2), що представлений загальною Формулою I: 1 1 R -Z -His-X2-X3-Gly-X5-X6-X7-Ser-X9-X10-X11-X12X13-X14-X15-X16-X17-Ala-X19-X20-X21-Phe-Ile2 2 X24-Trp-Leu-Ile-X28-Thr-Lys-X31-X32-X33-Z -R , у якій: 1 R – водень, С1-4-алкіл (наприклад метил), ацетил, форміл, бензоїл або трифторацетил X2 – Gly, Ala або Sar, X3 – Glu або Asp, X5 – Ser або Thr, X6 – Phe або Pro, X7 – Ser або Thr, X9 – Glu або Asp X10 – Met, Leu, Nle або окисностійка Metзаміняюча амінокислота, 2 (19) 1 3 X28 - Gln, Ala або Asn, X31 - Pro, Ile або вилучений, X32 - Thr або вилучений, X33 - Asp або вилучений, 2 R – NH2 або OH; 1 2 Z та Z - незалежно відсутні або являють собою пептидну послідовність з 3-20 амінокислотних одиниць, відібраних із групи, що складається із Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met та Orn; або його фармацевтично прийнятна сіль чи похідна. 3. Аналог GLP-2 за п. 1 або п. 2, представлений загальною Формулою III: 1 1 R -Z -His-Gly-X3-Gly-X5-Phe-X7-Ser-Glu-X10-X11Thr-Ile-Leu-Asp-X16-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile2 2 X24-Trp-Leu-Ile-X28-Thr-Lys-X31-X32-X33-Z -R , де: 1 R – водень, С1-4-алкіл (наприклад метил), ацетил, форміл, бензоїл або трифторацетил, X3 – Glu або Asp, X5 – Ser або Thr, X7 - Ser або Thr, X10 - Met, Leu, Nle або окисностійка Met-заміняюча амінокислота, X11 - Asn, Ala, Lys або Ser, X24 - Asn або Ala, X28 - Gln або Ala, X31 - Ile або вилучений, X32 - Thr або вилучений, X33 - Asp або вилучений, 2 R – NH2 або OH; 1 2 Z та Z - незалежно відсутні або являють собою пептидну послідовність з 3-20 амінокислотних одиниць, відібраних із групи, що складається із Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met та Orn; або його фармацевтично прийнятна сіль чи похідна. 4. Аналог GLP-2 за будь-яким з пп. 1-3, де аналог GLP-2 має принаймні 60 % ідентичності амінокислотної послідовності до GLP-2 (1-33) дикого типу і має біологічну активність, що спричиняє збільшення маси кишечника in vivo. 5. Аналог GLP-2 за будь-яким з пп. 1-4, де аналог GLP-2 додатково включає заміну у одному або більше положеннях X16, X24 та X28 та необов’язково заміну у одному або більше в положеннях X3, X5, X7, X10 та/або X11. 6. Аналог GLP-2 за п. 5, де вказані заміни в положенні X10 являють собою Leu, Nle або окисностійку Met-заміняючу амінокислоту, таку як Met(O) або Met(O)2. 7. Аналог GLP-2 за п. 5, де вказані заміни в положенні X11 являють собою Ala, Ser або Lys. 8. Аналог GLP-2 за п. 4, де аналог GLP-2 включає одну або кілька з наступних груп замін: Ala16; Ala24; Ala28; Ala16, Ala24; Ala16, Ala28; Ala24, Ala28; Ala16, Ala24, Ala28. 95235 4 9. Аналог GLP-2 за п. 5, де аналог GLP-2 включає одну або кілька з наступних груп замін: Glu3, Thr5, Leu10, Lys11, Ala16, 24, 28; Glu3, Thr5, Ser11, Leu10, Ala16, 24, 28; Glu3, Thr5, Ser11, Leu10, Ala16, 24, 28; Glu3, Ser11, Leu10, Ala16, 24, 28; Glu3, Thr5, Leu10, Ala11, 16, 24, 28; Glu3, Leu10, Ala11, 16, 24, 28; Thr7, Leu10, Ser11, Ala24; Thr7, Leu10, Ala11, 24; Thr7, Leu10, Lys11, Ala24; Leu10, Ala11, 24; Leu10, Ser11, Ala24; або делецію в одному або кількох положеннях X31X33. 10. Аналог GLP-2 за п. 1, що являє собою: 1846HHGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK6NH2. 11. Аналог GLP-2 за п. 1, що являє собою: 1848HHGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK6-NH2. 12. Аналог GLP-2 за п. 1, що являє собою: 1818HHGDGSFSSELATILDNLAARDFIAWLIQTKKKKKKKNH2; 1820HHGDGSFTSELATILDNLAARDFIAWLIQTKKKKKKKNH2; 1823HHGDGSFTSELKTILDNLAARDFIAWLIQTKKKKKKKNH2; 1825H-HGDGSFSSELATILDNLAARDFIAWLIQTKNH2; 1828HHGDGSFTSELSTILDNLAARDFIAWLIQTKKKKKKKNH2; 1829HHGDGSFSSELSTILDNLAARDFIAWLIQTKKKKKKKNH2; 1832H-HGDGSFTSELSTILDNLAARDFIAWLIQTKNH2; 1833H-HGDGSFSSELSTILDNLAARDFIAWLIQTKNH2; 1834H-HGDGSFTSELATILDNLAARDFIAWLIQTKNH2; 1842H-HGDGSFTSELKTILDNLAARDFIAWLIQTKNH2; 1844HHGEGTFSSELSTILDALAARDFIAWLIATITDKKKKKK-NH2; 1849HHGEGSFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK6NH2; 1852HHGEGTFSSELKTILDALAARDFIAWLIATITDKKKKKK-NH2; 1853HHGEGTFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2; 1855HHGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2; 1857HHGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2; 1858HHGEGSFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2; 5 1861HHGEGTFSSELKTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2; або його фармацевтично прийнятна сіль. 13. Аналог GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12 для застосування в терапії. 14. Фармацевтична композиція, що включає аналог GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12 або його сіль чи похідну, у комбінації з носієм. 15. Фармацевтична композиція за п. 14, де аналог GLP-2 являє собою фармацевтично прийнятну сіль приєднання кислоти. 16. Фармацевтична композиція за п. 14 або за п. 15, що сформульована у вигляді рідини, придатної для введення шляхом ін'єкції або інфузії, або яка сформульована для повільного вивільнення вказаного аналога GLP-2. 17. Застосування аналога GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12 для приготування лікарського засобу для лікування та/або профілактики розладу, пов'язаного зі шлунком або кишечником. 18. Застосування за п. 17, де розлад, пов'язаний зі шлунком або кишечником, являє собою виразки, гастрити, розлади травлення, синдроми порушеного кишкового всмоктування (мальадсорбції), синдром короткого кишечника, синдром «сліпого мішка», запальну хворобу кишечника, целіакічне спру (наприклад, що виникає внаслідок глютеніндукованої ентеропатії або целіакії), тропічне спру, гіпогаммаглобулінемічне спру, ентерит, регіональний ентерит (хвороба Крона), виразковий коліт, синдром подразненого кишечника, пов'язаний з діареєю, ушкодження тонкого кишечника та синдром короткого кишечника. 19. Застосування за п. 17, де розлад, пов'язаний зі шлунком або кишечником, являє собою променевий ентерит, інфекційний або постінфекційний ентерит або ушкодження тонкого кишечника внаслідок дії токсичних або інших хіміотерапевтичних агентів. 20. Застосування аналога GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12 для приготування лікарського засобу для лікування та/або профілактики побічного ефекту хіміотерапії або променевої терапії. 21. Застосування за п. 20, де побічний ефект являє собою діарею, абдомінальні судоми або блювання, внаслідок хіміотерапії, або структурне та функціональне ушкодження кишкового епітелію внаслідок хіміотерапії або променевої терапії. 22. Застосування аналога GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12 для приготування лікарського засобу для лікування порушеної функції кишечника у новонароджених, остеопорозу або DPP-IV (дипептидилпептидаза-IV)-опосередкованих станів. 23. Застосування аналога GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12 для приготування лікарського засобу для лікування та/або профілактики стану, що включає недостатнє харчування. 24. Застосування вимоги за п. 23, де стан, що включає недостатнє харчування, являє собою кахексію або анорексію. 25. Молекула нуклеїнової кислоти, що включає послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує аналог GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12. 26. Вектор експресії, що включає послідовність нуклеїнової кислоти за п. 25, у комбінації з контро 95235 6 льними послідовностями для спрямування його експресії. 27. Клітина-хазяїн, трансформована вектором експресії за п. 26. 28. Спосіб продукування аналога GLP-2 за будьяким з пп. 1-12, спосіб, що включає культурування клітин-хазяїнів за п. 27 за умов, що підходять для експресії аналога GLP-2, та очистку аналога GLP2, отриманого таким чином. 29. Молекула нуклеїнової кислоти за п. 25, вектор експресії за п. 26 або клітина-хазяїн за п. 27 для застосування в терапії. 30. Застосування молекули нуклеїнової кислоти за п. 25, вектора експресії за п. 26 або клітинихазяїна за п. 27 для приготування лікарського засобу для лікування та/або профілактики розладу, пов'язаного зі шлунком або кишечником, або для лікування та/або профілактики побічного ефекту хіміотерапії або променевої терапії, або для лікування порушеної функції кишечника у новонароджених, остеопорозу або DPP-IV (дипептидилпептидаза-IV)-опосередкованих станів. 31. Спосіб лікування розладу, пов'язаного зі шлунком або кишечником, у пацієнта, який потребує такого лікування, шляхом введення ефективної кількості аналога GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12, нуклеїнової кислоти за п. 25, вектора експресії за п. 26 чи клітини-хазяїна за п. 27. 32. Спосіб за п. 31, де розлад, пов'язаний зі шлунком або кишечником, являє собою виразки, гастрити, розлади травлення, синдроми порушеного кишкового всмоктування (мальадсорбції), синдром короткого кишечника, синдром «сліпого мішка», запальну хворобу кишечника, целіакічне спру (наприклад, що виникає внаслідок глютен-індукованої ентеропатії або целіакії), тропічне спру, гіпогаммаглобулінемічне спру, ентерит, регіональний ентерит (хвороба Крона), виразковий коліт, синдром подразненого кишечника, пов'язаний з діареєю, ушкодження тонкого кишечника та синдром короткого кишечника. 33. Спосіб за п. 31, де розлад, пов'язаний зі шлунком або кишечником, являє собою променевий ентерит, інфекційний або постінфекційний ентерит або ушкодження тонкого кишечника внаслідок дії токсичних або інших хіміотерапевтичних агентів. 34. Спосіб лікування або профілактики побічного ефекту хіміотерапії або променевої терапії у пацієнта, який потребує такого лікування, спосіб, що включає введення ефективної кількості аналога GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12, нуклеїнової кислоти за п. 25, вектора експресії за п. 26 чи клітинихазяїна за п. 27. 35. Спосіб за п. 34, де побічний ефект являє собою діарею, абдомінальні судоми або блювання, внаслідок хіміотерапії, або структурне та функціональне ушкодження кишкового епітелію внаслідок хіміотерапії або променевої терапії. 36. Спосіб лікування захворювань порушеної функції кишечника у новонароджених, ожиріння, остеопорозу або DPP-IV (дипептидилпептидаза-IV)опосередкованих станів у пацієнта, який потребує такого лікування, де спосіб включає введення ефективної кількості аналога GLP-2 за будь-яким з 7 95235 8 пп. 1-12, нуклеїнової кислоти за п. 25, вектора експресії за п. 26 чи клітини-хазяїна за п. 27. 37. Терапевтичний набір, що включає препарат для протиракової хіміотерапії та аналог GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12, молекулу нуклеїнової кислоти за п. 25, вектор експресії за п. 26 або клітинухазяїна за п. 27, кожен компонент може нео бов’язково бути в комбінації з фармацевтично прийнятним носієм. 38. Фармацевтична композиція, що включає препарат для протиракової хіміотерапії та аналог GLP-2 за будь-яким з пп. 1-12, молекулу нуклеїнової кислоти за п. 25, вектор експресії за п. 26 або клітину-хазяїна за п. 27 у комбінації з фармацевтично прийнятним носієм. Даний винахід стосується аналогів глюкагонподібного-пептиду-2 (GLP-2) і їх медичного застосування, наприклад, для профілактики або лікування розладів, пов'язаних зі шлунком або кишечником, і для полегшення побічних ефектів хіміотерапії й променевої терапії. GLP-2 - пептид з 33 амінокислот, що виділяється при посттрансляційному процесингу проглюкагону в ентероендокринних L клітинах кишечнику й у певних ділянках стовбура мозку. Він секрету ється разом з глюкагон-подібним пептидом 1 (GLP-1), оксинтомодуліном й гліцентином, у відповідь на споживання поживних речовин. GLP-2 викликає значний ріст епітелію слизової оболонки тонкої кишки через стимуляцію проліферації стовбурових клітин в криптах і інгібування апоптозу на ворсинках (Drucker et al. Proc Natl Acad Sci USA. 1996, 93:7911-6). GLP-2 також інгібує випорожнення шлунку й секрецію шлункової кислоти (Wojdemann et al. J Clin Endocrinol Metab. 1999, 84:2513-7), збільшує бар'єрну функцію кишечнику (Benjamin et al Gut. 2000, 47:112-9.), стимулює транспорт гексоз у кишечнику через позитивну регуляцію транспортерів глюкози (Cheeseman, Am J Physiol. 1997, R1965-71), і збільшує кровотік у кишечнику (Guan et al. Gastroenterology. 2003, 125, 136-47). GLP-2 зв'язується з єдиним спареним з G білком рецептором, що належить до родини глюкагонсекретинів класу II (1). Рецептор GLP-2 був локалізований тільки у тонкій кишці, товстій кишці й шлунку, місцях, які, як відомо, є чутливими до GLP-2 (Yusta et al. Gastroenterology. 2000, 119: 744-55). Однак, клітина-мішень для стимуляції рецептора GLP-2 у шлунково-кишковому тракті залишається нез'ясованою, і низхідні внутрішньоклітинні медіатори, спарені з рецептором GLP-2, вивчені погано. Продемонстровані специфічні і сприятливі ефекти GLP-2 у тонкій кишці викликали великий інтерес щодо застосування GLP-2 в лікуванні хвороб або уражень кишечника (Sinclair and Drucker, Physiology 2005: 357-65). Крім того, GLP-2, як показано, запобігає або зменшує ушкодження епітелію слизової оболонки в цілій низці доклінічних моделей уражень кишки, включаючи викликаний хіміотерапією мукозит, ішемічне-реперфузійне ураження, викликаний декстран-сульфатом коліт і генетичні моделі запальної хвороби кишечника (Sinclair and Drucker, Physiology 2005: 357-65). GLP-2 секретується як 33-амінокислотний пептид з наступною послідовністю H-His-Ala-Asp-Gly-SerPhe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-LeuAla-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys Ile-Thr-Asp-OH. Він швидко розщеплюється ферментом DPP IV на Аланіні (А) у положенні 2 NH2 кінця до неактивного людського GLP-2 (3-33). Ця швидка ферментативна деградація GLP-2 (1-33), на додаток до ниркового кліренсу, зумовлюють період напіввиведення, що становить приблизно 7 хвилин для пептиду (Tavares et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 278:E134-E139,2000). У патенті США 5 994 500 (Dracker et al.) описуються антагоністи GLP-2 й їхні ефекти на ріст тканини шлунково-кишкового тракту. Це свідчить про те, що антагоністи готують у вигляді фармацевтичних препаратів, які використовуються при лікуванні гіперплазії або для індукування гіпоплазії. У патенті США 5 994 500 структура ссавцевого GLP-2 була змінена за допомогою мутацій, таких як заміни і делеції. В патентах США 6 184 208; США 5 789 379 і США 6 184 201 описуються аналоги GLP-2 й їхні медичні використання. Всі аналоги отримані замінами та/або делеціями людського GLP-2. DaCambra et al. (Biochemistry 2000, 39, 88888894) описують структурні детермінанти для активності GLP-2. Приклади таких детермінант - Phe6 й Thr5, які згадуються як критичні для зв'язування й активації рецептора GLP-2. У WO 97/39031 описується аналог GLP-2, [Gly2]GLP-2. В ньому аланін у положенні 2 був замінений гліцином, щоб зробити пептид стійким до розщеплення DPP IV. Заміна аланіна, як показано, збільшує стабільність і ефективність пептиду. Патентна заявка описує, як аналог GLP-2 може використовуватися для боротьби з хворобами, пов'язаними із запаленням та деструкцією епітеліальної слизової оболонки кишечника. До них належать обширна резекція тонкої кишки, запальна хвороба кишечника, викликаний хіміотерапією мукозит й ішемічне ураження. WO 02/066511 описує аналоги GLP-2, що мають збільшений період напіввиведення in vivo й їх застосування у якості лікарських засобів для лікування шлунково-кишкових розладів, таких як запальні хвороби кишечника. WO 01/41779 описує застосування h[Gly2]GLP2 у якості попереднього лікування для інгібування викликаного хіміотерапією апоптозу і сприяння виживання клітин. Всі посилання, процитовані авторами, чітко включені шляхом посилання у повному обсязі. Застосування GLP-2 або аналогів GLP-2 для лікування різних хвороб було запропоновано багатьма вченими. Однак, все ще існує потреба в поліпшених і стійких аналогах GLP-2. 9 Широко, даний винахід стосується аналогів GLP-2, які включають одну з кількох замін у порівнянні з диким типом GLP-2 й які можуть мати властивість поліпшеної біологічної активності in vivo та/або поліпшеної хімічної стабільності, наприклад, за оцінками випробувань стабільності in vitro. Більше конкретно, оптимальні аналоги GLP-2 даного винаходу включають заміни в одному або кількох положеннях 8, 16, 24 та/або 28 послідовності дикого типу GLP-2, необов'язково в комбінації з подальшими замінами в положенні 2 (як згадано у вступі) і одному або кількох положеннях З, 5, 7,10 й 11, та/або делецію однієї або кількох амінокислот, що відповідають положенням 31-33 послідовності дикого типу GLP-2 та/або додавання Nкінцевої або С-кінцевої стабілізуючої пептидної послідовності. Поряд із забезпеченням аналогів GLP-2, які можуть мати покращену хімічну стабільність та/або біологічну активність, даний винахід також стосується забезпечення сполук, які мають селективну активність, що сприяє росту тканин кишки, у тонкому кишечнику в порівнянні із товстим кишечником й навпаки, особливо шляхом включення модифікації в одне або кілька положень Asp3 та/або Ser8 та/або Asn16 та/або Asn24 та/або Gln28 дикого типу GLP-2. Відповідно, в одному аспекті, даний винахід пропонує аналог GLP-2, що представлений загальною Формулою І: 1 1 R -Z -His-X2-X3-Gly-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11X12-X13-X14-X15-X16-X17-Ala-X19-Х20-Х21-Рhе2 2 Іlе-Х24-Тrp-Leu-Іlе-Х28-Тhr-Lуs-Х31-Х32-Х33-Z -R де: R1 - водень, С1-4 алкіл (наприклад метил), ацетил, форміл, бензоїл або трифторацетил Х2 - Gly, Ala або Sar Х3 - Glu або Asp Х5 - Ser або Thr X6 - Phe або Pro X7 - Ser або Thr X8 - Asp або Ser X9 - Glu або Asp X10 - Met, Leu, Nle або окисно стійка Metзаміняюча амінокислота X11 - Asn, Ala, Lys або Ser X12-Thr або Lys X13-Ile,Glu або Gln X14 - Leu, Met або Nle X15 - Asp або Glu X16 - Asn або Ala X17 - Leu або Glu Х18 - Аlа або Aib Х19 - Аlа або Thr X20 - Arg або Lys X21 - Asp або lle X24 - Asn, Ala або Glu X28 - Gln, Ala або Asn X31 - Pro, lle або вилучений X32 - Thr або вилучений Х33 - Asp, Asn або вилучений 2 R -NH2 або ОН; 1 2 Ζ й Ζ - незалежно відсутні або являють собою пептидну послідовність з 3-20 амінокислотних одиниць, відібраних із групи, що складається із 95235 10 Ala, Leu, Ser, Thr, Туr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met й Orn; де аналог GLP-2 включає одну або кілька замін, відібраних із Х8 - Ser та/або X16 - Ala та/або Х24 - Ala та/або Х28 - Ala; або його фармацевтично прийнятна сіль чи похідна. У ще одному варіанті втілення, даний винахід пропонує аналог GLP-2, представлений загальною Формулою II: 1 1 R -Z -His-Gly-X3-Gly-X5-Phe-X7-X8-X9-X10X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-Ala-X19-Arg-AspPhe-Ile-X24-Trp-Leu-Ile-X28-Thr-Lys-X31 -X32-X332 2 Z -R де: R1 - водень, С1-4 алкіл (наприклад метил), ацетил, форміл, бензоїл або трифторацетил Х3 - Glu або Asp X5 -Ser або Thr X7 -Ser або Thr X8 - Asp або Ser X9 - Glu або Asp X10 - Met, Leu,Nle або окисно стійка Metзаміняюча амінокислота X11 - Asn, Ala, Lys або Ser X12 - Thr або Lys X13 - Ile,Glu або Gln X14 - Leu, Met або Nle X15 - Asp або Glu X16 - Asn або Ala X17 - Leu або Glu Х19 - Аlа або Thr X24 - Asn або Ala X28 - Gln, Ala або Asn X31 - Pro, lle або вилучений X32 - Thr або вилучений Х33 - Asp або вилучений 2 R -NH2 або ОН; 1 2 Ζ й Ζ - незалежно відсутні або являють собою пептидну послідовність з 3-20 амінокислотних одиниць, відібраних із групи, що складається із Ala, Leu, Ser, Thr, Туr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met й Orn; де аналог GLP-2 включає одну або кілька замін, відібраних із Х8 - Ser та/або X16 - Ala та/або Х24 - Ala та/або Х28 - Ala; або його фармацевтично прийнятна сіль чи похідна. У ще одному варіанті втілення, даний винахід пропонує аналог GLP-2, представлений загальною Формулою III: 1 1 R -Z -His-Gly-X3-Gly-X5-Phe-X7-X8-Glu-X10X11-Thr-Ile-Leu-Asp-X16-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe2 2 Ile-X24-Trp-Leu-Ile-X28-Thr-Lys-X31-X32-X33-Z -R де: R1 - водень, С1-4 алкіл (наприклад метил), ацетил, форміл, бензоїл або трифторацетил Х3-Glu або Asp Х5 - Ser або Thr Х7 - Ser або Thr Х8 - Asp або Ser Χ10 - Met, Leu, Nle або окисно стійка Metзаміняюча амінокислота X11 - Asn, Ala, Lys або Ser X24 - Asn або Ala 11 X28 - Gln або Ala X31 - Pro або вилучений X32 - Thr або вилучений Х33 - Asp або вилучений 2 R -NH2 або ОН; 1 2 Ζ й Ζ - незалежно відсутні або являють собою пептидну послідовність з 3-20 амінокислотних одиниць, відібраних із групи, що складається із Ala, Leu, Ser, Thr, Туr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met й Orn; де аналог GLP-2 включає одну або кілька замін, відібраних із Х8 - Ser та/або X16 - Ala та/або Х24 - Ala та/або Х28 - Ala; або його фармацевтично прийнятна сіль чи похідна. У разі, якщо X16 не Ala, він буде Asn. У певних варіантах втілення, коли присутній 1 1 2 2 Z , R може бути Н, а коли присутній Z , R може бути ОН. У деяких варіантах втілення даного винаходу, аналог GLP-2 має принаймні 60% ідентичності амінокислотної послідовності до дикого типу GLP2 (1-33), який має послідовність, викладену у вступі заявки, більш бажано принаймні 63% ідентичності послідовності, більш бажано принаймні 66% ідентичності послідовність й ще більш бажано принаймні 69% ідентичності послідовності. "Відсоток (%) ідентичності амінокислотної послідовності" щодо поліпептидної послідовності GLP-2 визначається як відсоток амінокислотних залишків в послідовності-кандидаті, які є ідентичними амінокислотним залишкам в послідовності GLP-2 дикого типу, після вирівнювання послідовностей і введення проміжків, у разі необхідності, для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовності, і не розглядаючи будь-які консервативні заміни як частину ідентичності послідовності. Вирівнювання послідовності може бути виконано кваліфікованим спеціалістом за допомогою методів, відомих в даній галузі, наприклад за допомогою загально доступного програмного забезпечення, типу програмного забезпечення BLAST, BLAST2 або Align, див.: Altschul et al (Methods in Enzymology, 266:460480 (1996); http://blast.wustl/eduMast/README.html) або Pearson et al (Genomics, 46, 24,36,1997) і http://molbiol.soton.ac.uk/compute/align.html для програми Align. Відсотки ідентичності послідовності, що використовуються авторами і відповідно до даного винаходу визначаються з використанням цих програм з їхніми параметрами настроювання за замовчуванням. Більш широко, кваліфікований спеціаліст може легко визначити відповідні параметри для визначення вирівнювання, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по повній довжині порівнюваних послідовностей. У деяких оптимальних варіантах втілення, аналоги пептиду GLP-2, представлені Формулою І, II або III, включають заміни в більш ніж одному з положень Х8, Х16, Х24 та/або Х28 та/або комбінації цих замін з іншими замінами, переважно в положеннях Х3, Х5,Х7, X10 та/або X11. 95235 12 Приклади комбінацій замін Х8, X16, Х24 та/або Х28, які перебувають у межах Формул І - III, включають: Ser8,Ala16 Ser8, Ala24 Ser8, Ala28 Ala16, Ala24 Ala16, Ala28 Ala24, Ala28 Ser8, Ala16, Ala24 Ser8, Ala16, Ala28 Ser8, Ala24, Ala28 Ala16, Ala24, Ala28 Ser8, Ala16, Ala24, Ala28 Приклади замін у положеннях Х3, Х5, Х7, X10 та/або X11, які перебувають у межах Формул І - III і можуть бути об'єднані із заміною в одному або кількох положеннях Х8, X16, Х24 та/або Х28 включають: Glu3, Leu10, Ala11,24 Glu3, Thr5, Leu10, Ser11, Ala16,24,28 Glu3, Thr5, Leu10, Lys11, Ala16,24,28 Glu3, Thr5, Ser8, Leu10, Lys11, Ala16,24,28 Glu3, Thr5, Ser8,11, Leu10, Ala16,24,28 Glu3, Thr5, Ser8,11, Leu10, Ala16,24,28 Glu3, Ser8,11, Leu10, Ala16,24,28 Glu3, Leu10, Ser11, Ala16,24,28 Glu3, Leu10, Lys11, Ala16,24,28 Glu3, Thr5, Leu10, Ala11,16,24,28 Glu3, Thr5, Leu10, Ala11,16,24,28, Ile21 Glu3, Thr5, Ser8, Leu10, Ala11,16,24,28 Glu3, Ser8, Leu10, Ala11,16,24,28 Glu3, Leu10, Ala11,16,24,28 Thr7, Leu10, Ala11,24 Thr7, Leu10, Lys11, Ala24 Thr7, Leu10, Ser 11, Ala24 Thr7, Leu10, Ser8,11, Ala24 Thr7, Ser8, Leu10, Ala11,24 Thr7, Ser8, Leu10, Lys11, Ala24 Ser8, Leu10, Ala11,24 Leu10, Ala24 Leu10, Ala11, Ala24 Leu10, Ala11,24,28 Leu10, Ala11,16,24,28 Leu10, Lys11, Ala24 Leu10, Ser 11, Ala24 Leu10, Ser8,11, Ala24 або делецію в одному або кількох положеннях Х31-Х33 у комбінації з вищезгаданою зміною в положенні 8,16,24 та/або 28. Певні приклади сполук GLP-2 даного винаходу викладені в детальному описі нижче. Поряд із забезпеченням аналогів GLP-2, які можуть мати покращену хімічну стабільність та/або біологічну активність, даний винахід також стосується забезпечення сполук, які мають селективну ростостимулюючу активність у тонкому кишечнику в порівнянні із товстим кишечником й навпаки. Зокрема експерименти, описані авторами, показують, що заміни в положеннях Asp3 та/або Ser8 та/або Asn16 та/або Gln28 GLP-2 дикого типу забезпечують селективне збільшення маси тонкого кишечника при введенні експериментальним тваринам у порівнянні зі збільшенням маси товстого кишечника. Ці отримані дані означають, що при 13 клади сполук можуть бути корисними для лікування станів, при яких сприятливо мати збільшений ростостимулюючий ефект у тонкому кишечнику з меншим ефектом на товстий кишечник, і навпаки. Таким чином, сполуки, які є оптимальними для стимуляції росту тонкого кишечника типово включають одну або кілька замін у положеннях 3, 8, 16 та/або 28 GLP-2 дикого типу. Такі сполуки можуть селективно викликати ріст тонкого кишечника, а не товстого кишечника. Зважаючи на це, вони можуть використовуватися для станів, що впливають або пов'язані з тонким кишечником. Бажано, щоб такі селективні щодо тонкого кишечника сполуки включали заміни в більш ніж одному з положень Х3, Х7, X16, Х24, Х28, Х31, Х32 та/або Х33. Таким чином, селективні щодо тонкого кишечника сполуки можуть включати більш ніж одну із замін Х3 - Glu, Х7 - Ser, X16 - Ala, Х24 - Ala, Х28 - Ala, X31 - He, X32 - Thr і Х33 - Asp. Амінокислотні залишки в положеннях Х31, 5 Х32 й Х33 можуть необов'язково бути вилучені. Приклади сполук, що селективно стимулюють епітеліальний ріст у тонкому кишечнику включають 1809, 1818, 1819, 1820, 1826, 1827, 1844, 1845, 1846, 1848, 1849, 1850, 1851, 1852, 1853, 1855, 1857, 1858, 1859. З іншого боку, сполуки даного винаходу, які не мають цих модифікацій, наприклад, ті, які включають одну або кілька замін у положеннях 10, 11 та/або 24, може бути оптимальними для індукування селективного росту товстого кишечника, а не тонкого кишечника. Зважаючи на це, вони можуть використовуватися для лікування станів, що впливають або пов'язані з товстим кишечником. Такі селективні щодо товстого кишечника сполуки можуть включати більш ніж одну із замін у положеннях Х3, Х8 та/або Х24. Наприклад, вони можуть включати більш ніж одну заміну, відібрану з Х3 - Asp, Х8 - Asp і Х24 - Ala. Амінокислотні залишки в положеннях Х31, Х32 й Х33 можуть необов'язково бути вилучені. Приклади сполук, що селективно стимулюють епітеліальний ріст у товстому кишечнику включають 1830, 1831,1835, 1836, 1839, 1840, 1841 й 1843. Приклади сполуки без селективного росту в тонкому кишечнику або товстому кишечнику: [Gly2]GLP-2 (тобто, референтна молекула), 1559, 1821, 1822, 1823, 1825, 1828, 1829, 1832, 1833, 1834, 1842, 1854. Сполуки відповідно до винаходу також мають збільшену хімічну стабільність, наприклад щодо кислотного гідролізу, окиснення й дезамідування. Вважається, що заміни в положеннях Х3 та/або Х33 можуть поліпшити стабільність до кислотного гідролізу. Заміна в положенні X10 може поліпшити окисну стабільність. Заміна в одному або кількох положеннях X11, X16 та/або Х24 можуть збільшити стабільність щодо дезамідування. Зважаючи на це, аналог GLP-2 відповідно до винаходу може виявляти збільшену стабільність до деградації в кислому розчині, до дезамідування та/або до окисної деградації, відносно Gly2-GLP-2. Бажано, щоб у аналога GLP-2 спостерігалася чистота принаймні 70 % щодо початкової чистоти 95235 14 в принаймні одному з тестів деградації, описаних у Прикладі 7 нижче. Додатково або альтернативно, у нього може спостерігатися чистота принаймні 60 % щодо початкової чистоти в розчині НСІ 0,1 Μ через 12 днів. Додатково або альтернативно, у нього може спостерігатися чистота принаймні 70 % щодо початкової чистоти в розчині NH4HCO3 0,1 Μ через 6 днів. У ще одному аспекті, даний винахід пропонує композицію, що включає аналог GLP-2, визначений авторами, або його сіль чи похідна, у комбінації з носієм. В оптимальних варіантах втілення, композиція представляє собою фармацевтично прийнятну композицію, а носій представляє собою фармацевтично прийнятний носій. Аналог пептиду GLP-2 може представляти собою фармацевтично прийнятну кислотно-адитивну сіль аналога GLP-2. У ще одному аспекті, даний винахід пропонує аналог GLP-2, визначений авторами, або його сіль, для застосування в терапії. У ще одному аспекті, даний винахід пропонує застосування аналога GLP-2, або його солі чи похідного для приготування лікарського засобу для лікування та/або профілактики розладів, пов'язаних зі шлунком або кишечником, таких як лікування новонароджених з порушеною функцією кишечника, остеопорозу і DPP-IV (дипептидилпептидаза-ІV)-опосередкованих станів. За наведеним прикладом, розлади, пов'язані зі шлунком або кишечником, включають виразки, гастрит, розлади травлення, синдроми порушеного кишкового всмоктування (мальадсорбції), синдром короткого кишечника, синдром «сліпого мішка», запальну хворобу кишечника, целіакічне спру (наприклад, що виникає внаслідок глютеніндукованої ентеропатії, або целіакії), тропічне спру, гіпогаммаглобулінемічне спру, ентерит, регіональний ентерит (хвороба Крона), виразковий коліт, синдром подразненого кишечника, пов'язаний з діареєю, ушкодження тонкого кишечника й синдром короткого кишечника. Інші стани, які можна лікувати аналогами GLP2 винаходу, або для якого аналоги GLP-2 можуть бути корисними профілактично або терапевтично, включають променевий ентерит, інфекційний або постінфекційний ентерит, і ушкодження тонкого кишечника внаслідок дії токсичних або інших хіміотерапевтичних агентів. Це може потребувати введення аналога GLP-2 до, разом або після курсу хіміотерапії або променевої терапії для зменшення побічних ефектів хіміотерапії, таких як діарея, судоми черевної порожнини і блювання, і зниження наступного структурного й функціонального ушкодження кишкового епітелію, що виникає внаслідок хіміотерапії або променевої терапії. Тому винахід також пропонує терапевтичний комплект, що включає препарат протиракової хіміотерапії й аналог GLP-2 відповідно до даного винаходу, кожен необов'язково в комбінації з фармацевтично прийнятним носієм. Два терапевтичних агенти можуть бути запаковані окремо (наприклад, в окремих флаконах) для окремого введення, або можуть надаватися в тій же композиції. Таким чином, винахід додатково забезпечує фармацевтичну композицію, що вклю 15 чає препарат протиракової хіміотерапії й аналог GLP-2 відповідно до даного винаходу в комбінації з фармацевтично прийнятним носієм. Для пацієнтів, які страждають на неоплазію слизової оболонки щлунковокишкового тракту, або належать до групи підвищеного ризику розвитку неоплазії слизової оболонки шлунково-кишкового тракту, може бути бажаним обрати сполуку з метою зменшити абонівелювати ризик знижених побічних ефектів, таких як стимуляція або загострення неоплазії слизової оболонки шлунковокишкового тракту. Наприклад, при виборі сполуки для лікування пацієнта з неоплазією товстого кишечника (доброякісної чи злоякісної), або який належить до групи ризику розвитку неоплазії товстого кишечника, може виявитися більш доцільним обрати сполуку, що є селективною щодо тонкого кишечника у порівнянні з товстим кишечником, ніж не селективну сполуку або сполуку, що є селективною щодо товстого кишечника у порівнянні з тонким кишечником. В інших аспектах, даний винахід пропонує застосування аналогів GLP-2 для приготування лікарського засобу для лікування та/або профілактики недостатнього харчування, наприклад таких станів, як синдром виснаження кахексія й анорексія. В ще одному аспекті, даний винахід пропонує молекулу нуклеїнової кислоти, що включає послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує аналог GLP-2, визначений авторами. У подальших аспектах, даний винахід пропонує вектор експресії, що включає вищезгадану послідовність нуклеїнової кислоти, необов'язково в комбінації з послідовностями для спрямування її експресії, і клітини-хазяїни, трансформовані за допомогою векторів експресії. Бажано, щоб клітини-хазяїни мали здатність до експресії та секреції аналога GLP-2. В ще іншому аспекті, даний винахід пропонує спосіб продукування аналога GLP-2, спосіб, що включає культурування клітин-хазяїв за умов, що підходять для експресії аналога GLP-2, й очистку аналога GLP-2, отриманого таким чином. Винахід додатково пропонує нуклеїнову кислоту відповідно до винаходу, вектор експресії відповідно до винаходу або клітину-хазяїна, здатну до експресії й секреції аналога GLP-2 відповідно до винаходу, для застосування для терапії. Буде зрозумілим, що нуклеїнова кислота, вектор експресії й клітини-хазяїни можуть використовуватися для лікування будь-якого з розладів, описаних авторами, які можна лікувати за допомогою аналогів GLP-2 безпосередньо. Зважаючи на це, посилання на терапевтичну композицію, що містить аналог GLP-2 відповідно до винаходу, або введення аналога GLP-2 відповідно до винаходу, повинні розглядатися як такі, що охоплюють введення нуклеїнової кислоти, вектора експресії або клітинихазяїна відповідно до винаходу крім випадків, де контекст вимагає іншого. У ще одному аспекті, даний винахід пропонує спосіб лікування розладу, пов'язаного зі шлунком або кишечником, у пацієнта, який потребує такого лікування, шляхом введення ефективної кількості аналога GLP-2, визначеного авторами, або його 95235 16 солі чи похідного, або нуклеїнової кислоти, вектора експресії чи клітини-хазяїна відповідно до винаходу. Приклади розладів, пов'язаних зі шлунком або кишечником, надаються вище. У ще одному аспекті, даний винахід пропонує спосіб лікування або профілактики побічного ефекту хіміотерапії або променевої терапії у пацієнта, який потребує такого лікування, спосіб, що включає введення ефективної кількості аналога GLP-2, визначеного авторами, або його солі чи похідного, або нуклеїнової кислоти, вектора експресії чи клітини-хазяїна відповідно до винаходу. У ще одному аспекті, даний винахід пропонує спосіб лікування або профілактики недостатнього харчування, наприклад таких станів, як синдром виснаження кахексія й анорексія, у пацієнта, який потребує такого лікування, спосіб, що включає введення ефективної кількості аналога GLP-2, визначеного авторами, або його солі чи похідного, або нуклеїнової кислоти, вектора експресії чи клітини-хазяїна відповідно до винаходу. Варіанти втілення даного винаходу будуть тепер описані більш докладно за допомогою прикладів і не обмежуються супровідними фігурами. Фігура 1: Приклади даних залежності повна доза-відповідь дії чотирьох селективних щодо тонкого кишечника сполук (сполуки №№ 1846, 1855, 1848 й 1858) на масу тонкого кишечника (SI) у мишей C57BL. Сполуки вводилися шляхом підшкірної ін'єкції двічі на добу протягом трьох днів у наступних дозах: 0 (розчинник), 5, 15, 45, 135, 405 нмоль/кг (n = 6/дозову групу). Відповіді на кожному рівні дози порівнювали з відповідями, отриманими на тому ж самому рівні дози в парах мишей, які отримували лікування не селективною референтною сполукою [Gly2]GLP-2. Щоб скоригувати на зміни у масі тіла (BW), маса SI була виражена по відношенню до BW (співвідношення SI-BW), і відповідь у вигляді росту на кожному рівні дози була нормалізована до відповіді, що спостерігалася у випадку з не селективною референтною сполукою [Gly2]GLP-2. Результати продемонстрували, що в межах діапазону доз 5-405 нмоль/кг, взаємозв'язок відповідь-доза для селективних щодо тонкого кишечника сполук 1846, 1855, 1848 й 1858 значно відрізнявся від не селективної референтної сполуки [Gly2]GLP-2 (р