Спосіб створення штучного інфекційного фону гриба polymyxa betae k. – переносника збудника ризоманії буряків

Реферат: Спосіб створення штучного інфекційного фону гриба Роlуmуха betae K. для проведення досліджень у лабораторних умовах, причому проводиться внесення в 50 г стерильного ґрунту 5 г кореневих волосків уражених грибом Роlуmуха betae K. із середнім заселенням 8-10 цистосорусів у полі зору мікроскопа, яке забезпечує рівномірне та стале ураження рослин буряка у подальших дослідженнях. UA 101454 U (12) UA 101454 U UA 101454 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до сільського господарства, зокрема до галузі буряківництва, і може бути використана у великих механізованих сільгосппідприємствах з метою створення штучного інфекційного фону гриба Polymyxa betae K. - переносника збудника ризоманії буряків, для проведення лабораторних досліджень. Гриб Polymyxa betae K. виявлений в усіх зонах бурякосіяння України, але загальна картина інфекційного навантаження ґрунту в літературі відсутня [1, 3, 7]. Дослідження можна проводити на сталому природному інфекційному фоні, проте він змінюється за період вегетації та в залежності від культур, які вирощуються на даному ґрунті [5, 6]. Спостерігається строкатість показника навантаження ґрунту цистосорусами Polymyxa betae K. на сусідніх полях у межах одного господарств [4, 8]. Проте лабораторних досліджень та вивчення стійкості рослин буряка до гриба можна проводити тільки при забезпеченні сталого інфекційного фону, створивши необхідну контрольовану чисельність у певний період часу [2, 5, 6]. Державна фітосанітарна служба для створення лабораторного інфекційного фону відбирає зразки ґрунту за схемою конверту згідно Державного стандарту України ДСТУ 3355-96 (прототип). 2 Згідно з цим стандартом, відбір зразків ґрунту проводиться у 5 місцях на площі 20-25 м . 2 Якщо площа більша, її ділять на секції до 20 м . Загальна маса виїмок ґрунту складає 300 г, а середньої проби - 100 г. Недоліками даного способу є: 1. Він є трудомістким та потребує пошук відомих інфікованих територій грибом Polymyxa betae K. 2. Не гарантує необхідне навантаження ґрунту грибом Polymyxa betae K., що істотно впливає на якість аналізів. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб створення штучного інфекційного фону Polymyxa betae K. - переносника збудника ризоманії буряків з сталим навантаженням ґрунту інфекцією, для проведення лабораторних досліджень та визначання стійкості рослин до гриба. Поставлена задача вирішується тим, що для створення інфекційного фону гриба Polymyxa betae K. використовується стерильний ґрунт масою 50 г отриманого шляхом автоклавування у продовж 40 хв. При 2 атм, 120 °С для знищення всіх мікроорганізмів, в який вносять 5 г кореневих волосків уражених грибом з середнім заселенням 8-10 цистосорусів у полі зору мікроскопа. Запропонований спосіб дозволяє отримати сталий інфекційний фон для проведення дослідів без формування середньої проби та потреби попереднього його визначення "рослинами-пастками". ПРИКЛАДИ ЗДІЙСНЕННЯ СПОСОБІВ Приклад 1 (прототип). Використовуючи схему конверта (Фіг. 1), відбирають зразки ґрунту з орного шару - 300 г з 5 виїмок. Ґрунт розділяють на усереднені проби та аналізують на наявність переносника вірусу некротичного пожовтіння жилок буряків (ВНПЖБ) гриба Polymyxa betae K., використовуючи метод "рослин-пасток". На площах із низьким інфекційним навантаженням гриба ефективність створення фону для лабораторних дослідів за методом конверта нульова. При аналізі ґрунту з точок відбору спостерігається значне коливання показника кількості цистосорусів грибапереносника. Коливання числа цистосорусів у пробах може досягати 50 %. Таким чином, при відборі зразків ґрунту за схемою конверту (прототип) ефективність виявлення показник навантаження ґрунту грибом Polymyxa betae K. характеризується значним коливанням навіть при відборі проб на сусідніх полях у межах одного господарства (таблиця 1). Приклад 2. Спосіб, який рекомендується для створення інфекційного фону передбачає, що у стерильний ґрунт масою 50 г отриманого шляхом автоклавування в продовж 40 хв при 2 атм, 120 °С для знищення всіх мікроорганізмів вносять 5 г кореневих волосків уражених грибом Polymyxa betae K. з середнім заселенням 8-10 цистосорусів в полі зору мікроскопа. Ґрунт зволожують та витримують за температурі 23-25 °C в продовж однієї доби, потім висівають насіння буряків. Після проростання насіння на 10-15 день проводять аналіз заселення кореневих волосків сортів та гібридів цукрових буряків при визначенні їх стійкості або закладку лабораторних дослідів на рослинах. Запропонований спосіб створення інфекційного фону підтверджується експериментальними дослідами за внесення різної кількості інфікованих грибом Polymyxa betae K. корінців при х середньому заселенні 8-10 цистосорусів у полі зору мікроскопа (збільшення 400 ), були відмічені ряд закономірностей. Так, за внесення інфікованих корінців більше ніж 5 г на 50 г ґрунту спостерігається випадання рослин починаючи з 10 дня від початку сходів. У результаті 1 UA 101454 U 5 10 15 20 25 30 чого кількість сходів по відношенню до контролю на 10 день знижується на 7,5 % за внесення 5 г інфікованих корінців, 22,7 % за 7 г та 24,1 % за 10 г. На 15 день зменшення сходів становить 19,6 %, 26,1 % та 26,3 % відповідно (таблиця 2). За внесення 2 г інфікованих корінців грибом Polymyxa betae K. на 50 г ґрунту значних випадань рослин не відмічається і становить в межах 3,1 %. Проте така кількість інфекції забезпечує ураження кореневих волосків у межах 3,8 плазмодіїв у полі зору мікроскопа, що є недостатнім при характеристиці сортової стійкості та достовірності лабораторних досліджень. Оптимальною величиною є внесення 5 г інфікованих грибом Polymyxa betae K. корінців, при х середньому заселенні 8-10 цистосорусів у полі зору мікроскопа (збільшення 400 ) на 50 г ґрунту, що забезпечує інфікування цукрового буряка в межах 8,1 плазмодіїв у полі зору мікроскопа та призводить до незначного випадання рослин. Дані показники є оптимальними для проведення лабораторних дослідів та випробування сортів та гібридів буряків на стійкість до Polymyxa betae K. Джерела інформації: 1. Власов Ю.И. Распространение вируса некротического пожелтения жилок сахарной свеклы / Ю.И. Власов, Е.А. Кременцова // Сахарная свекла. - 1986. - № 5. - С. 41-42. 2. Методика исследований по сахарной свекле [Зубенко В.Ф., Борисюк В.А., Балков И.Я. и др.]. - К.: ВНИС, 1986. - 292 с. 3. Методичні поради з виявлення та локалізації вогнищ ризоманії буряків [Даньков В.Я., Мельник П.О., Соломійчук М.П.]. - Чернівці: Зелена Буковина, 2011. - 32 с. 4. Соломійчук М.П. Динаміка заселення бічних корінців цукрових буряків грибом Polymyxa betae K. в умовах Західного Лісостепу України / М.П. Соломійчук, В.М. Гунчак // Информационный бюллетень ВПРС МОББ (спецвип. приуроченный науч.-практ. симпозиуму "Биологическая защита растений на пути инноваций").- Черновцы-Бояны, 2012. - Вып. № 43.- С. 242-248. 1 5. Asher М. J. KingsnorthC. S. Mutasa-Göttgens E. S С. Development of a recombinant antibody ELISA test for the detection of Polymyxa betae and its use in resistance screening. - December, 2003. - V. 52, Issue 6. - Р. 673-680. 6. Barr K.J. Asher M.J. Lewis B.G. Resistance to Polymyxa betae in wild Beta species. - April, 1995. - V.44, Issue 2. - Р. 301-307. 7. Putz C. Beet necrotic yellow vein virus causal agent of sugar beet Rhizomania/ С Putz, D. Merdinoglu, O. Lemaize, I. Stocky, P. Valentin. - 1990. - № 64. - P. 247-253. 8. Tamada T. Beet necrotic yallow veiv virus/ T. Tamada // CMI/AAB Descriptions of Plant Viruses. - 1975. - № 144. - 4 pp. 35 Таблиця 1 Визначенні динаміки заселення корінців цукрових буряків грибом Polymyxa betae K. при загальному обробітку за відбору ґрунту методом конверта Номер полів згідно з планом 3 6 7 9 12 Кількість цистосорусів (шт.) в полі зору мікроскопа при відборі зразків 1 2 3 4 5 Середнє 6 11 6 9 7 10 10 11 7 6 4 5 6 4 8 9 7 9 12 0 7 8 4 8 3 7,2 8,2 7,2 8,0 4,8 2 UA 101454 U Таблиця 2 Вплив різних ступенів інфікування ґрунту на розвиток рослин цукрового буряка та заселення корінців грибом Polymyxa betae K. Зміни розвитку рослин цукрового буряка на день від появи сходів Кількість корінців, 5-й 10-й 15-й середнє інфікованих кількість кількість кількість кількість грибом Polymyxa кількість кількість кількість кількість плазмоплазмоплазмоплазмоbetae K. сходів, % сходів, % сходів, % сходів, % діїв, шт діїв, шт діїв, шт діїв, шт контроль 80,7 0 94,7 0 93,9 0 89,8 0 2г корінців на 50 г 81,2 2,4 87,6 4,1 91,2 4,8 86,7 3,8 ґрунту 5г корінців на 50 г 79,6 6,2 83,3 8,4 75,5 9,6 79,5 8,1 ґрунту 7г корінців на 50 г 77,4 6,4 73,2 8,8 69,4 10,2 73,3 8,4 ґрунту 10г корінців на 50 78,6 6,7 71,9 9,2 69,2 10,5 73,2 8,8 г ґрунту ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб створення штучного інфекційного фону гриба Роlуmуха betae K. для проведення досліджень у лабораторних умовах, який відрізняється тим, що проводиться внесення в 50 г стерильного ґрунту 5 г кореневих волосків уражених грибом Роlуmуха betae K. із середнім заселенням 8-10 цистосорусів у полі зору мікроскопа, яке забезпечує рівномірне та стале ураження рослин буряка у подальших дослідженнях. Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3