Спосіб покращення контрастування та кольорового насичення гістологічних зрізів при фарбуванні гематоксилін-еозином

Реферат: Спосіб покращення контрастування та кольорового насичення при фарбуванні гістологічних зрізів гематоксилін-еозином, як підсинювальний реагент використовують засіб "Bluing reagent" Richard-Allan Thermo Scientific, який містить (в мас. %): метанол - 50; вода - 48; гідрокарбонат натрію - >1; сульфат магнію - 1 та бромід амонію - >1. UA 108982 U (54) СПОСІБ ПОКРАЩЕННЯ КОНТРАСТУВАННЯ ТА КОЛЬОРОВОГО НАСИЧЕННЯ ГІСТОЛОГІЧНИХ ЗРІЗІВ ПРИ ФАРБУВАННІ ГЕМАТОКСИЛІН-ЕОЗИНОМ UA 108982 U UA 108982 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до ветеринарії і може бути використана у гістологічній техніці для покращення якості гістологічних препаратів, зокрема для підвищення контрастних властивостей при фарбуванні гематоксилін-еозином. Для цього здійснювали обробку гістологічних зрізів після дофарбовування гематоксиліном підсилювальним реагентом "Bluing reagent" Richard-Allan Thermo Scientific, який містить (в мас. %): метанол 50 вода 48 гідрокарбонат натрію >1 сульфат магнію 1 бромід амонію >1. Бромід амонію - це неорганічна сполука, яка являє собою сіль амонію та бромисто-водневої кислоти. Реагує з концентрованою сірчаною кислотою, лугами, магнієм, нітритами лужних металів [Лидин Р.А. и др. Химические свойства неорганических веществ: Учебное пособие для вузов. - 3-е изд., испр. - М: Химия, 2000. - С 146]. Гідрокарбонат натрію - кисла натрієва сіль вугільної кислоти. Реагує з кислотами з утворенням солі й вугільної кислоти, яка одразу ж розпадається на вуглекислий газ і воду [ГОСТ 2156-76 "Натрий двууглекислый. Технические условия"; Деркач Ф. А. Хімія. - Львів. Львівський університет, 1968. - С 208]. Сульфат магнію - сильний відновник; не реагує з лугами, реагує з гарячою водою, розчиненими кислотами, неметалами. Переводиться в розчин солями амонію [Рипан Р., Четяну И. Неорганическая химия. Химия металлов. - М.:Мир, 1971. - Т. 1. - С 182]. При фарбуванні гематоксиліном необхідним етапом є підсинювання зрізів у лужних розчинах для видалення залишків гематоксиліну та для покращення контрастування. З цією метою частіше використовують водопровідну воду або розчин аміаку (1 крапля 10 % розчину аміаку на 100 мл дистильованої води) [Коржевский Д. Э., Гиляров А. В. Основы гистологической техники. - Санкт-Петербург: СпецЛит. 2010. - С 43]. Підсинювальний реагент "Bluing reagent'розчинений у буфері рН=8,0. Обробка препарату займає лише 1 хвилину на відміну від інших підсинювальних реагентів, яким для цього необхідно 5 хвилин. Підсинювальний реагент не вимиває гематоксилін з ядер, а лише чітко виділяє деталі ядра, перешкоджає забрудненню цитоплазми клітин фарбою та утворенню подібних артефактів. Добре фіксує зрізи тканин на предметному склі, не дозволяючи їх змивання на подальших стадіях фарбування. Дослідження показали, що при застосуванні підсинювального реагенту "Bluing reagent" при фарбуванні дослідних гістологічних зрізів підвищилось контрастування компонентів ядра: більш чітко диференціюються ядерце і хроматин, ніж у контрольних зразках. Синій фон у цитоплазмі клітин досліджуваних гістологічних препаратів відсутній, порівняно із препаратами контрольної групи. При фарбуванні рослинних компонентів у м'ясних фаршах відмічено, що при застосуванні підсинювального реагенту "Bluing reagent" більш вираженою стає стільникоподібна структура неочищених карагенанів і чіткіше проявляється поліморфізм і забарвлення очищених карагенанів. Порівняно з контролем, відсутні випадки змивання зрізів тканин з предметного скла. В основу корисної моделі поставлена задача оптимізації фарбування гістологічних зрізів гематоксилін-еозином для підвищення контрастування, насиченості та диференціації тканинних структур, а також зменшення випадків змивання зрізів зі скла. Викладене вище підтверджується наступними прикладами: Приклад 1. Прототип. З метою підсинювання зрізів застосовують промивання у водопровідній воді протягом 10 хвилин. Такий метод ґрунтується на вмісті лугів у водопровідній воді, які, в свою чергу, вступають у реакцію з кислотою фарби. Аналогічно прикладові 1. Недоліком вищезгаданого методу є те, що в різних регіонах склад води відрізняється за хімічними і фізичними показниками, тож результати фарбування не завжди будуть однаковими, також недоліком є тривале промивання - 10 хвилин. Приклад 2. Найближчий прототип. Підсинювальний концентрат "Блік" використовується для підсинювання ядер при фарбуванні гематоксилін-еозином. Застосовується для зрізів, фіксованих формаліном і залитих у парафін, а також для заморожених зрізів фіксованих і нефіксованих тканин. 1 UA 108982 U 5 10 15 20 25 30 Аналогічно прикладові 2. Вищезгаданий засіб застосовується лише в комплексі з диференціювальним реагентом для гематоксиліну, оскільки не має властивостей контрастування та насичення кольором. Тривалість експозиції - 5 хвилин. Також недоліком є те, що готовий розчин концентрату зберігається не більше однієї доби. Концентрат розводять дііонізуючою водою. Приклад 3. Для дослідження властивостей контрастування проводили фарбування гістологічних зрізів гематоксилін-еозином [Методичні вказівки з визначення всіх видів м'ясної сировини, напівфабрикатів та готової продукції з м'ясної сировини / Ложкіна О. В., Меженська Н.А., Далиновська І. Г. та ін. / К., ДНДІ ЛДВСЕ, 2010. - С 12] дослідних зразків, оброблених підсинювальним реагентом "Bluing reagent" та зразків контрольної групи, з обробкою водопровідною водою: 1) видалення парафіну зі зрізів у ксилолі, проведення через низхідний ряд спиртів до дистильованої води, 2) фарбування гематоксиліном - 3 хв, 3) промивання дистильованою водою - 1-2 хв, 4) підсинювальний реагент - 1 хв. (дослідна група, Фіг.2); вода водопровідна - 10 хв. (контрольна група, Фіг.1), 5) фарбування еозином - 1 хв, 6) промивання дистильованою водою - 1-2 хв, 7) дегідратація у висхідному ряді спиртів і просвітлення у двох порціях карбол-ксилолу. З вищезазначених результатів можна зробити висновок, що застосування підсинювального реагенту дає змогу отримати більш чіткі і насичені кольором зрізи, чітко виділяючи при цьому структуру ядра та інших тканинних елементів; дозволяє більш точно диференціювати морфологію рослинних включень при дослідженні м'ясних фаршів; запобігати змиванню зрізів зі скелець при наступних етапах фарбування та економити час експозиції. Висновки. 1. При використанні підсинювального реагенту "Bluing reagent" Richard-Allan Thermo Scientific покращилось контрастування тканинних елементів і диференціація ядерних структур. 2. Більш виражена структура та кольорова насиченість при фарбуванні рослинних компонентів у м'ясних фаршах. 3. При застосуванні Bluing reagent" Richard-Allan Thermo Scientific обробка препарату реагентом займає 1 хвилину, в порівнянні з 5 хвилинами для інших реагентів та 10 хвилинами обробки для водопровідної води. 35 40 45 50 Джерела інформації: 1. Волкова О. В., Елецкий Ю. К. Основы гистологии с гистологической техникой. - Москва, "Медицина". 1982. - 303 с. 2. ГОСТ 2156-76 ГОСТ 2156-76 "Натрий двууглекислый._Технические условия". 3. Деркач Ф. А. Хімія. - Львів. Львівський університет, 1968. - 312 с. 4. Коржевский Д. Э., Гиляров А. В. Основы гистологической техники. - Санкт-Петербург: СпецЛит. 2010. -93 с. 5. Лидин Р.А. и др. Химические свойства неорганических веществ: Учебное пособие для вузов. — 3-е изд., испр. - М.: Химия, 2000. — 480 с. 6. Ложкіна О. В., Меженська Н.А.,Калиновська I. Г. та ін. / Методичні вказівки з визначення всіх видів м'ясної сировини, напівфабрикатів та готової продукції з м'ясної сировини / К., ДНДІ ЛДВСЕ, 2010. - 43 с 7. Старосельська А. Л. Комплексне дослідження м'ясних продуктів за допомогою мікробіологічних і гістологічного методів / А. Л. Старосельська// Вісник Сумського національного аграрного університету. - 2015. - Вип. 1 (36).-С 90-92. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 Спосіб покращення контрастування та кольорового насичення при фарбуванні гістологічних зрізів гематоксилін-еозином, який відрізняється тим, що як підсинювальний реагент використовують засіб "Bluing reagent" Richard-Allan Thermo Scientific, який містить (в мас. %): метанол - 50; вода - 48; гідрокарбонат натрію - >1; сульфат магнію - 1 та бромід амонію - >1. 2 UA 108982 U Комп’ютерна верстка М. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3