Спосіб діагностики недостатності лютеїнової фази оваріального циклу при безплідді трубно-перитонеального ґенезу

Реферат: Спосіб діагностики недостатності лютеїнової фази менструального циклу при безплідді трубноперитонеального ґенезу включає визначення в менструальній крові вмісту альфа-2мікроглобуліну фертильності та при показниках альфа-2-мікроглобуліну фертильності від 4000 нг/мл до 12000 нг/мл діагностують недостатність лютеїнової фази менструального циклу. UA 110329 U (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ НЕДОСТАТНОСТІ ЛЮТЕЇНОВОЇ ФАЗИ ОВАРІАЛЬНОГО ЦИКЛУ ПРИ БЕЗПЛІДДІ ТРУБНО-ПЕРИТОНЕАЛЬНОГО ҐЕНЕЗУ UA 110329 U UA 110329 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі клінічної медицини, а саме до акушерства і перинатології, та може бути застосована з метою діагностики недостатності лютеїнової фази менструального циклу при безплідді трубно-перитонеального ґенезу. Суть способу полягає в тому, що у жінок трубно-перитонеальною формою безпліддя для діагностики недостатності лютеїнової фази поряд з визначенням прогестерону у сироватці крові (на добу +7 після овуляції або на добу +8 після піку лютеїнізуючого гормону) додатково проводять аналіз вмісту альфа-2мікроглобуліну фертильності (АМГФ) в менструальній крові (на 2-3 добу менструального циклу). При величинах АМГФ, від 4000 нг/мл до 12000 нг/мл діагностують недостатність лютеїнової фази менструального циклу. Спосіб забезпечує високу точність діагностики, дозволяє не тільки діагностувати недостатність лютеїнової фази, як важливу ознаку оваріальної дисфункції, проте й прогнозувати додаткові фактори інфертильності при безплідді трубно-перитонеального ґенезу, що надає можливість в проведенні своєчасних та оптимальних лікувальнопрофілактичних заходів. Актуальність проблеми корисної моделі пов'язана з тим, що недостатність лютеїнової фази (НЛФ) менструального циклу - одне з серйозних порушень репродуктивного здоров'я жінок. Випадки НЛФ як причини безплідності зустрічаються у 15-32 % пацієнтів клінік з ДРТ, а у жінок із звичним невиношуванням - діагностується в 85 % випадків [Булавенко О.В. Недостатність лютеїнової фази: клініка, діагностика та лікування: автореф. дис. … д-ра мед. наук: 14.01.01. /О.В. Булавенко, 2008. - 34 с.] Отже, рання діагностика недостатності лютеїнової фази менструального циклу, особливо при безплідді трубно-перитонеального ґенезу, при допомозі визначення прогестерону у сироватці крові у лютеїнові фазу та додаткового дослідження альфа-2-мікроглобуліну фертильності (АМГФ) в менструальній крові потенційно дозволить покращити клінічні наслідки клінічного менеджменту інфертильності. Відомо, що для діагностики недостатності лютеїнової фази використовують ультразвукові та гістологічні методи дослідження дослідження [Патент на корисну модель Патент на винахід № 52399 U UA, МПК А61В 8/00. /Абдулаєв Р.А. (UA), Грищенко О.В. (UA), Де Джо Віктор Дункан (UA). № u20101913; Заявл. 22.02.2010; Опубл. 25.08.2010; Спосіб діагностики недостатності лютеїнової фази; Хмельницкий O.K. "Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний". - СПб.: "Сотис", 1994. - С. 115-151]. Проте, недоліком сонографічного дослідження є його низька діагностична цінність, а гістологічне дослідження вимагає спеціальних умов та є інвазивним. Інший спосіб діагностики недостатності лютеїнової фази, полягає у тому, що проводиться дослідження вмісту лімфоцитів з антигенним маркером CD4 та CD8 та обчислення їхнього коефіцієнта та вмісту в крові фактора МІР 1b. При цьому прогностичне значення розвитку недостатності лютеїнової фази має зниження коефіцієнта CD4/CD8 лімфоцитів від нижче 0,8 до 0,5 включно (норма 1,0), МІР 1b від нижче ПО пг/мл до 75 пг/мл включно (норма 130 пг/мл); при розвитку ановуляції - зниження коефіцієнта CD4/CD8 нижче 0,5 (норма 1,0), МІР 1b нижче ПО пг/мл (норма 130 пг/ мл). [Патент на винахід № 89458 С2 UA, МПК А61В 10/00. /Подольський В.В. (UA), Дронова В.Л. (UA), Чернишов В.П. (UA), та ін. № а200813409; Заявл. 20.11.2008; Опубл. 25.01.2010; Спосіб прогнозування розвитку недостатності лютеїнової фази менструального циклу та ановуляції у ВІЛ-інфікованих жінок репродуктивного віку]. Суттєвим недоліком даного способу є те, що він дозволяє отримати наближену характеристику, оскільки показники трансмембранних глікопротеїнів та фактора, який визначає здатність лімфоцитів протистояти проникненню та їх руйнації вірусом імунодефіциту, більше специфічні для ВІЛ-інфікованих жінок. Тобто, динамічні зміни отриманих показників не можуть бути відповідальними суто за порушення, що пов'язані з оваріальної дисфункцією, на відміну від АМГФ [Glycodelin in endometrial flushing fluid and endometrial biopsies from infertile and fertile women /U. Bentin-Ley, A. Lindhard, V. Ravn, et al. //Eur J Obstet Gynecol Reprod BioL-2011. - Vol. 156 (1). - P. 60-66]. Найбільш близьким та вибраним за прототип є спосіб прогнозування фертильної функції жінок з єдиною матковою трубою після позаматкової вагітності. Спосіб полягає у тому, що в перитонеальній рідині, взятій під час лапароскопічної операції, визначають концентрацію АМГФ і при його кількісних значеннях, рівних 2,7 нг/мл і більше, прогнозують відновлення фертильності у вигляді можливості настання вагітності [Патент на винахід № 2219552 RU, МПК G01N 33/573. /Посисеева Л.В. (RU), Воронцов Д.М. (RU), Герасимов A.M. (RU). № 2002103746; Заявл. 18.02.2002; Опубл. 25.01.2010; Способ прогнозирования фертильности женщин с единственной маточной трубой после внематочной беременности]. Недоліками відомого способу є інвазивний метод виконання, що вимагає достатнього інструментального та методичного забезпечення, значна тривалість процедури, потреба у додатковому знеболенні. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу діагностики недостатності лютеїнової фази менструального циклу при безплідді трубно-перитонеального 1 UA 110329 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ґенезу, шляхом визначення вмісту АМГФ в менструальній крові, що дозволить підвищити достовірність та точність результатів дослідження. Підставою для цієї пропозиції була вперше встановлена авторами корисної моделі закономірність, яка полягає в тому, що зниження рівня АМГФ в менструальній крові є одним з найбільш надійних маркерів недостатності лютеїнової фази менструального циклу при трубно-перитонеальній формі безпліддя. Поставлена задача вирішується тим, що у способі діагностики недостатності лютеїнової фази менструального циклу при безплідді трубно-перитонеального ґенезу, шляхом визначення концентрації АМГФ, в менструальній крові, від 4000 нг/мл до 12000 нг/мл діагностують недостатність лютеїнової фази менструального циклу. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у наступному - лабораторні методи дослідження, на які спираються при прогнозуванні гінекологічної патології, базуються на визначенні рівня окремих субстанцій у менструальній крові. При цьому достовірність та точність оцінки діагностики НЛФ залежить від характеристики критеріальних показників, рівень яких визначають у біологічній рідині. Спосіб здійснюється таким чином При розробці запропонованого способу діагностики недостатності лютеїнової фази менструального циклу при безплідді трубно-перитонеального ґенезу були обстежені 50 жінок з трубно-перитонеальною формою безпліддя, які були рандомізовані за віком та особливостями акушерсько-гінекологічного і соматичного анамнезу. Група порівняння складалась з 20 жінок репродуктивного віку на тлі соматичного здоров'я (табл.). Проводилося визначення прогестерону у сироватці крові (на добу +7 після овуляції або на добу +8 після піку лютеїнізуючого гормону) та концентрації АМГФ в менструальної крові (на 2-3 добу менструального циклу). Для визначення вмісту АМГФ в менструальної крові використовувався імуноферментний аналіз на тест-системах з використанням моноклональних антитіл до АМГФ, з використанням діагностичних наборів "АМГФ-Фертитест-М" (виробник ТОВ "Диатех-ЭМ", Росія). Для імуно-гістохімічного дослідження матеріал (менструальну кров, отриману на 2-3 добу менструації) заливали у середовище для заморожування Tissue-Tek (Miles Inc., USA). У подальшому проводили виготовлення кріостатних зрізів товщиною до 5 мкм, які потім фіксували у 4 % параформальдегіді (10 хв) з дофіксацією метанолом (10 хв). Визначення АМГФ проводили методом непрямого імуно-пероксидазного фарбування за допомогою моноклональних антитіл. Як хромоген ми використовували 3,3-діамінобензол. Статистичну обробку даних проводили методами описової статистики і одновимірного однофакторного аналізу (критерій Ст'юдента) з використанням статистичного пакета AnalystSoft Inc., BioStat - Версія 2009. Критична величина рівня значимості для оцінки статистичної значущості прийнята рівною 0,05. При недостатності лютеїнової фази менструального циклу відзначалось прогресивне зменшення як показників АМГФ в менструальній крові, так й сироваткового рівня прогестерону у жінок з безпліддям трубно-перитонеального ґенезу. Середній рівень вмісту в менструальній крові АМГФ був статистично-достовірно нижчим у жінок з безпліддям, проти жінок з групи порівняння (4026,5±624,2 нг/мл проти 34 648,2±4774,6 нг/мл). Подібна статистично-вірогідна тенденція відзначалась й відносно сироваткової концентрації прогестерону у групах дослідження (10,2±2,8 нмоль/л проти 24,6±3,1 нмоль/л (табл.). Приклад 1: Жінка Л., 35 років. Звернулася до медичного центру "Медівін" з діагнозом: Вторинне безпліддя трубно-перитонеального ґенезу. При звернені рівень прогестерону у сироватці крові 8,4 нмоль/л., АМГФ в менструальної крові на 2 добу менструального циклу склав 5060,4 нг/мл. Діагностовано недостатність лютеїнової фази менструального циклу. Приклад 2: Жінка А., 32 роки. Звернулася до медичного центру "РемедіВін" з діагнозом: Вторинне безпліддя трубно-перитонеального ґенезу. При звернені рівень прогестерону у сироватці крові 16,2 нмоль/л., АМГФ в менструальної крові на 2 добу менструального циклу склав 3672,2 нг/мл. Діагностовано недостатність лютеїнової фази менструального циклу. Таким чином, отримані в ході нашого дослідження результати по вмісту АМГФ у менструальній крові можуть відображати формування патологічних ланок недостатності лютеїнової фази, а саме повноцінності функції ендометрію у жінок з трубно-перитонеальною формою безпліддя. Це дозволяє рекомендувати запропонований спосіб діагностики недостатності лютеїнової фази менструального циклу для жінок з безпліддям трубно-перитонеального ґенезу до 2 UA 110329 U використання задля визначення важливого критерію прогнозування стану репродуктивної функції. Таблиця Результати дослідження АМГФ у менструальній крові та прогестерону у сироватці крові (проспективне дослідження), n=70, М+m Групи Основна клінічна група, (n=50) Група порівняння, (n=20) АМГФ, нг/мл 4026,5±624,2* 34 648,2±4774,6 Прогестерон, нмоль/л 10,2±2,8* 24,6±3,1 Примітка - *різниця достовірна відносно групи порівняння (р